决明子茶提取物中黄酮含量的测定及抗自由基活性研究

丁润梅，田大年

（1.宁夏医科大学高等卫生职业技术学院，宁夏银川750004；2.宁夏医科大学公共卫生学院，宁夏银川750004）

决明子茶提取物中黄酮含量的测定及抗自由基活性研究

丁润梅1，田大年2

（1.宁夏医科大学高等卫生职业技术学院，宁夏银川750004；2.宁夏医科大学公共卫生学院，宁夏银川750004）

以水、不同含量乙醇为溶剂，采用超声、回流等方法提取决明子茶中的总黄酮，采用亚硝酸钠-氯化铝法，通过紫外分光光度计在494 nm处测定样品吸收，计算总黄酮含量；采用DPPH法研究提取物抗自由基活性。研究发现超声和回流提取均含有一定量的黄酮，采用水回流提取的含量最低为3.39%，55%醇超声提取的含量最高为6.10%。决明子醇提取物对DPPH自由基有较好的清除作用，55%醇回流提取物自由基清除率为71.90%。

决明子茶；总黄酮；亚硝酸钠-氯化铝法；抗自由基活性；DPPH法

决明子为豆科植物决明（Cassia obtusifolia L.）或小决明（Cassia tora L.）的干燥成熟种子，为常用中药。决明子入药最早记载于《神农本草经》，列为上品，以明目之功而名，性味甘、苦、咸、微寒、无毒，归肝、肾、大肠经。具有清肝明目、润肠通便的作用[1]，现代药理学研究表明，决明子有降血压，降血脂，保肝抑菌等活性[2-3]，被广泛应用。另外，决明子又是可以作为药食两用的中药，是保健饮料的良好原料。近年来又发现决明子提取物具有清除自由基、抵抗氧化的作用[4-6]，因此决明子作为一种保健食品的原料越来越引起重视，极具开发应用价值。决明子茶是在决明子的基础上进行炒制后所得的产品，具有润肠通便功效，也是减肥佳品。决明子的这些功能与其含有的黄酮有关，但有关决明子黄酮的含量未见报道。

自由基是生物体新陈代谢过程中产生的一类可以单独存在的具有高度氧化活性的带有一个或几个不配对电子的分子或原子，其化学性质相当活跃。自由基很活泼，具有高度的化学反应活性，自由基过多或清除过慢，会加速机体的衰老进程并诱发各种疾病[7]。经研究发现，自由基与一百多种人类疾病有关[8]。而黄酮类化合物通过酚羟基可与自由基反应，生成比较稳定的半醌式自由基，从而终止了自由基链式反应，其清除自由基的能力与其结构特别是芳香环核失电子有关[9-10]。近年来，对一些黄酮类物质清除自由基性能的相关研究发现，不同的黄酮类化合物对自由基的清除活性有一定差异。黄酮类化合物种类较多，种类之间结构也有一定差异，因此不同的黄酮类化合物其生物活性也有所不同。本文对决明子茶中总黄酮含量进行了测定，及抗自由基活性研究，旨在为决明子的保健食品的研究及资源开发上提供理论依据及检测手段。

1 材料与仪器

1.1 仪器

紫外分光光度计（UV-2550）、精密分析天平（210）：日本岛津；回流提取装置，电热恒温水浴锅：北京长源实验设备厂。

1.2 试剂及材料

决明子茶：银川市雅丽茶食品有限公司，保健型80g装；芦丁标准品（sigma分装）纯度＞99%，DPPH 1，1-二苯基-2-三硝基苯肼（Alfaaesar）纯度＞95%，乙酸钠为化学纯，NaNO2、AlCl3、NaOH、乙醇、甲醇均为分析纯。

2 实验方法

2.1 黄酮含量的测定

2.1.1 样品的提取

取样品决明子茶10 g，粉碎后，过40目筛，装瓶标号待用。

1）称取决明子茶1 g，分别置于100mL锥形瓶中，分别加入水、55%乙醇、95%乙醇40mL，置于超声波清洗器中，温度设为45℃，功率为80 W，超声处理30 min，静置冷却至室温后抽滤到100mL容量瓶中，重复提取两次，抽滤，洗涤滤渣后合并滤液，用溶剂定容至100mL，即得提取液。

