二色波罗蜜对血瘀模型大鼠血液流变学的影响

□卢海啸，冯春锋，黄美玲，王艳华，何小芳

（1. 玉林师范学院 生命科学与技术学院，广西 玉林，537000；2. 玉林市妇幼保健院，广西 玉林，537000）

二色波罗蜜对血瘀模型大鼠血液流变学的影响

□卢海啸1，冯春锋2，黄美玲1，王艳华1，何小芳1

（1. 玉林师范学院 生命科学与技术学院，广西 玉林，537000；2. 玉林市妇幼保健院，广西 玉林，537000）

目的：观察二色波罗蜜提取物对血瘀模型大鼠血液流变学指标的影响.方法：采用持续力竭性游泳血瘀模型，检测全血黏度、血浆黏度、红细胞聚集指数、血小板数、TT、PT、APTT、FIB，观察二色波罗蜜提取物对血瘀模型大鼠血液流变学指标的影响.结果：与模型组相比，二色波罗蜜提取物能显著改善血液流变学指标.二色波罗蜜提取物能降低全血黏度、血浆黏度、红细胞聚集指数、血小板数、TT、FIB ，提高PT、APTT.结论：二色波罗蜜提取物具有改善血液流变学指标的作用，其活血化瘀的有效部位为乙酸乙酯提取物.

二色波罗蜜；血液流变学；有效部位

二色波罗蜜Artocarpus styracifolius Pierre为桑科（Moraceae）波罗蜜属（Artocarpus）植物，具有祛风除湿、舒筋活血的功效[1]，临床上主要用于风湿性关节炎，类风湿性关节炎、腰肌劳损、风湿痹痛、偏瘫、跌打损伤等[2，3].初步研究发现，其化学成分主要为黄酮类化合物[4-7].现代研究显示，二色波罗蜜具有抗抑郁[8]，抗疟原虫、锥虫、细胞毒[5]，抑制中性粒细胞爆发[6]等活性.为了明确二色波罗蜜的传统功效——活血化瘀的作用机制，本实验检测了二色波罗蜜提取物对血瘀模型大鼠血液流变学指标的影响.

1 材料与仪器

1.1 动物 SD大鼠130只，体质量为（220±10）g，雄性，清洁级，购于广西医科大学实验动物中心.许可证号：SCXK桂2003-000.

1.2 药物和试剂 二色波罗蜜采于广西岑溪市吉太乡.原植物经广西林业勘查设计院钟业聪高级工程师鉴定，为桑科（Moraceae）波罗蜜属（Artocarpus）植物二色波罗蜜Artocarpus styracifolius Pierre.采后粉碎，阴干备用；75 %消毒酒精、95 %乙醇（分析纯）购于天津百世化工有限公司；0.9 %氯化钠注射液（A130724H、贵州科伦药业有限公司）；复方丹参片（130603、郑州瑞龙制药股份有限公司）.

1.3 仪器 MVIS-2035全自动血流变分析仪（重庆天海医疗设备有限公司），7180全自动生化分析仪（日本日立株式会社），XE-5000血液分析仪（日本sysmex公司），RE-2000A旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂），SHZ-D（III）循环水式真空泵（巩义市予华仪器有限责任公司），电子分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）等.

2 方法

2.1 提取物的制备 称取二色波罗蜜的干燥药材粉末适量，用95 %乙醇热回流提取2 h，过滤，得到二色波罗蜜提取液，重复3次，合并提取液，减压浓缩，得到浸膏状的二色波罗蜜粗提取物，取二色波罗蜜粗提取物加入适量蒸馏水，用超声波助溶，成混悬液，依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分别减压浓缩得到石油醚、乙酸乙酯、正丁醇和水提取物，备用.使用时用生理盐水配制成混悬液.

