原发性胆汁性肝硬化检测自身免疫性肝病相关自身抗体谱的临床意义

毕研梅

原发性胆汁性肝硬化检测自身免疫性肝病相关自身抗体谱的临床意义

毕研梅①

目的：分析原发性胆汁性肝硬化（PBC）患者中自身免疫性肝病相关自身抗体谱的情况及其相关的临床价值。方法：选择2009年1月-2013年12月收治的PBC患者61例（PBC组）、自身免疫性肝炎（AIH）50例患者（AIH组）和其他肝病52例患者（对照组），检测各组的血清抗线粒体抗体（AMA）（采用间接免疫荧光法）、血清自身免疫性肝病相关自身抗体谱（采用ELISA法），包括AMA-M2、抗GP210抗体、抗SP100抗体、抗SLA抗体、抗LC1抗体、抗LKM-1抗体。结果：在PBC组中AMA、AMA-M2、抗GP210抗体、抗SP100抗体、抗LC1抗体、抗SLA抗体及抗LKM-1抗体阳性率分别为91.8％（56/61）、86.9％（53/61）、36.1％（22/61）、24.6％（15/61）、1.6％（1/61）、0（0/61）、1.6％（1/61）；在AIH组中分别为18.0％（9/50）、6.0％（3/50）、8.0％（4/50）、14.0％（7/50）、0（0/50）、6.0％（3/50）、4.0％（2/50）；而在对照组中分别为5.8％（3/52）、1.9％（1/52）、5.8％（3/52）、11.5％（6/52）、0（0/52）、0（0/52）、0（0/52）。AMA、AMA-M2和抗GP210抗体在PBC组中阳性率较AIH组明显增高（P＜0.01）。而抗SLA抗体在AIH组阳性率较PBC组明显增高（P＜0.01）。结论：抗LC1抗体、抗SLA抗体和抗LKM-1抗体在PBC和AIH患者中的阳性率低，检测该3种抗体的意义不大；因此筛查抗GP210抗体和AMA对PBC的诊断具有重要的临床意义。

原发性胆汁性肝硬化； 自身免疫性肝炎； 自身抗体

原发性胆汁性肝硬化（PBC）的主要临床特征以非化脓性肝内小胆管的破坏，进而发生胆汁进展性淤积及血清呈现高滴度的AMA，属于慢性的病因不明的特异性肝病且多见于女性患者；有相关研究证实了有着遗传易感性的患者在环境因素的作用下易发生PBC[1]。由于检测相关自身抗体技术的改进及对PBC相关知识的不断增长，在世界范围内PBC的诊断率已明显提高，但东方人群中没有症状的PBC患者的数量远超现在的估计量，而PBC在国内相关人群中的发病率及病死率则更多[2-3]。目前诊断自身免疫性肝病（AIH）主要依靠检测患者血清AIH相关自身抗体谱，国际多中心的相关研究结果显示，不同人种AIH患者人群中AIH相关自身抗体谱的阳性率有着不同的较大的差别[4]。本研究通过全面系统检测AIH相关自身抗体谱以探讨在PBC患者及AIH患者中的阳性分布情况及相关临床意义，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2009年1月-2013年12月本院收治的PBC患者61例（PBC组），男6例，女55例，年龄23～76岁，平均（52.3±11.6）岁；AIH患者50例（AIH组），男12例，女38例，年龄21～74岁，平均（49.7±9.8）岁；其他肝病患者52例（对照组），男22例，女30例，年龄24～76岁，平均年龄（50.4±10.2）岁，其中25例病毒性肝炎患者、14例酒精性肝病患者、9例药物性肝炎患者、4例脂肪肝患者。三组患者诊断标准均符合文献[5]标准。各组患者收集完血清后进行分装，并于-80 ℃保存待用。

1.2 血清AMA检测 患者血清AMA的检测采用间接免疫荧光法，自身抗体检测的抗原基质片（肝脏马赛克）由德国欧蒙医学实验诊断公司提供。先设定阳性及阴性对照，将血清1：100稀释，之后与抗原基质片进行反应，30 min后浸泡5 min，而后加入二抗（用荧光标记）进行避光孵育，30 min后再浸泡5 min，最后加甘油封片，于荧光显微镜下进行判断，抗体的滴度以≥1∶100为阳性。