2）称取决明子茶1 g，分别置于100mL圆底烧瓶中，分别加入水、55%乙醇、95%乙醇30mL分别回流1 h，再各加入25mL溶剂重复2次，抽滤，洗涤滤渣后合并溶液，于100mL容量瓶中定容至刻度备用。

2.1.2 试剂的配制

1）芦丁标准品溶液的配制：精密称取25.0mg芦丁标准品，置于25mL容量瓶中，用55%乙醇定容，配制成浓度为1.0mg/mL的芦丁标准贮备液。

2）5%NaNO2溶液的配制：精密称取2.50 gNaNO2置于50mL容量瓶中，用蒸馏水定容，配置成5% NaNO2溶液。

3）10%AlCl3溶液的配制：精密称取5.00 g AlCl3置于50mL容量瓶中，用蒸馏水定容，配置成10%Al-Cl3溶液。

4）1.0mol/l NaOH溶液的配制：精密称取2.00 g NaOH置于50mL容量瓶中，用蒸馏水定容，配置成1.0mol/LNaOH溶液。

2.1.3 标准曲线绘制

精密吸取芦丁标准贮备液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5 mL，分别置于5mL容量瓶中，加入55%的乙醇1mL、5%NaNO2溶液0.3mL，混匀后放置6min，加10% AlCl3溶液0.3mL，摇匀，放置6min，加1.0mol/LNaOH溶液1.0mL，再加55%乙醇至刻度，摇匀，放置15min。在494 nm的波长处测定吸光度。

2.1.4 样品的测定

精密吸取0.2mL样品提取液至5mL容量瓶中，加55%的乙醇1mL、5%NaNO2溶液0.3mL，混匀后放置6min，加10%AlCl3溶液0.3mL，摇匀，放置6min，加1.0mol/LNaOH溶液1.0mL，再加55%乙醇至刻度，摇匀，放置15min。在494 nm波长处测定吸光度，平行3次，取其平均值。

2.2 决明子DPPH自由基清除率

2.2.1 试剂的配制

1）DPPH储备液：称取DPPH自由基20mg，置于100mL容量瓶中，用甲醇定容，摇匀，在-20℃条件下避光保存备用。

2）DPPH工作液：（现配现用）按1.8∶8.2的DPPH储备液：甲醇的比例配制DPPH工作液。在515 nm处测其吸光度，为A control。

2.2.2 样品的测定

各样品取20μL的提取液于5mL容量瓶中，用现配的DPPH工作液定容。在515 nm处测其吸光度，为A simple，平行测3次。

3 结果分析

3.1 标准曲线

标准曲线见表1。

表1 芦丁标准曲线数据Table1 Rutin standard curvedata

以芦丁质量浓度为横坐标，吸光值为纵坐标，绘制标准的曲线（图1）。统计学处理得回归方程为y= 10.984x＋0.002，R2=0.999 8线性范围为0～0.1mg/mL。

3.2 黄酮含量

样品中总黄酮的含量在标准曲线中查出相应的值，样品中总黄酮含量以芦丁的相对量表示，见表2。

图1 芦丁标准曲线Fig.1 Rutin standard curve

表2 不同提取物中黄酮含量Tab le2 The content of flavonoid in the different extract

通过上述系列公式可以计算出各样品所含黄酮量分别为：水回流为4.96%，55%醇回流为6.10%，95%醇回流为5.17%，水超声为3.39%，55%醇超声为5.58%，95%醇超声为4.12%。

3.3 自由基清除率

样品吸光度的平均值为：y

线性回归方程为：y=10.984A＋0.002

表3 不同决明子茶提取物清除DPPH自由基效果Tab le3 The effecti on of extract to remove DPPH free radical in different cassia seed tea

DPPH清除率%=[（A control-A smple）/A control] ×100%

通过上述公式可以计算出各样品对自由基的清除率：水回流为40.94%，55%醇回流为71.90%，95%醇回流为47.36%，水超声为12.13%，55%醇超声为68.19%，95%醇超声为29.39%。

