高效液相色谱法测定复方丹参片中三七皂苷的含量

赵晓丽 马 艳

河南省驻马店市食品药品检验所，河南驻马店 463000

复方丹参片作为传统的中药制剂，多成分、多靶点是其主要特点［1］，由丹参、三七和冰片三种药组成，临床上具有扩张冠脉、保护心肌、抗心律失常、降血脂等药理作用，在治疗心脑血管系统疾病有明显作用［2-3］。三七是组成复方丹参片的重要药物，三七的主要有效成分是人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1、三七皂苷R1，笔者从事药物检验研究多年，发现有厂家在制剂生产过程中为降低成本偷工减料而降低三七皂苷含量［4］，致使药品质量和疗效产生很大得差异，现为全面考察复方丹参片的质量状况，采用HPLC法，对八个不同厂家的复方丹参片中三七皂苷类成分进行对比研究，过程概述如下。

1 仪器与试药

1.1 仪器与试剂

安捷伦1260高效液相色谱仪（250mm×4.6mm，5μm），BP211D型电子分析天平（上海树信仪器仪表有限公司），FW-80型高速万能粉碎机（鹤壁市鑫天鹤仪器仪表有限公司），电热恒温水浴锅（天津因特莱斯仪器有限公司）。对照品：三七皂苷（批号：110745-201318），中国食品药品检定研究院提供。

1.2 药品分析来源

广州白云山制药、广西日田药业、安徽华佗国药厂、通化颐生药业、济南宏济堂制药、长春新安药业、北京北卫药业、吉林省百年六福堂药业八个厂家所生产的各三个批次的复方丹参片作为质量研究的样品。

2 试验方法

2.1 色谱准备

色谱柱：Thermo-C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-0.05％磷酸溶液梯度洗脱；流速1.0mL/min；柱温17℃，紫外线检测波长：203nm，进样量为20μL。

2.2 试验配置

对照品三七皂苷配置：称取对照品3.0mg，加甲醇得61.00μg/mL。

不同厂家复方丹参片试验品溶液的制备：糖衣片刮去糖衣，研细（过筛），精密0.5g，加入乙醚10mL，超声5min，过滤，滤渣挥干溶剂，称重，过夜，置80℃水浴2h，精密吸取上清液1.00mL，加于StrataTMC18-E固相萃取小柱上进行洗脱，收集洗脱液，水浴蒸干，用甲醇补足丢失，充分混合，滤过，取滤液。

阴性对照配置：按2010版药典［5］中复方丹参片处方，取除三七外的剩余药材制成缺三七的阴性对照品，按上述不同厂商的复方丹参片的试验溶液配置方案进行配置。

2.3 标准曲线

三七皂苷：取标准对照品溶液，分别稀释成82，60、62.35、43.25、32.15、20.25、12.25μg/mL的对照品溶液，进样，按2.1中条件所述测定峰面积。坐标中以信号强度为Y轴，三七皂苷质量浓度为X轴绘成曲线，求得Y=1004.4X-0.7496。r=0.9994，线性范围12.25～82.60μg/mL。见图1。

图1 三七皂苷标准曲线

图2 对照品（三七皂苷）HPLC法色谱图（1表示三七皂苷）

图3 样品HPLC法色谱图（1表示三七皂苷）

图4 空白溶剂HPLC法色谱图

图5 阴性样品HPLC法色谱图

2.4 精密度分析

取对照品溶液20μL，五次进样，测峰面积，计算RSD，得0.51％，表明精密度良好。

2.5 稳定性分析

将2.2项下制备的试验品溶液，24h内每隔4h测定峰面积。峰面积RSD为0.21％，表明在一天内测定是稳定准确的。

2.6 重复性分析

将2.2项下制备的试验品溶液，平行处理6份，按照应用高效液相色谱法测定峰面积。得峰面积RSD为0.81％，说明重复性复合要求。

2.7 样品检测

将2.2项下制备试验品溶液，按照2.1项下色谱条件测定，计算样品含量，每个厂家的三个批次的三七皂苷成分计算取平均值，然后将每个厂家的平均测定值进行对比研究。

表1 不同厂家三七皂苷含量平均值比较（±s）

表1 不同厂家三七皂苷含量平均值比较（±s）

厂家 三七皂苷含量均值 厂家 三七皂苷含量均值广州白云山制药 0.1540±0.0001 济南宏济堂制药 1.3297±0.001广西日田药业 0.1750±0.0001 长春新安药业 1.3912±0.002安徽华佗国药厂 0.7773±0.002 北京北卫药业 1.5217±0.002通化颐生药业 0.8311±0.001 吉林省百年六福堂药业 3.1245±0.001

表2 SNK检验结果

2.8 统计学方法

数据采用SPSS19.0软件进行统计学整理和分析，对八个厂家生产的复方丹参片的三七皂苷含量进行聚类分析，并绘制树状图，厂内不同批次之间进行组内方差检测，应用SNK检验法对各个厂家的样本均值含量两两比较，P＜0.05为差异有统计学意义。

3 结果

3.1 含量比较

8个不同厂家复方丹参片中三七皂苷含量平均值比较，F=155.231，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

3.2 SNK检验结果

北京北卫药业、济南宏济堂与长春新安药业复方丹参片皂苷类含量差异无统计学意义（P＞0.05），安徽华佗、通化颐生药业样品皂苷类含量两两比较后差异无统计学意义（P＞0.05），广州白云山制药与广西日田药业样品皂苷类含量差异无统计学意义（P＞0.05），其余各厂家两两之间差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

4 讨论

复方丹参片中三七药材的比例仅次于丹参，是该复方制剂的重要成分［6-7］，2010年版《中国药典》［8］只规定了丹酚酸B、丹参酮ⅡA的含量限度，对三七皂苷的则无具体限定，而三七皂苷具有肝肾功能保护、抗肺纤维化等作用［9-10］，其成分的含量比例意义重大，故分析三七皂苷类成分含量在复方丹参片质量控制上具有重要的临床意义。

实验结果显示，同一厂家不同批号间含量无统计学差异，然而不同厂家差异很大，其中北京同仁堂样品含量最高，达3.124％，吉林百年六福堂药业生产的样品，含量不足0.3％。不同厂家生产的三七皂苷成分相差10倍之多，这就明显影响了复方丹参片的治疗有效率。刘再娥等［12］的研究显示建议复方丹参片中皂苷含量之和达到0.6％以上能取得较好的临床疗效。

由于同一种药材，不同的产地，不同的品种（野生或栽培），不同的生长环境、土壤、气候等的影响，使药材的质量差异较大，同时，如果生产厂家生产工艺及管理不当，也会造成有效成分得损失［11-13］，所以建议含量较低得厂家，应重视药材的来源及质量，完善制备工艺，提供产品质量。同时现在不乏有为降低成本而偷工减料的厂家，由于三七属于贵细药材，一些厂家为了降低成本，采用少投料，用劣药来降低成本，恶意竞争［14］，对此药品监管部门应引起高度重视。三七皂苷含量目前没有一定的质量标准［15-16］，为了临床用药的有效，建议新版药典添加三七皂苷含量限度，以更好地为临床患者服务。当然，高效液相色谱法分析复方丹参片三七皂苷类成分含量也有一定的不足，这也需要我们进行改进。

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