2.2 二色波罗蜜活性部位的筛选

2.2.1 动物分组与给药 采用单纯随机法进行分组（空白对照组、模型组、丹参片组、石油醚提取物组、乙酸乙酯提取物组、正丁醇提取物组、水提取物组），每组10只.除空白对照组外，其余各组均进行造模.采用灌胃给药，1次/d，给药剂量：丹参片组100 mg·kg-1，其余各给药组200 mg·kg-1，空白对照组、模型组给予等容生理盐水.

2.2.2 血瘀模型的制作 根据“劳则气耗”的中医学理论，选择游泳力竭法[9]制备大鼠气虚血瘀状态.先适应性游泳训练3天，然后每天力竭性游泳1次，持续21天.

2.2.3 血液流变学指标的测定[10]于实验第21天，各组大鼠以10 %水合氯醛，按0.35 mg·kg-1体重腹腔注射麻醉后腹主动脉采血.检测血液流变性、红细胞流变性及凝血相关血液学指标.包括全血黏度、血浆黏度、红细胞聚集指数、血小板数、凝血时间（TT）、凝血酶原时间（PT）、活化部分凝血活酶时间（APPT）、纤维蛋白原（FIB）含量.

2.3 二色波罗蜜乙酸乙酯提取物的量效关系 将SD大鼠随机分为6组：空白对照组和模型组(灌胃等容生理盐水)；阳性对照组（按100 mg·kg-1灌胃丹参片溶液）；二色波罗蜜乙酸乙酯提取物低、中、高剂量组（分别灌胃给药100 mg·kg-1、200 mg·kg-1、300 mg·kg-1）.实验方法同“2.2.2”、“2.2.3”项. 2.4 数据处理 所有数据以表示，数据统计分析采用SPSS17.0 for windows统计软件进行分析，实验结果采用单因素方差分析法进行分析，组间比较用t检验.P＜0.05为有统计学意义.

3 结果与分析

3.1 二色波罗蜜活性部位的筛选

3.1.1 各组大鼠全血黏度及血浆黏度 结果如表1所示，与空白对照组比较，模型组的全血黏度和血浆黏度均增加（P＜0.01）.与模型组相比，各组全血黏度均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01）.与模型组比较，各组血浆黏度差异均有统计学意义（P＜0.01），尤其是乙酸乙酯提取物组和水提取物组.

表1 各组大鼠全血黏度及血浆黏度比较（±s）

表1 各组大鼠全血黏度及血浆黏度比较（±s）

与空白对照组比，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比，#P＜0.05，##P＜0.01.

全血黏度（mpas）血浆黏度（mpas）高切200/S中切100/S低切3/S空白对照组等容6.28±0.18##7.04±0.20##12.50±0.28##1.49±0.06##模型组等容9.68±0.19**9.82±0.54**14.33±0.92**1.66±0.03**丹参片组1006.02±0.14##6.83±0.18##12.93±0.57#1.56±0.03*##石油醚提取物组2006.12±0.05##6.83±0.24*##12.09±0.90##1.55±0.03*##乙酸乙酯提取物组2005.66±0.24**##6.35±0.28**##11.92±0.43##1.48±0.02##正丁醇提取物组2006.13±0.17##6.95±0.21##13.12±0.75#1.54±0.01##水提取物组2005.65±0.22**##6.42±0.28##12.91±0.61##1.49±0.02##组别剂量（mg·kg-1）

3.1.2 各组大鼠红细胞聚集指数 结果见表2，与空白对照组比较，模型组和乙酸乙酯组有统计学意义（P＜0.01）.与模型组相比，各组均有统计学意义（P＜0.01），尤其是二色波罗蜜乙酸乙酯提取物组（P＜0.01）.

表2 各组大鼠红细胞聚集指数比较（±s）

表2 各组大鼠红细胞聚集指数比较（±s）

与空白对照组比，**P＜0.01；与模型组比，##P＜0.01.