4 讨论

本试验以芦丁为标准品，采用分光光度法测量了两种方法提取的决明子茶提取液中黄酮含量。由实验可知，决明子茶提取物均含有一定量的黄酮。因此，决明子茶的传统泡茶，泡酒饮用方法均能摄取一定量的黄酮，为其用于治疗高血压、高血脂、动脉硬化等心血管疾病，提供了理论依据。同时还发现提取方法不同，提取液中黄酮的含量也各不相同。结果显示黄酮含量以回流提取法略高于超声提取法；55%醇提物略优于95%醇提物略优于水提物。因此，无论是泡茶还是泡酒均可以达到对决明子茶中黄酮的摄取，且泡酒，泡茶对于黄酮含量的差别不是很大。

两种方法提取的决明子提取液能够有效清除DPPH自由基，表明决明子的提取液具有清除自由基的功能。从清除自由基的能力来看，回流提取液清除自由基的活性要强于超声，说明提取方法不同，对决明子的细胞破坏程度不一致，有效成分含量也不相同，导致清除自由基的活性强弱不同。由于植物提取液活性成分复杂，含有多种物质，包括黄酮、蒽醌、酚类、多糖等，甚至有不少尚未确定的活性成分也在发挥作用，因此通过对清除自由基的能力与黄酮含量进行相关性分析，发现清除自由基的活性与提取物中的黄酮含量呈显著正相关。决明子提取物是一种很好的天然自由基清除剂，这为我们合理开发利用决明子资源和研制新型功能食品提供了理论依据。

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[2]陈卫星,刁国俊,蒋文娟,等.决明子对高胆固醇血症小鼠模型的影响中草药[J].1991,22(2)：72-73

[3]Wong SM.Anthraquinone Geycosides from the seeds of cassia tora [J].Phytochemistry,1989,28(1)：211-213

[4]贾振宝,丁霄霖.决明子提取物的体外抗氧化实验研究[J].食品与机械,2005,21(6)：44-45

[5]徐建国,胡青平.决明子水提物体外清除自由基活性的研究[J].食品科学,2006,27(6)：73-76

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[7]陆宗良,寇文熔,徐文枢,等.决明子散剂调节血脂的临床研究[J].中国新药杂志,1998,7(6)：449

[8]周然,候振民,张雨旺.决明子茶临床疗效观察[J].山西中医,1992, 8(6)：12

[9]胡康才,胡一鸣.决明子泡饮治高血脂[J].浙江中医杂志,1992,27 (9)：432

[10]王靖.决明子治疗高血脂24例近远期疗效观察[J].辽宁中医杂志,1991,18(7)：29

Determination of Total Flavonoid Content and Anti-free Radical Activity of Juem ingzi（Cassia obtusifolia L.seed）Tea Extracts

DING Run-mei1，TIAN Da-nian2
（1.High Health Vocational Technical School of Ningxia medical university，Yinchuan 750004，Ningxia，China；2.school of public health of Ningxia medical university，Yinchuan 750004，Ningxia，China）

The total flavonoid of cassia seed tea were extracted with water or different ethanol water solution by ultrasonic or reflux.The total flavonoid contents were detected with absorption spectrophotometer in 494 nm by using NaNO2-AlCl3method.The anti-free radical activity of the extracts was measured by using DPPH method. We found the flavonoid were detected in all of the extracts.The total flavonoid content in water extract by reflux was 3.39%，which was the lowest content.And that in 55%ethanol water solution extract by ultrasonic was 6.10%，which was the highest content.The extracts showed free radical scavenging activity to DPPH radical. And that in 55%ethanol water solution extract free radicals activity by reflux was71.90%.

cassia seed tea；total flavonoid；NaNO2-AlCl3method；anti-free radicals activity；DPPH method

10.3969/j.issn.1005-6521.2015.06.024

2013-12-15

宁夏自然科学基金（NZ14069）；2012宁夏医科大学校级课题（XQ2012027）

丁润梅（1978—），女（汉），副教授，硕研，主要从事有机合成及分析。