深静脉血栓形成中医证型与黏附因子的相关性研究

张　玥，于婷婷，刘　政，王雁南，张玉冬

深静脉血栓形成中医证型与黏附因子的相关性研究

张玥，于婷婷，刘政1，王雁南1，张玉冬1

目的：探讨深静脉血栓形成（DVT）不同中医证型与黏附因子的关系。方法：将70例DVT患者按中医辨证分为湿热下注组（A组）、血瘀湿重组（B组），并设正常对照组（C组）30例，检测各组细胞间黏附因子-1（ICAM-1）、P-选择素和E-选择素的水平。结果：ICAM-1在湿热下注组、血瘀湿重组及正常对照组水平分别是（194.746±18.237）ng/mL、（206.742± 23.361）ng/mL、（160.435±23.410）ng/mL，DVT各组ICAM-1水平显著高于正常对照组（P＜0.01），血瘀湿重组ICAM-1水平高于湿热下注组（P＜0.01）；P-选择素在3组水平是（54.093±6.606）ng/mL、（49.889±7.363）ng/mL、（31.166±6.945）ng/mL，依次降低（P＜0.05，P＜0.01）；E-选择素在3组的表达水平分别为（64.125±8.482）ng/mL、（30.975±8.723）ng/mL、（27.465±4.934）ng/ mL，湿热下注组高于血瘀湿重组及正常对照组（P＜0.01，P＜0.05），但血瘀湿重组与正常对照组相比无明显差异（P＞0.05）。结论：黏附因子与深静脉血栓形成的中医证型之间存在一定的关系，而ICAM-1、P-选择素和E-选择素的水平高低可协助中医辨证。

细胞间黏附因子-1；P-选择素；E-选择素；深静脉血栓形成；中医辨证分型

深静脉血栓形成（deep venous thrombosis，DVT）是血液在深静脉内异常凝结导致的静脉回流障碍性疾病，细胞黏附因子（cell adhesion molecules，CAMs）作为参与细胞间及细胞与细胞外基质之间黏附作用的分子，在其发生、发展中占有重要的作用[1]。2012年7月—2013年2月，我们通过检测70例不同中医证型DVT患者细胞间黏附因子-1（intercellular adhesions molecule-1，ICAM-1）、P-选择素及E-选择素的表达水平，探索其与中医辨证分型的内在联系。

1　资料与方法

1.1一般资料本组共70例，均符合DVT的诊断标准[2]。其中男41例，女29例；病变位于左下肢42例，右下肢25例，双下肢3例。周围型24例，中央型7例，混合型39例。参照中医辨证分型标准[3]由两位高年资主治以上中医师根据患者的症状、体征进行中医证型的判定，判定结果一致时确认为该证型，并由副主任中医师或者主任中医师抽审复核。判定的证型分别为湿热下注型（A组）和血瘀湿重型（B组），设立健康查体对照组30例为C组。排除合并下肢溃疡，近2周内有出血者，妊娠期妇女，合并心、脑、肺疾病及肝、肾功能异常等严重并发症者。各组性别、年龄比较均无显著差异性（P＞0.05），具有可比性。见表1。

表1　各组性别、年龄比较（n,±s）

表1　各组性别、年龄比较（n,±s）

组别A组B组C组n 40 30 20男性24 17 11女性16 13 9年龄（岁）53±10 53±14 52±14

1.2检测指标及检测方法采清晨空腹静脉血3 mL，经3000 r/min离心5 min，取血清-30℃保存。以ELISA方法测血清ICAM-1、P-选择素、E-选择素。试剂盒由上海森雄科技实业有限公司提供。各项操作均严格按说明操作。

1.3统计方法采用SPSS 19.0软件统计。连续变量经检验符合正态分布，采用t检验，用(±s)形式表示，多组间比较用方差分析；分类变量采用χ2检验；P＜0.05认为差异有统计学意义。

