探究增生性瘢痕成纤维细胞中CDK4、CDK2、CDK1基因与细胞周期的相关性*

张明君舒申友周镜桂毛小炎

探究增生性瘢痕成纤维细胞中CDK4、CDK2、CDK1基因与细胞周期的相关性*

张明君①舒申友①周镜桂①毛小炎①

目的：探究与分析增生性瘢痕成纤维细胞中CDK4、CDK2、CDK1基因及蛋白的表达与细胞周期之间的相关性。方法：选取本院自2012年7月-2014年7月采集的40份增生性瘢痕标本，按照增生性瘢痕的时间段将所采集的标本进行分组，共分为3个月组、6个月组、1年组及2年组，每组各10份标本，另选择同时期采集到的10份正常标本作为常规对照组。观察与对比各个标本中CDK4、CDK2、CDK1基因及蛋白情况，同时对成纤维细胞周期进行检测。结果：3个月组、6个月组标本中CDK4、CDK2、CDK1基因含量及蛋白含量与对照组相比差异均有统计学意义（P＜0.05）；6个月、1年组、2年组标本中CDK4、CDK2、CDK1基因含量及蛋白含量与3个月组相比差异均有统计学意义（P＜0.05）；3个月、1年组、2年组标本中CDK4、CDK2、CDK1基因含量及蛋白含量与6个月组相比差异均有统计学意义（P＜0.05）。增生期瘢痕早期高比例在细胞分裂周期中的S期间及G2/M期，结果可见，针对此细胞周期进行相关的基因调控干预，可对增生性瘢痕进一步发生发展起到有效抑制作用。结论：处于不同增生性瘢痕的时期中CDK4、CDK2、CDK1基因及蛋白的表达趋势大致相符，增生性瘢痕细胞周期的分布情况与上述三个蛋白执行功能的情况呈相互对应的关系，为临床研究提供可靠依据。

增生性瘢痕； 成纤维细胞； CDK4； CDK2； CDK1； 细胞周期

病理性瘢痕过度增长与成纤维细胞增殖异常具有一定的相关性，由于增生性瘢痕从增生转向退化的原因主要与细胞间信号船体及成纤维细胞内基因表达密切相关，为此，临床相关学者与专家需针对此类问题进行分析与研究[1-2]。旨在采用早期积极有效的措施对于异常增生的细胞周期相关基因的表达进行控制，从而阻碍增生性瘢痕的发生及发展[3]。本次研究针对增生性瘢痕不同时期的CDK4、CDK2、CDK1基因及蛋白的表达情况进行检测，同时观察瘢痕组织细胞成分周期分布情况，将研究结果总结报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取本院自2012年7月-2014年7月采集的40份增生性瘢痕标本，按照增生性瘢痕的时间段将所采集的标本进行分组，共分为3个月组、6个月组、1年组及2年组，每组各10份标本。40例中男23例，女17例，年龄30～57岁，平均（45.6±2.7）岁。另选择同时期采集到的10份正常标本作为常规对照组。对标本进行采集完成后将其中一部分放置-150 ℃的冰箱中保存备用，另一部分则直接进行处理后进行细胞周期的检测[4]。

1.2 方法 分别采用荧光定量PCR法及Western blotting法对各个标本中CDK4、CDK2、CDK1基因及蛋白情况进行检测，并采用流式细胞术对成纤维细胞周期进行检测[5]。

1.3 统计学处理 采用SPSS 18.0统计软件对本次研究所取得的数据进行分析，计量资料采用（±s）表示，比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同时期增生瘢痕组织中CDK4、CDK2、CDK1基因表达情况对比 3个月、6个月组标本中CDK4、CDK2、CDK1基因含量与对照组相比，差异与统计学意义（P＜0.05）；6个月、1年组、2年组标本中CDK4、CDK2、CDK1基因含量与3个月组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）；3个月、1年组、2年组标本中CDK4、CDK2、CDK1基因含量与6个月组相比，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 不同时期增生瘢痕组织中CDK4、CDK2、CDK1基因表达情况（±s）

表1 不同时期增生瘢痕组织中CDK4、CDK2、CDK1基因表达情况（±s）

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2.2 不同时期增生瘢痕组织中CDK4、CDK2、CDK1蛋白表达情况比较 3个月组、6个月组标本中CDK4、CDK2、CDK1蛋白含量与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；6个月、1年组、2年组标本中CDK4、CDK2、CDK1蛋白含量与3个月组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；3个月、1年组、2年组标本中CDK4、CDK2、CDK1蛋白含量与6个月组相比，差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 不同时期增生瘢痕组织中CDK4、CDK2、CDK1蛋白表达情况比较（±s）

