谭蓉, 张聪, 杨秀芳*, 孔俊豪
(1.中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院,浙江杭州 310016;2.浙江省茶资源跨界应用技术重点实验室,浙江杭州 310016)
由于饮食结构不均衡等原因,我国高血脂症(Hyperlipidemia)的发病率逐年升高,同时伴随着动脉粥样硬化、冠心病等多种并发症,对公众健康造成严重威胁。黑茶属后发酵茶,是六大茶类之一,对高血脂症等诸多心血管疾病有着其他茶类所不具有的药理作用[1-3]。六堡茶是著名黑茶品种,原产于广西,历史悠久,因其独特口味及降脂保健功效而深受市场欢迎[4-10]。
茶黄素 (Theaflavins, TFs)和儿茶素(Catechins,Cs)亦能够调节血脂[11-12]。绞股蓝[Gynostemma Pentaphgllum (Thunb)Makino]则是治疗高血脂症的名贵中草药,主要成分为绞股蓝皂苷(Gypenosides, GPs)[13-14]。本研究以茶黄素、儿茶素、绞股蓝皂苷和六堡茶提取物为原料自拟复方茶汤[15],对高脂血症大鼠模型进行干预,检测分析大鼠各生化指标水平,以期为开发降血脂功能性食品提供技术参考。
茶黄素(纯度≥20%):浙江派诺生物技术有限公司;儿茶素(纯度≥30%):浙江东方茶业科技有限公司;绞股蓝皂苷(纯度≥35%):自制;六堡茶水提物:中华全国供销合作总社杭州茶叶研究院六堡茶研究中心。总胆固醇(TC)试剂盒、甘油三酯(TG)试剂盒、高密度脂蛋白(HDL-C)试剂盒、低密度脂蛋白(LDL-C)试剂盒、天门冬氨酸转氨酶(AST)试剂盒、丙氨酸转氨酶(ALT)试剂盒:宁波美康生物科技有限公司。高脂饲料:购自浙江省医学科学院实验动物中心。
清洁级雄性SD 大鼠60 只,体重200±20 g,购自浙江省医学科学院实验动物中心 (动物质量合格证号:0008677,许可证号:SCXK (浙)2008-0033)。于室温23±2℃、相对湿度50%~70%环境中饲养,自由饮食饮水。
ACCUTE TBA-40FR 全自动生化分析仪:东芝三厂医疗株式会社;FASCO-3010D 全自动血流变仪、EHK 血沉压积仪:重庆维多科技有限公司;DDL-5 低速冷冻多管离心机:上海安亭科学仪器厂。
1.3.1 分组与给药
将大鼠适应性喂养7 d后,称重,禁食12 h后眼眶静脉丛采血,测定血清中TC 含量,根据TC水平随机分为6组,每组10 只,即正常对照组、模型对照组、阳性对照组(依折麦布1.0 mg/kg)、复方茶汤低剂量组(18.38 mg/kg)、复方茶汤中剂量组(36.75 mg/kg)、复方茶汤高剂量组(55.13 mg/kg)。所有大鼠均给予高脂高糖饲料,自由采食饮水。自造模第l天起,除正常对照组和模型对照组灌服蒸馏水外,其余各给药组分别灌胃给予相应剂量的药物,每日1次,灌胃容积为1 mL/100 g 体重,连续6周。给药6周后大鼠禁食12 h,眼眶静脉丛取血,一份加入肝素制备抗凝血,另一份离心取血清。
1.3.2 指标检测
体重测定:试验期间每3 d 称重一次,并根据体重调整给药量。
血液生化学指标检测:给药6周后,全自动生化分析仪检测大鼠血清血脂生化指标(TC、TG、LDL-C、HDL-C),肝功能生化指标(AST、ALT)。
血液流变学指标:给药6周后,肝素抗凝管接取4 mL 全血,立即轻摇试管,防止血液凝固。采血后立即测定血流变各项指标,采用FASCO-3010D 全自动血流变仪检测6个不同切变率(200 s-1,150 s-1,50 s-1,30 s-1,3 s-1,1 s-1)下的全血粘度(ηb),血浆粘度(ηp);采用 EHK 血沉压积仪测红细胞压积(HCT)、血沉;计算求各切变率(200 s-1,150 s-1, 50 s-1)下的全血还原粘度(BRV),卡松粘度、红细胞聚集指数(AI)、红细胞变形指数(TK)、红细胞刚性指数(RI)、红细胞电泳时间(EI)数值等。
