宫颈癌中KAI1/CD82、ILK表达变化及与术后复发转移关系研究

宫颈癌中KAI1/CD82、ILK表达变化及与术后复发转移关系研究

郑雪琴，张铁清

目的 研究KAI1/CD82和ILK蛋白在宫颈鳞癌(SCC)组中的表达变化情况，探讨两者与SCC发生发展的相关性。方法 收集20例正常宫颈组织、40例CIN组织及40例SCC组织，应用免疫组织化学方法检测KAI1/CD82 和ILK蛋白的表达，结合临床病理参数及2年的随访资料，分析两者与SCC的复发转移的关系。结果 KAI1/CD82在正常宫颈组、CIN组和SCC组的表达水平均显著降低(P＜0．05)，KAI1/CD82蛋白表达与宫颈癌的分化程度、浸润深度、淋巴结转移及脉管浸润差异密切相关(P＜0．05); ILK在正常宫颈组、CIN组和SCC组的表达水平均显著升高(P＜0．05)，ILK蛋白表达与宫颈癌的浸润深度、淋巴结转移及脉管浸润差异密切相关(P＜0．05);相关性分析表明，两者表达呈现负相关(r =－0．4164，P＜0．05);经Cox比例风险模型，行单因素及多因素分析发现，KAI1/CD82和脉管瘤栓是宫颈癌术后复发的相关因素。结论 (1)KAI1/CD82表达下调和ILK表达上调在宫颈癌的发生发展中可能起到一定作用。(2)KAI1/CD82和ILK在宫颈癌中的表达呈负相关，他们共同参与了宫颈癌的发生、发展和转移。(3)KAI1/CD82可以作为预测宫颈癌根治术后复发转移潜能的参考指标。(4)KAI1/CD82和淋巴结转移是宫颈癌术后复发的独立因素。

宫颈肿瘤; KAI1/CD82; ILK;复发转移

宫颈癌是女性生殖系统最常见的恶性肿瘤之一，不但发病率高，而且近年来有年轻化趋势，严重危害妇女的身心健trial[J]．Annals of Internal Medicine，1997，127(4):267-274．

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[8]俞培敏，徐 军．深静脉置管的细菌学监测[J]．宁波医学，2000，12(7):336．康，复发和转移是影响宫颈癌患者死亡的的主要原因，因此研究宫颈癌复发和转移的机制，寻求宫颈癌复发和转移的相关因子以预测宫颈癌的预后，在宫颈癌的治疗史上将会产生重大突破。肿瘤转移抑制因子(KAI1/CD82)是一种新的肿瘤转移抑制基因，在机体广泛分布，全身大部分组织都有表达，特别在前列腺、肝脏、骨髓、肺脏、胎盘等组织中，有很高的丰度。近年来关于KAI1/CD82与宫颈癌关系的报道较多，目前仍在研究中，国内外学者就其与宫颈癌转移的关系提出各种不同的研究结论[1-3]。整合素连接酶(ILK)是一种癌基因，存在于人体的多种正常组织中，ILK的上调与人类的多种肿瘤有关，国内外许多学者研究ILK在人类多种肿瘤中，如前列腺癌、肺癌、结肠癌、黑色素癌及卵巢癌等组织中均有高表达[4-5]，关于ILK与宫颈癌的文献报道不多。本研究采用免疫组化方法，分别检测正常宫颈组织、宫颈上皮内瘤变组织和宫颈癌组织中KAI1/CD82基因和ILK基因的表达变化情况，分析两者与宫颈癌患者的临床病理检查结果之间相互关系，结合宫颈癌的复发转移病例，进一步探讨宫颈癌根治术后复发转移的参考指标，为临床治疗宫颈癌的研究提供一些理论依据。

1 资料与方法

1．1资料 收集我院2008年1月－2009年12月存档的石蜡包埋的宫颈组织标本共100例，其中正常对照组20例，均为子宫良性病变而行的全子宫切除术或宫颈锥形切除术的宫颈组织，宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia，CIN)组40例，其中CINⅠ组14例，CINⅡ－Ⅲ组26例;宫颈鳞状上皮细胞癌(squamous cell careinoma，SCC)组40例，其中宫颈癌组均为宫颈癌根治术术后的宫颈组织。宫颈癌患者年龄32～63岁，中位年龄45．5岁，SCC按照FIGO(1995)临床分期标准:Ⅰa期15例，Ⅰb－Ⅱa期20例，Ⅱb－Ⅲ期5例。有淋巴结转移12例，无淋巴结转移28例。按照WHO细胞分化标准:高分化15例，中分化11例，低分化14例。

