桃叶鸦葱根中总黄酮的提取工艺

杨辉，王治宝

（河北北方学院药学系，河北张家口075000）

桃叶鸦葱根中总黄酮的提取工艺

杨辉，王治宝

（河北北方学院药学系，河北张家口075000）

测定桃叶鸦葱根中总黄酮的含量，考察总黄酮抗氧化活性。采用正交设计优化总黄酮提取工艺，采用紫外分光光度法测定总黄酮含量。采用碘量法测定不同剂量总黄酮对H2O2的作用，采用分光光度法测定其对·OH的作用。桃叶鸦葱根中总黄酮含量为0.929 4%，相对标准偏差（RSD）=2.87%（n=3）。桃叶鸦葱总黄酮的体外抗氧化作用具有一定剂量依赖性，对H2O2及·OH达到50%清除率所需浓度（IC50）分别为浓度为1.178 g/mL及2.26×10-2g/mL。桃叶鸦葱总黄酮有一定抗氧化作用。

桃叶鸦葱；总黄酮；正交试验；抗氧化

菊科植物桃叶鸦葱（Scorzonera sinensis Lipsch）广泛分布于内蒙古、河北、辽宁等地。具有清热解毒疗疮的功效。桃叶鸦葱主要有苯丙素、木脂素及其苷、倍半萜及其苷、三萜及其苷和黄酮等成分[1-3]。研究发现，鸦葱具有抗肿瘤[4]、抗炎镇痛[5]、抗抑郁[6]等作用。本实验运用正交设计方案，对桃叶鸦葱总黄酮的提取工艺进行了优选，采用紫外分光光度法测定了桃叶鸦葱根中总黄酮含量，并考察了桃叶鸦葱总黄酮体外抗氧化作用。

1 材料

1.1 样品与试剂

药材桃叶鸦葱采自河北赤城县，由河北北方学院中药鉴定室赵恒成教授鉴定为桃叶鸦葱（Scorzonerasinensis Lipsch）。芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）；亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠和乙醇均为国产分析纯；实验用水为去离子水。

1.2 仪器

UV2100型紫外-可见分光光度计：尤尼柯（上海）仪器有限公司；BP211D十万分之一电子天平：赛多利斯科学仪器有限公司；中兴高速万能粉碎机：北京中兴伟业仪器有限公司。

2 方法

取桃叶鸦葱根洗净，60℃烘干，粉碎为粗粉。精密称取桃叶鸦葱根粗粉9份，各10 g，在单因素分析的基础上，选用不同浓度的乙醇溶液为提取溶剂，选取料液比，提取时间，乙醇浓度3个因素，并各设置3个水平，按L9（34）正交表设计实验方案，采用常温超声波提取，提取液过滤后，浓缩，定容至100mL。水平因素见表1，正交表见表2。

表1 提取工艺正交试验的水平与因素Tab le1 Levelsand factorsof the orthogonal test

2.2 含量测定[7]

准确称取芦丁标准品10.0mg，置于100mL容量瓶中，加70%乙醇，溶解后，定容，摇匀摇匀放置6min，再加4%NaOH溶液4.0mL，用70%乙醇定容，摇匀放置15min，以70%乙醇即得标准品溶液。精密吸取标准品溶液0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL，分别置于10mL容量瓶中，加70%乙醇至5mL，加5%NaNO2溶液0.3mL摇匀放置6min，加10%Al（NO3）3溶液0.3mL为空白对照，在510 nm处测定其吸光度值。以吸光度值A为纵坐标，以浓度C（mg/m L）为横坐标，绘制标准曲线。根据标准曲线求得桃叶鸦葱总黄酮含量。按下式计算总黄酮得率。

总黄酮得率=提取液浓度（mg/mL）×稀释倍数×体积（mL）/称取样品干质量（g）×1000

2.3 验证实验

分别称取桃叶鸦葱根粗粉3份，各10 g，依据所选最佳条件提取总黄酮并进行含量测定。

2.4 桃叶鸦葱总黄酮体外抗氧化研究

2.4.1 供试样品的制备

2）实验过程的控制。实验组和对照组的语言活动均按照《新疆维吾尔自治区农村双语幼儿园教育指导纲要（试行）》（新教双〔2017〕16号）中的教学进度实施教学，语言特色活动按照县教育局统一安排的内容进行教学[4]。教学全程使用国家通用语言。两名教师均为某高校非学前教育专业支教教师，汉族，学历均为全日制本科，教龄相当。实验时间均为一学期，后测时间及测试内容相同。实验组在国家通用语言教学中采用的教学流程如图1所示。