采用SPSS 18.0 软件对数据进行ANOVA 单因素方差分析,计量资料数据以±S表示
与正常对照组相比,在造模39 d后,模型对照组大鼠体重显著增加。与模型对照组相比,给药42 d 后低剂量(18.38 mg/kg)组、中剂量(36.75 mg/kg)组大鼠体重显著降低;给药39 d后高剂量(55.13 mg/kg)组大鼠体重显著降低;说明复方茶汤能够抑制高血脂症大鼠体重上升,摄入高剂量的复方茶汤甚至能使高血脂症大鼠体重低于正常水平,见图1。
与正常对照组相比,在高脂造模6周后,模型对照组大鼠血清TC、LDL-C 含量显著升高 (P<0.01)。与模型对照组相比,复方茶汤低剂量(18.38 mg/kg)组、中剂量(36.75 mg/kg)组大鼠血清TC 含量显著降低(P<0.01);试验茶汤的三个剂量组大鼠血清 TG、LDL-C 含量显著降低 (P<0.05),HDL-C 含量升高(P<0.01);说明复方茶汤能有效缓解大鼠高血脂症状,使其血脂指标恢复正常水平,见表1。
图1 复方茶汤对高血脂症大鼠体重的影响Fig.1 Effect of compound tea beverage on body weight of hyperlipidemic rats
表1 复方茶汤对高血脂症大鼠血脂指标的影响(单位:mmol/L)Table 1 Effects of compound tea beverage on serum lipid level of hyperlipidemic rat(Unit:mmol/L)
与正常对照组相比,模型对照组大鼠血清AST 活性显著升高;表明高脂高糖饲料对大鼠肝功能造成了一定损伤并影响其机能。与模型对照组相比,试验茶汤低剂量(18.38 mg/kg)组、高剂量(55.13 mg/kg)组大鼠血清AST 活性显著降低(P<0.05),表明复方茶汤能够修复高脂高糖饮食造成的肝功能损伤,使其恢复至正常水平,见表2。
表2 复方茶汤对高血脂症大鼠肝功能指标的影响(单位:U/L)Table 2 Effects of compound tea beverage on liver function index of hyperlipidemic rat(Unit:U/L)
表3 复方茶汤对高脂血症模型大鼠ηb 的影响(单位:mpa.s)Table 3 Effect of compound tea beverage on ηb level in hyperlipidemic rat(Unit:mpa.s )
表4 复方茶汤对高脂血症模型大鼠BRV、ηp、卡松粘度的影响Table 4 Effect of compound tea beverage on BRV,ηp and ηc level in hyperlipidemic rat
表5 复方茶汤对AI、TK、RI、EI、红细胞压积、血沉的影响Table 5 Effect of compound tea beverage on AI、TK、RI、EI,hematocrit and ESR level in hyperlipidemic rat
