■徐进栋 李 玲 修 华 朱连勤 朱风华
(1.青岛农业大学理学与信息科学学院,山东青岛 266109;2.青岛农业大学生命科技学院,山东青岛 266109;3.青岛农业大学外国语学院,山东青岛 266109;4.青岛农业大学动物科技学院,山东青岛 266109)
近几年来由于全球气候变暖,粮食及饲料受霉菌毒素污染较为普遍,尤其由黄曲霉和寄生曲霉产生的黄曲霉毒素具有较强的致癌、致畸和免疫毒性[1-2],因其性质较为稳定,很难消除,动物采食被污染的饲料会降低生产性能,使肝脏和肾脏机能受到损伤[3-4],并且可以残留于肉、蛋、奶等畜产品中,随着食物链的传递和富集进而威胁人类健康。据世界粮农组织(FAO)统计,全世界25%以上的粮食作物受到霉菌毒素不同程度的污染,其中黄曲霉毒素的污染尤为严重[5-8],据程传民2013年调查全国饲料原料黄曲霉毒素的污染率为25.00%~80.80%[9],2014年本实验室对山东省饲料原料黄霉菌毒素调查结果显示,污染率为45.24%,含量为2.0~184.07μg/kg[10]。为了满足畜牧业生产需要,将饲料中霉菌毒素的污染降低到最低限度,本文对2015年山东省饲料黄霉菌毒素的污染情况继续跟踪调查,以便对养殖业和饲料生产企业提供科学的依据。
本试验所用样品,采集时间为2015年1~12月份,来源于山东省各地规模化动物养殖场、饲料厂,样本总数量1 556份,其中,玉米312份、DDGS187份、膨化玉米7份、玉米粉8份、玉米蛋白粉69份、玉米胚芽饼粕31份、玉米皮12份、柠檬酸渣13份、大麦22份、麸皮7份、小麦34份、高粱18份、菜籽饼粕15份、花生饼粕159份、豆粕12份、棉籽粕14份、椰子粕5份、大豆皮5份、酱油糟10份、米糠25份、牛配合饲料168份、禽配合饲料330份、猪配合饲料93份。样品采集方法按GB/T14699.1—2005进行。样品采集后,用四分法缩减取样约200 g,粉碎过20目筛后,装入自封袋内,贴好标签,标明样品名称、采样时间、采样地点,置于-20℃冰箱保存,备用。
利用直接竞争酶联免疫吸附法测定饲料中黄曲霉毒素 B1(AFB1)值,采用 AgraQuant®黄曲霉毒素 B1检测试剂盒提供的方法检测,其定量限和检出限均为2.0μg/kg。按照试剂盒中固体样品前处理方法进行样品的萃取,保证样品萃取液的pH值在6~8之间,除了玉米蛋白粉和DDGS萃取液偏酸性,需用1摩尔的NaOH溶液调pH值至7外,其他样品均在要求范围之内。本方法对不同原料的回收率分别是:玉米91%~102%;大豆87%~114%;小麦87%~103%。实验室内分析C.V≤10%(n=45)。MK3酶标仪为美国Thermo公司生产。
参考《GB 13078—2001》饲料卫生标准,AFB1在饲料原料中玉米、花生饼(粕)、棉籽饼(粕)、菜籽饼(粕)中的限量值为≤50 μg/kg,豆粕≤30 μg/kg,没有AFB1限量标准的其它原料均参照玉米的标准。小鸡、小鸭、小猪配合饲料及浓缩饲料、奶牛精料补充料≤10μg/kg,大鸡、大猪配合饲料及浓缩饲料≤20μg/kg,大鸭配合饲料及浓缩饲料≤15μg/kg,肉牛精料补充料≤50μg/kg。
试验数据采用SAS9.3软件进行统计,描述性统计量采用means过程,频数统计采用freq过程。
表1 玉米及副产品中AFB1检测结果
玉米中AFB1污染率较低,玉米副产品中AFB1污染率最高的为玉米胚芽饼粕,其次为玉米蛋白粉、玉米粉、DDGS和玉米柠檬酸渣,再其次为膨化玉米、玉米皮,所有的玉米副产品中AFB1含量均不超标。