取一定量的桃叶鸦葱根粗粉，按照所选最佳条件提取总黄酮，减压浓缩，定容到每毫升相当于0.05 g总黄酮。

2.4.2 对H2O2的影响

采用碘量法[8]测定。每个样品平行测定3次，取其平均值。结果按下式计算：

式中：V0为阴性对照消耗Na2S2O3的体积，mL；V1为阳性对照消耗Na2S2O3的体积，mL；V2为样品消耗Na2S2O3的体积，mL。

2.4.3 对·OH的影响

根据文献[9]进行，并稍作修改。每个样品平行测定3次，取其平均值。结果按下式计算：

式中：A2为样品的吸光度；A11为溶剂的吸光度；A1为对照组的吸光度。

3 结果

3.1 正交试验结果

正交试验结果见表2。

表2 L9（34）正交表及实验结果Table2 The resultsof the orthogonal test

由表2可知超声提取桃叶鸦葱根中总黄酮的最佳工艺条件为A3B2C3，即料液比为1∶30 g/mL，乙醇浓度为70%，提取120min。方差分析见表3，表明，从桃叶鸦葱根中提取总黄酮以乙醇浓度影响最大，其次为提取时间，料液比影响最小。

表3 桃叶鸦葱根中总黄酮提取率方差分析Table3 Variance analysisof the flavonoidsextraction yield from the rootof scorzonera sinensis

3.2 验证实验

验证实验结果表明桃叶鸦葱根中的总黄酮平均含量为0.929 4%（n=3，RSD=2.87%）。

3.3 桃叶鸦葱总黄酮体外抗氧化作用

对H2O2及·OH的影响结果见表4。

由表4可知，桃叶鸦葱总黄酮对H2O2有一定的清除作用，并呈现一定的剂量依赖关系，但清除作用较弱；桃叶鸦葱总黄酮对·OH有较强的清除作用，并呈现一定的剂量依赖关系。

表4 桃叶鸦葱总黄酮对H2O2及·OH的影响Table4 Theeffectof flavonoidsof scorzonera sinensison H2O2and·OH

4 结论与讨论

本研究采用正交试验探索桃叶鸦葱根中总黄酮的提取工艺，结果发现采用30倍量的70%乙醇作为提取溶剂超声辅助提取120min，提取率可达到0.9%。优选得到的桃叶鸦葱总黄酮提取工艺简单，具有良好的稳定性。

桃叶鸦葱安全无毒，为药食两用的植物，本实验研究发现桃叶鸦葱总黄酮有一定抗氧化作用，为将桃叶鸦葱开发为抗氧化剂及功能食品提供了一定的参考。

[1]王斌,李国强,管华诗．蒙古鸦葱挥发油成分元素的GC-MS和ICP[J].时珍国医国药,2007,18(10):2364

[2]Paraschos Sotiris,MagiatisProkopios,KalpoutzakisEleftherios,etal. Three new dihydroisocoumarins from the Greek endemic species Scorzonera cretica[J].NatProd,2001,64(12):1585

[3] Christian Zidorn,ErnstP.Ellmerer,Sonja Sturm,etal.Tyrolobibenzyls E and F from Scorzonera humilis and distribution of caffeic acid derivatives,lignans and tyrolobibenzyls in European taxa of the subtribe Scorzonerinae(Lactuceae,Asteraceae)[J].phytochemistry, 2003,63(1):61

[4]王斌,杨立业,李国强,等．蒙古鸦葱抗肿瘤三萜类成分研究[J]．中国药学杂志,2012,45(10):727

[5]曾春萍．桃叶鸦葱抗炎镇痛作用的实验研究[J]．天津中医药,2010, 27(6):515

[6]杨辉,李秀荣．桃叶鸦葱抗抑郁作用的实验研究[J]．中成药,2011, 33(9):1588

[7]李喜凤,郝哲,杜云锋．蒲公英中总黄酮提取工艺的研究[J]．时珍国医国药,2009,20(7):1695

[8]彭雪萍,马庆一,刘艳芳,等．苹果废渣中天然抗氧化物的提取、分离及活性研究[J]．食品工业科技,2006,27(11):111

[9]曹燕,庞市宾,徐磊,等．金鸡菊提取物体外抗氧化活性[J]．中国实验方剂学杂志,2011,17(12):144

Study on Extraction of Flavonoids from Scorzonera Sinensis Lipsch

YANGHui，WANGZhi-bao
（Pharmacy Department，HebeiNorth University，Zhangjiakou 075000，Hebei，China）

To determine the content of Flavonoid in scorzonera sinensis.To observe Antioxidative activity of scorzonera sinensis Flavonoid.The best method was chosen to carry on orthogonal design for extraction technology.UVwere used to determine the contentof Flavonoid.Iodometric and Spectrophotometrywere used to determine the effects of Flavonoid on H2O2and·OH.The Flavonoid in scorzonera sinensiswas0.929 4%，RSD= 2.87%（n=3）.The IC50on H2O2and o OH were 1.178 g/mL and 2.26×10-2g/mL.Flavonoid of scorzonera sinensishasa strongability to resistanceoxidation.

Scorzonera sinensis；flavonoid；orthogonaldesign；antioxidative

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.05.009

2014-01-25

河北省高等学校科学技术研究项目（Z 2013006）

杨辉（1972—），男（汉），副教授，硕士，主要从事中药化学教学科研工作。