1. 2 方法 采用免疫组化(Envision法)，按鼠疫组织化学SABC试剂盒说明书进行，并略加修饰。浓缩型KAI1鼠单克隆抗体和浓缩型ILK鼠单克隆抗体，购自武汉博士德生物工程有限公司。对照染色:以试剂盒提供的正常宫颈阳性切片为阳性对照。阴性对照:以TBS液代替一抗孵育已知阳性组织切片，染色结果阴性。

1. 3染色结果判定 采用半定量评分法，以细胞膜或细胞浆出现棕黄色颗粒，按染色阳性细胞所占的百分比评分:阳性细胞数≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，51% ～75%为3分，＞75%为4分。根色强度进行评分:无显色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分。取两指标项评分的乘积作为染色结果的评判标准: 0分为阴性(－)，1 －3分为弱阳性(+ )，4－6分为阳性(+ + )，大于6分为强阳性(+ + + )。

1. 4术后随访 自手术之日起为随访开始时间，至复发转移或患者死亡，未复发转移者统一随访2年，统计复发及生存期情况。

1. 5统计学方法 所有数据输入计算机，应用SPSS17．0软件包进行统计分析，应用χ2检验或Fisher确切概率法检验，两者的相关性用Spearman等级相关法进行分析，复发风险采用单因素及多因素Cox比例风险模型进行分析，统计检验以P＜0．05为有统计学差异。

2 结果

2. 1 KAI1/CD82和ILK在3组中的表达 KAI1/CD82在正常宫颈组、CIN组和SCC组中的阳性表达率分别为100% (20/20)、65% (26/40)、30% (12/40)呈递减趋势，染色强度逐渐变浅，3组间比较，差异有统计学意义(χ2= 35．394，P＜0．01)。ILK在正常宫颈组、CIN组和SCC组中的阳性表达率分别为10% (2/20)、67．5% (27/40)、82．5% (33/40)呈递增趋势，3组间比较，差异有统计学意义(χ2= 30．603，P＜0. 01)。见表1。

表1 KAI1/CD82和ILK在正常宫颈组、CIN组、SCC组中的表达

2. 2 KAI1/CD82和ILK与宫颈癌的临床病理参数的关系

KAI1/CD82蛋白在宫颈癌组织中，随着患者的组织分化恶性程度的增加、肿瘤浸润深度的增加、淋巴结转移的增加以及脉管浸润的增加，该蛋白表达逐渐降低，差异具有统计学意义(P＜0．05);特别在淋巴结转移和脉管浸润组中的表达差异有显著的统计学意义(P＜0．01)，ILK蛋白在宫颈癌组织中，随着患者肿瘤浸润深度增加、淋巴结转移的增加及脉管浸润的增加，该蛋白表达明显增高，差异具有显著统计学意义(P ＜0．01)。见表2。

表2 KAI1/CD82和ILK与临床病理参数的关系

2. 3预后因素分析 经过2年随访，共计9例(22. 5%)复发，死亡4例(10%)。对各因素进行Cox单因素和多因素模型分析，结果显示，KAI1/CD82和淋巴结转移是宫颈癌复发和转移的独立因素。见表3～表4。

表3 宫颈癌复发的单因素分析

表4 宫颈癌复发的多因素素分析

3 讨论

KAI1/CD82基因是跨膜4超家族(TM4SF)成员之一，主要通过抑制癌细胞的运动和侵袭力，从而抑制肿瘤细胞的转移。KAI1/CD82蛋白具有4个高度保守的疏水跨膜功能区和一个大的细胞外N－糖基化功能区[6]，在细胞外有3个潜在的糖基化结合位点，在细胞膜内侧有4个氨基酸内环和1个羧基尾巴，与本家族的其他成员如ME491/CD63，MRP/CD，CD37之间相互交联，还可以和HLA．DR或VLA．1形成复合体或四分子交联体，它可以和整合素家族的α3β1，α4β1，α5β1，α6β1，αLβ2等多种分子结合，或EGFR，ErbB2，Erb3等多种表皮生长因子受体结合，在细胞表面形成大的复合体[7]，参与细胞的增殖。KAI1/CD82蛋白还可以和LFA－1(一种黏附素)结合[8]，使由LFA－1/ICAM－1介导的信号通路发生改变，降低Jurkat细胞系之间的粘附聚集作用。KAI1/CD82还可以直接调节整合素介导的细胞与细胞外基质之间的粘附作用，而使细胞间质粘附能力发生变化，因而有降低肿瘤转移的可能。