表2 不同时期增生瘢痕组织中CDK4、CDK2、CDK1蛋白表达情况比较（±s）

组别CDK4CDK2CDK1对照组（n=10）0.26±0.050.35±0.040.40±0.07 3个月组（n=10）1.96±0.220.78±0.170.75±0.17 6个月组（n=10）0.80±0.090.74±0.060.72±0.09 1年组（n=10）0.33±0.070.38±0.040.45±0.09 2年组（n=10）0.30±0.100.36±0.050.42±0.06

2.3 不同时期增生性瘢痕细胞周期分布情况 增生期瘢痕早期高比例在细胞分裂周期中的S期间及G2/M期，结果可见，针对此细胞周期进行相关的基因调控干预，可对增生性瘢痕进一步发生发展起到有效抑制作用。

3 讨论

增生性瘢痕作为临床上一类较为常见的细胞异常增殖性疾病，现有部分专家及学者认为细胞周期内起到调节作用的相关基因可能与增生期瘢痕的发生发展具有一定的关系[6]。但目前所进行的研究中针对基因转录水平的研究仅停留在基因表达产物的变化上，而真正发挥功能的蛋白则需通过一系列的转录、翻译、调控等过程来完成，而不同的蛋白质在发挥其细胞周期调节作用时起到了不同的作用[7]。因此，有关专家及学者需针对处于不同时期的增生性瘢痕细胞周期相关基因及表达以及其细胞周期运行情况展开研究，旨在为防治增生性瘢痕发生发展提供可靠依据[8]。本次研究中所研究的对象分别为CDK4、CDK2及CDK1，其中CDK1作为一种促进细胞分裂增值的关键蛋白，在细胞周期的作用是保证细胞由G1期顺利进入到S期，其作用机制主要是通过与CDK4相结合而形成一种复合体，以此启动E2F下游的信号系统，以达到缩短细胞周期，对于异常细胞周期或细胞增殖等情况进行调控的作用[9-11]。而CDK2同样作为一种细胞周期中的关键蛋白，其作用同为确保细胞由G1期顺利进入到S期，作用机制是通过使得Rb蛋白磷酸化，从而使得E2F转录因子对S期基因的表达起到激活作用，以达到缩短细胞周期进程的目的[12-13]。本次研究结果显示，在各个时期增生性瘢痕演变过程中，在早期可显示出CDK4、CDK2及CDK1的表达情况最强，且在1年之后其表达量明显降低，且瘢痕组织细胞形成的细胞周期分布情况与CDK4、CDK2及CDK1基因及蛋白表达变化大致相符[14]。研究结果提示，对于增生性瘢痕发生早期对上述三个基因采取积极有效的干预措施可有效阻碍其发生发展，可作为一种有效可靠的方法推广应用[15]。

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To Explore the Correlation of the Hyperplastic Scar Fibroblasts of CDK4，CDK2 and CDK1 Gene with the Cell Cycle

ZHANG Ming-jun，SHU Shen-you，ZHOU J ing-gui，et al.//Medical Innovation of China，2015，12（09）：004-006

Objective： To explore and analyze CDK4， CDK2 and CDK1 gene in the hyperplastic scar fibroblasts，protein expression and the relationship with the cell cycle.Method： 40 of hyperplastic scar samples in our hospital were selected from July 2012 to July 2014， according to the period of hyperplastic scar were divided into the 3 months group，the months group，the 1 year group and the 2 years group，each group with 10 specimens.10 normal specimens were collected at the same time as a normal control group.The samples of CDK4， CDK2， CDK1 gene and their protein were observed and compared， at the same time the fibroblasts cycle were tested. Result： The content of CDK4， CDK2， CDK1 gene and protein in the 3 months group，and 6 months group compared with the control group， the differences were statistically significant（P＜0.05）；the content of CDK4， CDK2， CDK1 gene and protein in the 6 months group，1 year group， 2 years group compared with 3 months group，the differences were statistically significant（P＜0.05）； the content of CDK4， CDK2， CDK1 gene and protein in the 3 months group，1 year group，2 years group compared with 6 months group，the differences were statistically significant（P＜0.05）.Early phase hyperplasia scar accounted for high percentage during cell division cycle in S and G2/M phase，the result showed regulatory intervention with the related gene for the cell cycle can further develop hyperplastic scar effective inhibition effect. Conclusion： In different periods the trend of gene of CDK4， CDK2， CDK1 and protein expression is broadly in line.The distribution of cell cycle corresponds the above three protein executive function each other， which provide reliable basis for clinical study.

Hyperplastic scar； Fibroblasts； CDK4； CDK2； CDK1； The cell cycle

10.3969/j.issn.1674-4985.2015.09.002

2014-10-11） （本文编辑：周亚杰）

广东省科技局科研项目（2012113）；汕头市科技局科研项目（汕府科2012113）

①汕头大学医学院第二附属医院 广东 汕头 515041

张明君

First-author’s address：The Second Affiliated Hospital of Shantou University Medical College，Shantou 515041，China