表2 麦类及副产品中AFB1的测定结果
麦类及副产品中AFB1检出率最高的是大麦,其次是小麦,再次是麸皮,未检出。大麦和小麦中AFB1分别检出一份样品,含量为3.90、5.30μg/kg,都不超标。
检测18个高粱样品,AFB1检出率为零。
椰子粕AFB1检出率最高,为100.00%,超标率为60.00%。花生饼粕AFB1检出率为87.42%,超标率为33.09%。棉籽粕和菜籽饼粕AFB1检出率分别为35.71%和20.00%,棉籽粕不超标,菜籽饼粕超标率为33.33%。豆粕和大豆皮均未检出。
表3 饼粕类饲料中AFB1的测定结果
表4 糟糠类饲料中AFB1的测定结果
酱油糟AFB1检出率较高,为60.00%,不超标。米糠AFB1检出率为12.00%,也不超标。
大猪配合饲料AFB1检出率最高,为73.98%,超标率为1.85%。肉牛配合饲料AFB1检出率为51.05%,不超标。小鸭和大鸡配合饲料AFB1检出率分别为33.33%、31.98%,小鸭配合饲料不超标,大鸡配合饲料超标率为3.64%。小鸡、小猪、大鸭配合饲料检出率较低,分别为25.49%、20.00%、15.63%,超标率分别为7.69%、50.00%、0.00%。奶牛配合饲料AFB1未检出。
表5 配合饲料中AFB1的测定结果
季海霞等[11]对2015年全国1~6月份饲料检测结果表明,玉米AFB1污染率为76.19%,最高含量为10.27 μg/kg,玉米副产物污染率为100%,最高含量为14.42 μg/kg,玉米及副产物的超标率均为0.00%。本次试验结果显示,玉米AFB1污染率为6.73%,最高含量为98.60 μg/kg,超标率为14.29%。玉米副产物中AFB1污染率为16.67%~51.61%,最高含量为47.31μg/kg,均在限量标准以下。表明山东省玉米及副产物中AFB1污染率低于全国水平,污染程度高于全国水平,且污染率和污染程度均低于2014年的调查结果[10]。麦类及副产品中AFB1最高污染率为4.55%,远远低于全国79.17%的水平和2014年的污染水平。高粱AFB1检出率为0.00%,同于2014年,表明是较为安全的饲料原料,可以放心使用。糟糠类饲料中酱油糟检出率较高,为60.00%。但最高含量仅为7.68μg/kg,也较为安全。饼粕类饲料中椰子粕AFB1污染率为100.00%,超标率60.00%,较为严重;其次花生饼粕和菜籽饼粕污染率分别为87.42%、20.00%,超标率为33.09%和33.33%。椰子粕的主要产地为印尼和菲律宾,是典型的热带雨林气候,年平均温度24~28℃,降水量丰富,很适合黄曲霉的生长繁殖,导致椰子粕AFB1污染率及超标率较高;花生是我国主要的油料作物和纯出口优势农产品,但花生极易受黄曲霉毒素污染[12-13],黄曲霉毒素污染可发生在生产、储藏、加工等环节,因此花生粕AFB1污染率较高在所难免。
配合饲料中AFB1污染应重点关注猪、鸡配合饲料。污染较为严重的是大猪配合饲料,污染率为73.98%,超标率为1.85%;小猪配合饲料虽然污染率仅为20.00%,最高含量为11.10μg/kg,但超标率为50.00%,表明仔猪配合饲料污染程度较重;大鸡、小鸡配合饲料污染率为31.98%和25.49%,最高含量44.00、10.20 μg/kg,超标率分别为3.64%、7.69%,值得关注。为防止配合饲料的AFB1污染,应该加强饲料原料的监管,严格控制AFB1含量。
山东省饲料原料AFB1污染较轻,重点关注玉米和饼粕类饲料中的椰子、花生及菜籽饼粕;配合饲料应重点关注猪和鸡配合饲料。