本资料结果示，KAI1/CD82表达降低与宫颈癌的发生发展有关一定关系，KAI1/CD82蛋白在宫颈癌的前期病变中已经下调，在宫颈病变的一开始就已经下调，并在宫颈病变的整个过程中起作用。KAI1/CD82随着患者的组织分化程度的增加，肿瘤浸润深度增加、淋巴结转移的增加以及脉管瘤栓的增加，该蛋白表达逐渐降低，差异具有统计学意义(P＜0．05);提示KAI1/CD82在宫颈癌的病变进展中具有抑制作用，是宫颈癌术后复发的独立因素。

ILK基因是定位于人类的11P15．5－P15．4上，它含有三个结构域: C端(186－451位氨基酸)C端整合素结合位点，能够磷酸化β1的胞浆结构域[9]，而锚定于整合素，从而介导细胞与细胞外基质的连接，还能磷酸化蛋白激酶B(PKB)和糖原合成酶激酶－3(GSK－3)[10]，也能够自我磷酸化。达到影响细胞的多种生命活动。中间的(180－212位氨基酸)为磷酸肌醇结构域，为血小板－白细胞C激酶底物同源域，能够结合蛋白激酶PI3K，使得ILK充分激活，参与调节激酶自身的活性。N端(33－164位氨基酸)为4个锚蛋白重复序列，介导其与其他信号分子、细胞骨架蛋白间相互作用或与粘着斑蛋白(PIHCH)的LIM结构域结合[11]，对ILK定位到粘着斑有调控作用。ILK通过抑制蛋白激酶B的活性，诱导细胞周期停滞和细胞凋亡，从而抑制肿瘤生长。

本资料结果显示，ILK在宫颈癌的早期病变中就开始其作用，且细胞的异行性越大，ILK表达越强，提示ILK蛋白在宫颈癌的整个发生发展过程中均起作用，表达越高，癌变机会越大。ILK蛋白在宫颈癌组织中，随着患者肿瘤浸润深度增加、淋巴结转移的增加以及脉管浸润的增多，该蛋白表达明显增高，差异具有显著统计学意义(P＜0．01)，提示ILK在宫颈癌的病变进展中起促进作用，与宫颈癌的预后也可能存在一定关系，但ILK不是宫颈癌复发的高危因素。

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Expression of KAI1/CD82 and ILK in cervical carcinoma and its association with postoperative recurrence and me-

tastasis

Objective To study the expression of KAI1/CD82 and ILK in cervical squamous cell carcinoma (SCC)，and to explore the relationship between the two indicators and the development of SCC．Methods Retrospective analysis was conducted in terms of the clinical and pathological data and two years＇follow-up data of 20 cases of normal cervical tissues，40 cases of cervical intraepithelial neoplasia(CIN)and 40 cases of SCC．Expressions of KAI1/CD82 and ILK in those samples were measured with immunohistochemical method and the relationship between the two indicators and the recurrence and metastasis of SCC were analyzed．Results The protein expression levels of KAI1/CD82 in the normal cervical tissues，CIN and SCC were significantly reduced(P＜0．05)．KAI1/CD82 expression was closely related to the differentiation，depth of invasion，lymph node metastasis and vascular invasion of SCC(P＜0．05)，while the protein expression levels of ILK in the three groups were significantly increased(P＜0．05)．The protein expression levels of ILK were related to the depth of invasion，lymph node metastasis and vascular invasion of SCC(P＜0．05)．The protein expression levels of KAI1/CD82 were negatively correlated to ILK(r =－0．4164，P＜0．05); Cox proportional hazards univariate and multivariate analysis showed the protein expression levels of KAI1/CD82 and vascular tumor thrombus were closely related to the recurrence of cervical cancer．Conclusion Downregulating of the expression of KAI1/CD82 and upregulating of ILK have an effect on the development of cervical carcinoma．The protein expression levels of KAI1/CD82 are negatively correlated to ILK，and they are related to the development and metastasis of cervical carcinoma．KAI1/CD82 and ILK can become the postoperative indicators of recurrence and metastasis of cervical carcinoma．Analysis shows that KAI1/CD82 and lymph node metastasis accelerates the recurrence of cervical cancer．

Uterine cervical neoplasm; KAI1/CD82; ILK;Recurrence and metastasis

R737. 33

A

1008-7044(2015)04-0340-03

10．14126/j．cnki．1008－7044．2015．04．013

安徽医科大学附属巢湖医院妇产科，238001

郑雪琴(1978－)，女，安徽巢湖市人，主治医师，研究生。

2015-02-12)

ZHENG Xue-qin，ZHANG Yi-qin．(Affiliated Chaohu Hospital of Anhui Medical University，Chaohu，Anhui 238001，China)

2015-03-02)