2　结果

2.1血清ICAM-1DVT组ICAM-1水平明显高于C组（P＜0.01）。与B组比较，A组ICAM-1水平明显降低（P＜0.05）。见表2。

2.2血清P-选择素DVT组P-选择素水平明显高于C组（P＜0.01），A组、B组、C组P-选择素水平依次降低，A组高于B组（P＜0.05）。见表3。

2.3血清E-选择素E-选择素水平A组明显高于C组（P＜0.05），B组与C组无明显差异性。与B组比较，A组高于B组（P＜0.01）。见表4。

表2　DVT各组与对照组血清ICAM-1水平比较（n，ng/mL，±s）

表2　DVT各组与对照组血清ICAM-1水平比较（n，ng/mL，±s）

注：与C组比较，aP＜0.01；与B组比较，bP＜0.05

组别A组B组C组n 40 30 30 ICAM-1 194.746±18.237a、b206.742±23.361a160.435±23.410

表3　各组血清P-选择素水平比较（n，ng/mL，±s）

表3　各组血清P-选择素水平比较（n，ng/mL，±s）

注：与C组比较，aP＜0.01；与B组比较，bP＜0.05

组别A组B组C组n 40 30 30 P-选择素54.093±6.606a、b49.889±7.363a31.166±6.945

表4　各组血清E-选择素水平比较（n，ng/mL，±s）

表4　各组血清E-选择素水平比较（n，ng/mL，±s）

注：与C组比较，aP＜0.05；与B组比较，bP＜0.01

组别A组B组C组n 40 30 30 E-选择素64.125±8.482a、b30.975±8.723 27.465±4.934

3　讨论

血液因各种原因在深静脉系统内由液体转化为固体，不但阻塞血液回流，而且引起静脉壁的炎性改变，从而引发深静脉血栓形成。在血栓部位有大量的血小板和白细胞聚集，CAMs做为细胞间、细胞与细胞外基质之间发生黏附的媒介,使血细胞在血管内皮细胞上黏附、聚集[4]，从而对血栓形成起着关键的作用。

本研究结果显示，DVT患者血清ICAM-1、P-选择素、E-选择素水平升高，提示CAMs通过介导血小板、内皮细胞、白细胞等细胞与细胞之间、细胞与细胞外基质的相互作用，广泛参与了血栓的形成与溶解过程，在静脉血栓的发生、发展过程中扮演了重要的角色。三种黏附因子的的参与机制不尽相同，其中E-选择素仅在细胞因子激活时内皮细胞表达。当血管内皮细胞受到肿瘤坏死因子-α、白介素-1 β或脂肪酶等激活后4～6 h，即可有E-选择素表达[5]。随着E-选择素的表达增加，其通过与白细胞表面的葡萄糖蛋白结合，使血管内快速流动的白细胞运动减慢并与内皮细胞产生微弱黏附，白细胞流动减慢，形成滚动，为进一步黏附创造条件[6]。P-选择素作为选择素家族的另一个主要成员，当受到炎症介质刺激后，P-选择素迅速与质膜融合而表达于血小板和内皮细胞表面，介导血小板、内皮细胞及白细胞间的细胞黏附，以及白细胞沿血管内皮滚动[7]。引起活化的单核巨噬细胞高度表达组织因子，激活外源性凝血途径，促进血栓形成[8]。ICAM-1是免疫球蛋白家族中的一员，能够在选择素介导的白细胞与内皮细胞的黏合作用后使内皮上滚动的白细胞固着于炎症部位的血管内皮，并发生铺展，进而分泌水解酶穿出血管，造成血管壁的损伤，进一步加重血栓的形成[9]。

DVT在中医学属于“股肿”、“肿胀”、“血瘀”、“热结蓄血”等范畴。本病主要的病机特点是湿、热、瘀相互影响，而血瘀贯穿疾病的始终。根据这一特点，临床辨证最常见的为湿热下注型和血瘀湿重型。目前有些学者在DVT的微观辨证方面进行了大胆的探索，将中医证型与血管内皮功能[10]、辅助性T细胞因子[11-12]等方面进行了相关性研究。本研究将以黏附因子为切入点，探索其与DVT证型的相关性。