1.3 血清AMA-M2、抗GP210抗体、抗SP100抗体、抗LC1抗体、抗SLA抗体和抗LKM-1抗体的检测

6种抗体均采用ELISA检测（试剂由德国欧蒙医学实验诊断公司提供）。将血清1∶100稀释，加入标准品、阳性和阴性对照，加入微孔与抗原进行孵育反应，30 min后洗板3次，而后加入二抗（酶标记）进行避光孵育，30 min后再洗板3次，加入底物使其反应15 min后终止，最后在SUNRISE酶标仪上读取吸光度（A）值。以≥20 kRU/L为阳性。

1.4 统计学处理 采用SPSS 18.0统计学软件进行数据处理，计量资料以（±s）表示，比较采用t检验，计数资料以百分率表示，比较采用 χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 AIH相关自身抗体谱的结果 PBC组患者AMA阳性率为91.8％，AMA-M2阳性率为86.9％，抗GP210抗体阳性率为36.1％，抗SP100抗体的阳性率为24.6％。其中PBC组患者AMA、AMA-M2及抗GP210抗体的阳性率均较其他两组明显增高（P＜0.01），而在三组中抗SP100抗体的阳性率差异不明显（P＞0.05），而AIH组中抗SLA抗体的阳性率较PBC组增高（P＜0.01）。见表1。

表1 AIH相关自身抗体谱在各组中的阳性分布情况比较 例（％）

2.2 PBC阳性与阴性AMA患者中的AIH相关自身抗体谱的检测结果 PBC阳性与阴性AMA患者中抗GP210抗体、抗SP100抗体、抗LC1抗体、抗SLA抗体和抗LKM-1抗体的阳性率差异均无统计学意义（P＞0.05）。见表2。

表2 PBC阳性及阴性AMA患者中AIH各相关自身抗体阳性情况比较 例（％）

3 讨论

PBC的主要临床特征是肝内的细小胆管发生进行性非化脓性的破坏，同时伴有门静脉的炎性病变，是一种慢性进展性的自身免疫性疾患，持续性地长期存在肝内胆汁的淤积，最终演变为肝纤维化及肝硬化。中老年女性PBC发病率居多，本组中女性患者约是男性的9倍，与文献报道相符。各国学者历经二十多年的不断探索，在PBC领域的相关研究已经取得不错的成绩，目前PBC可靠的动物模型已经可以建立，并且特征性的自身抗体——AMA在PBC患者中产生已经明确，同时PBC患者T和B淋巴细胞对AMA抗原的识别位点也已确认，且在PBC患者中特异性的胆管上皮细胞损伤相关机制已经阐明[6-8]。随着对PBC的自身抗体谱相关研究的不断深入，多国多中心的研究显示，在各国人群AIH患者中的AIH相关自身抗体谱的阳性率差异很大；而国内关于AIH相关自身抗体的系统临床研究报道不多，因此，本研究选择61例PBC患者、50例AIH患者检测AIH相关自身抗体谱，旨在阐明其与PBC、AIH患者间的关系，探讨在国人中该AIH相关自身抗体谱的临床价值。

AMA特别是AMA-M2，在PBC患者中是一种特征性的自身抗体，有文献报道该抗体在PBC患者中的阳性率约为90％，本研究中AMA在PBC组的阳性率约为91.8％，AMA-M2的阳性率约为86.9％，与文献报道基本一致；抗GP210抗体、抗SP100抗体在PBC组中的阳性率约为36.1％、24.6％，在PBC组中抗GP210抗体的阳性率较AIH组、对照组明显增高，也与外内国相关报道结果一致[9-10]。另外本研究中在AIH组中抗SP100抗体的阳性率高达14.0％，而PBC组约为24.6％，虽然PBC组阳性率有增高趋势，但差异无统计学意义（P＞0.05）。因此检测抗SP100抗体以鉴别PBC、AIH在国人中的临床意义不是很大。而抗SLA抗体、抗LKM-1抗体和抗LC1抗体为特征性的AIH自身抗体；有文献报道抗SLA抗体在西方AIH患者中的阳性率高约50％，抗LC1抗体的阳性率高达71％。本研究结果显示，在AIH患者中这3种AIH相关的自身抗体的阳性率均相当低，其中抗SLA抗体的阳性率仅为6.0％，较西方AIH患者的阳性率大大降低，与日本文献[11]报道的6.7％的阳性率相当，说明在东西方AIH患者中抗SLA抗体的阳性率差异较大，本研究与日本文献报道的结论相似可能与人种的相同相关。另外抗LKM-1抗体、抗LC1抗体在AIH组中的阳性率分别为4.0％、0；可见在AIH患者中这3种AIH相关的自身抗体的阳性率均很低，临床上检测该三种抗体尤其是抗LC1抗体相关的临床意义不大[12-14]。抗GP210抗体、AMA在PBC组的阳性率较AIH组及对照组均较高，与国外相关报道结论相同，因此抗GP210抗体、AMA的筛查对于PBC的诊断具有重要意义。