如表3、4所示,与正常对照组相比,模型对照组大鼠各项血流变指标均无明显改变。与模型对照组相比,试验中剂量组大鼠低切变率下(1 s-1)全血粘度、50 s-1切变率下全血还原粘度、卡松粘度均显著降低,表明摄入中剂量的复方茶汤能够改善高血脂症大鼠的血液粘度。如表5所示,与正常对照组相比,模型对照组大鼠血沉指数上升。与模型对照组相比,试验低剂量组大鼠红细胞变形指数、红细胞刚性指数显著上升,表明摄入低剂量的复方茶汤也能一定程度上改善高血脂症大鼠的血液流变性。
采用高脂高糖喂养建立高脂血症动物模型,模型大鼠血清TC、LDL-C 含量显著升高,说明高脂血症模型造模成功;同时发现其血清AST 活性和肝脏指数明显升高,显示出该模型发生了一定程度的肝损伤,推测可能为脂肪肝病理改变。因此,本研究中采用高脂高糖喂养建立的高脂血症动物模型,伴随一定程度肝损伤。
血脂是血浆中性脂肪(甘油三酯和胆固醇)和类脂(磷脂、糖脂、固醇、类固醇)的总称。甘油三酯直接参与机体能量代谢,胆固醇能够合成细胞浆膜、类固醇激素和胆汁酸;机体内的胆固醇来源于食物摄取及生物合成。食物中的胆固醇(包括游离型和酯化型)被消化液中的胆固醇酯酶水解为游离胆固醇后被吸收,随后在小肠粘膜中被胆固醇酰基转移酶(ACAT)催化并重新酯化,形成胆固醇酯,最后与载脂蛋白结合形成乳糜微粒,经由淋巴系统进入血循环[16]。因此现代医学将TC、TG、LDL-C、HDL-C 作为评价血脂的指标[17]。试验中,复方茶汤的三个剂量均能降低大鼠血清TG、LDL-C 水平,升高HDL-C 水平;低、中剂量能降低血清TC 含量。试验表明复方茶汤具有明显的降血脂药效作用,其中低剂量降脂作用较优。
肝脏是人体合成内源性甘油三酯及胆固醇的主要场所,同时也是脂肪酸进行β氧化最活跃的部位[18]。 谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)存在于肝细胞的细胞核及线粒体中,当肝细胞受损时,肝细胞内的ALT、AST 释放入血,故血清ALT、AST 活性升高。因此,血清这两种酶的活性升高成为肝功能受损的特异性指标。试验中复方茶汤的低、高剂量能降低大鼠血清AST 活性,说明其具有一定的保肝作用。
血液流变学的异常与高脂血症的发生与发展有密切的关系[19]。血液是悬浮液系统,血液粘度是血流量的倒数,表征血液流动的阻力,是反映血粘滞程度的重要指标。全血粘度包括高切变率(粘度200 s-1、粘度 150 s-1)、中切变率(粘度 50 s-1、粘度30 s-1)、低切变率(粘度 3 s-1、粘度 1 s-1)下的血液表观粘度值。卡松粘度是血液在无限大切变率下的表观粘度值。高切变率下的全血粘度与卡松粘度相关,反映红细胞的变形性的大小;低切变率下的全血粘度与卡松屈服应力相关性显著,反映红细胞的聚集性,血沉及血沉方程K 值也可反映红细胞聚集性的高低。红细胞压积又称红细胞比积,红细胞压积增加,常导致全血粘度增加,呈现血液高粘滞综合症。由于血液粘度受红细胞压积的影响,全血还原粘度是为了消除红细胞压积的影响,比较不同血样的粘度。血浆粘度的特点是不随着切变率的变化而变化,血浆粘度升高,全血粘度增高。试验中复方茶汤的中剂量能降低大鼠低切变率下(1 s-1)全血粘度、50 s-1切变率下全血还原粘度、卡松粘度等,说明复方茶汤具有一定的改善血液粘度的作用,有助于改善高血脂症状,但该作用还需进一步应用高粘血症动物模型来深入研究。
综上所述,本研究中复方茶汤能够显著降低高脂血症大鼠血清 TC、TG、LDL-C 含量,升高HDL-C 含量;降低AST 活性;减轻大鼠体重。因此,该复方茶汤具有一定的调节血脂和保肝作用,其中低剂量降脂保肝作用较优。日常生活中,除注意膳食平衡,加强体育锻炼外,饮用该复方茶饮,对调节血脂具有一定功效。
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