在DVT患者中，湿热下注组血清E-选择素水平高于血瘀湿重组。E-选择素在黏附过程中的主要作用是介导白细胞与血管壁黏附的初始阶段，作为内皮细胞受损的标志[13]，在炎症因子的刺激下，通过与其配体PSGL-1的结合，表达于活化的内皮细胞表面。在血栓形成初期，白细胞与血小板、内皮细胞的黏附可直接或介导多种活性酶、细胞因子等活性物质的释放，损伤内皮细胞，引起血管通透性的增加，使富含蛋白质的液体渗到血管外，形成炎性水肿，同时又加重炎性反应的发生。患者多表现皮温升高、浅静脉充盈扩张、体温升高、舌红、苔黄腻、脉滑数，出现典型的湿热下注表现。P-选择素则因为血小板和内皮细胞的活化，转位到细胞表面并快速表达，介导白细胞的俘获，并顺血液方向沿内皮细胞向损伤部位滚动，这是内皮细胞牢固黏附和移行外渗的最初亦是血栓形成最关键阶段[14]。且P-选择素除了通过从血小板Weibel-Palade小体以出胞方式直接表达外，还可以经刺激因子激活P-选择素基因后，再通过转录、翻译过程大量表达[15]，这个过程较为缓慢，使得表达时间持久，而表现为湿热下注组的P-选择素仍明显高于血瘀湿重组。血清ICAM-1水平在血瘀湿重组明显高于湿热下注组。ICAM-1表达于活化的血管内皮细胞表面，可以诱导白细胞在血管内的聚集、黏附以及迁移，充分参与了白细胞与内皮细胞的牢固黏附及迁移过程。血瘀湿重型的血栓常常已趋于稳定，但肢体的肿胀硬韧依然存在，并有舌质暗红，有瘀点、瘀斑，苔白腻，脉沉细或沉涩等。总之，DVT患者的湿、热、瘀这三种主要病机特点在这两种证型的中表现的侧重点不同，湿热下注患者以“湿热”为重，而血瘀湿重组则以“湿瘀”为主，而这三种黏附因子在DVT的病理变化中的作用靶点、作用时间和发挥的作用机制也不尽不同，这就使得通过宏观辨证得到的证型在黏附因子的表达上也有所差异。

在DVT的不同中医证型中，ICAM-1、P-选择素、E-选择素表达水平也不同，通过了解这些变化特点对掌握病情变化、发展和预后以及制定有效的治疗方案均有重要的临床意义。因此，本研究通过探索CAMs在DVT不同中医证型中表达的差异，可能为DVT中医辨证分型的微观辨证提供有益的补充，同时也为确立统一的DVT中医辨证分型的诊断标准和建立DVT中医证型客观化指标体系提供了可靠的依据。本研究仅选取了DVT常见的两个证型就与黏附因子的相关性做以探讨，今后可进一步针对DVT的其他证型展开研究。

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（收稿：2014-12-22修回：2015-04-28）

（责任编辑曹建春）

Relationship between Deep Vein Thrombosis in Traditional Chinese Medicine Syndromes and Cell Adhesion Molecules

ZHANG Yue,YU Ting-ting,LIU Zheng,et al.Department of Peripheral Vascular Diseases, Shan Dong University of TCM Affiliated Hospital,Ji nan(250011),China.

ObjectiveTo explore the relationship between deep vein thrombosis(DVT)in different syn⁃dromes of Traditional Chinese Medicine（TCM）and cell adhesion molecules.MethodsBased on the syn⁃drome differentiation type of TCM,70 patients with DVT were divided into the syndrome of pathogenic damp⁃ness-heat（A）,the syndrome of blood stasis and dampness（B）,and 30 healthy people were taken as control.All patients and healthy persons were detected blood serum levels of ICAM-1,P-selectin,E-selectin by immunotur⁃bidimetry.ResultsThe detection of ICAM-1 in A,B and C groups showed respectively:（194.746±18.237）ng/mL,（206.742±23.361）ng/mL,and（160.435±23.410）ng/mL,The DVT levels in patients with ICAM-1 in A and B groups were higher than that in group C（P＜0.01）,the ICAM-1 level of group B was higher than that in group A（P＜0.01）.P-selectin in group A,group B and group C expression level showed:（54.093± 6.606）ng/mL,（49.889±7.363）ng/mL,and（31.166±6.945）ng/mL,in the order of decreasing,with signifi⁃cant differences（P＜0.05,P＜0.01）.While the E-selectin expression levels in the three groups were:（64.125 ±8.482）ng/mL,（30.975±8.723）ng/mL,and（27.465±4.934）ng/mL,group A was higher than those in group B and group C（P＜0.01,P＜0.05）,but no significant difference compared with B group and C group（P＞0.05）.ConclusionThere is a certain relationship between cell adhesion molecules and TCM syndrome type of deep venous thrombosis and the level of ICAM-1,P-selectin and E-selectin can help TCM syndrome differentiation.

Intercellular adhesion molecule-1; P-selectin;E-selectin;deep venous thrombosis；syn⁃drome differentiation type of TCM

R654.4

A

1007-6948(2015)03-0215-04

10.3969/j.issn.1007-6948.2015.03.001

国家自然科学基金资助项目（30801474）；山东省自然科学基金项目（2008ZRB14035，ZR2010HL033）；山东省中医药科技发展计划项目（2009-065，2013ZDZK-030）

1.山东中医药大学附属医院周围血管病科（济南 250011）

2.山东省莱州市中医医院外二科（莱州 260014）

张玥，E-mail：zhangyue771@163.com