另外在PBC患者中探讨AMA、抗GP210抗体和抗SP100抗体相互之间的关系时发现，抗GP210抗体和抗SP100抗体在AMA阳性与AMA阴性PBC患者之间阳性率的未见明显的统计学差异（P＞0.05）。国外有文献报道在AMA阴性PBC患者中抗GP210抗体和抗SP100抗体的阳性率较AMA阳性PBC患者要增高，本研究结果与之不同；本研究在5例AMA阴性PBC患者中抗SP100抗体仅1例患者是阳性的，抗GP210抗体也仅1例患者是阳性的。由于患者的抗GP210抗体与肝功能的损伤有相关性[15-16]，因此检测AMA及抗GP210抗体对于确诊PBC患者及评估患者病情均有着重要意义，而检测SP100抗体在国人中的临床意义要相对小的多。

综上所述，AIH患者的AIH相关的自身抗体谱有一定的人种差异，尤其是抗SLA抗体、抗LKM-1抗体和抗LC1抗体在国人AIH患者的阳性率较西方人群大大降低，而AMA、AMA-M2、抗GP210抗体和抗SP100抗体在国人PBC患者的阳性率与西方人群相似。检测AMA、AMA-M2和抗GP210抗体在国人的AIH诊断中有很大的临床意义，但抗SP100抗体、抗SLA抗体、抗LKM-1抗体和抗LC1抗体的筛查意义相对不大。

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Clinical Significance of Detection Autoimmune Liver Disease Related Autoantibody Profiles in Patients with Primary Biliary Cirrhoses

BI Yan-mei.//Medical Innovation of China，2015，12（09）：126-128

Objective：To explore the prevalence and study the clinic significance of autoimmune liver diseaserelated antibodies in patients with primary biliary cirrhoses（PBC）.Method：The anti-AMA in 61 PBC（PBC group），50 AIH（AIH group） and 52 other liver diseases（control group） were detected by IIF.Anti-AMA-M2，anti-GP210，anti-SP100，anti-SLA，anti-LC1 and anti-LKM-1 antibodies were measured by ELISA.Result：The positive rates of anti-AMA，anti-AMA-M2，anti-GP210，anti-SP100，anti-LC1，anti-SIA and anti-LKM-1 antibodies were 91.8％（56/61），86.9％（53/61），36.1％（22/61）， 24.6％（15/61），1.6％（1/61），0（0/61）and 1.6％（1/61）in PBC group；18.0％（9/50），6.0％（3/50），8.0％（4/50），14.0％（7/50），0（0/50），6.0％（3/50）and 4.0％（2/50）in AIH group；5.8％（3/52），1.9％（1/52），5.8％（3/52），11.5％（6/52），0（0/52），0（0/52）and 0（0/52）respectively in control group.Anti-AMA，anti-AMA M2 and anti-GP210 were detected more frequently in PBC group than AIH group（P＜0.01），while anti-SLA was detected more frequently in AIH group than PBC group（P＜0.01）. Conclusion：Anti-LC1， anti-SLA and anti-LKM-1 antibodies in PBC and AIH were detected at a very low frequency in the corhort.There was little significance for screening anti-LC1，anti-SLA，anti-LKM-1 antibodies in patients with autoimmune liver diseases.It is of importance to detect anti-AMA and anti-GP210 antibodies for diagnosis of PBC.

Biliary liver cirrhosis； Autoimmune hepatitis； Autoantibodies

10.3969/j.issn.1674-4985.2015.09.042

2014-08-14） （本文编辑：蔡元元）

①抚顺矿务局总医院 辽宁 抚顺 113008

毕研梅

First-author’s address：General Hospital of Fushun Mining Bureau，Fushun 113008，China