组别剂量（mg·kg-1）红细胞聚集指数空白对照组等容8.48±0.39##模型组等容12.39±0.34**丹参片组1008.05±0.31##石油醚提取物组2007.96±0.58##乙酸乙酯提取物组2007.66±0.37**##正丁醇提取物组2008.72±0.27##水提取物组2008.66±0.39##

3.1.3 各组大鼠血小板数 如表3所示，与空白对照组比较，除乙酸乙酯提取物组外，各组均有统计学意义（P＜0.01）.与模型组比较，各组均有统计学意义（P＜0.05或P＜0.01），其中乙酸乙酯提取物组最接近正常值（P＜0.01）.

表3 各组大鼠血小板数比较（±s）

表3 各组大鼠血小板数比较（±s）

与空白对照组比，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比，#P＜0.05，##P＜0.01.

组别剂量（mg·kg-1）血小板数（/L）空白对照组等容653.25±34.60##模型组等容971.67±80.87**丹参片组100833.33±24.95**##石油醚提取物组200809.33±46.82**##乙酸乙酯提取物组200690.50±53.57##正丁醇提取物组200855.67±27.02**#水提取物组200765.75±85.42*##

3.1.4 各组大鼠TT、PT、APTT及FIB 测定结果 结果见表4，与空白对照组比较，模型组TT、PT、APTT、FIB的差异有统计学意义（P＜0.01）.与模型组比较，各组的TT、PT、APTT、FIB均有统计学意义（P＜0.01）.尤其是乙酸乙酯提取物组（P＜0.01）.表中显示模型组的TT时间延长可能是由于PT、APTT降低所致.

表4 各组大鼠TT、PT、APTT、FIB测定结果比较（±s）

表4 各组大鼠TT、PT、APTT、FIB测定结果比较（±s）

与空白对照组比，*P＜0.05，**P＜0.01；与模型组比，##P＜0.01.

组别剂量（mg·kg-1）TT (s)PT (s)APTT (s)FIB (g/L)空白对照组等容22.15±0.35##11.70±0.34##27.35±0.70##1.53±0.34##模型组等容28.27±0.38**9.50±0.17**20.60±0.35**3.49±0.53**丹参片组10024.20±0.26**##10.90±0.30##24.47±0.50**##2.32±0.44**##石油醚提取物组20026.10±0.26**##10.57±0.15##24.53±0.31**##2.41±0.04**##乙酸乙酯提取物组20024.87±0.84**##10.93±0.39##26.53±0.40##2.10±0.43*##正丁醇提取物组20024.63±0.40**##10.90±0.50*##24.43±0.59**##2.27±0.14*##水提取物组20025.05±0.29**##10.53±0.37**##24.18±0.99**##2.43±0.21**##

3.2 二色波罗蜜乙酸乙酯提取物量效关系

3.2.1 各组大鼠全血黏度及血浆黏度

如表5所示，二色波罗蜜乙酸乙酯提取物对血浆黏度的影响随着剂量的增大而增大（P＜0.01），呈现出一定的量效关系.

表5 二色波罗蜜乙酸乙酯提取物大鼠全血黏度及血浆黏度比较（±s）

表5 二色波罗蜜乙酸乙酯提取物大鼠全血黏度及血浆黏度比较（±s）

与空白对照组比，**P＜0.01；与模型组比，##P＜0.01.

组别剂量（mg·kg-1）全血黏度（mpas）血浆黏度（mpas）高切200/S中切100/S低切3/S空白对照组等容6.67±0.13##7.47±0.14##14.25±0.20##1.58±0.04##模型组等容7.60±0.12**8.77±0.15**15.70±0.24**1.76±0.05**丹参片组1006.48±0.13##7.27±0.21##14.63±0.32##1.56±0.03##低剂量组1005.76±0.22**##6.67±0.16**##12.07±0.33**##1.52±0.06##中剂量组2005.36±0.12**##6.25±0.25**##10.68±0.14**##1.43±0.08**##高剂量组3005.16±0.14**##5.81±0.10**##9.95±0.24**##1.25±0.05**##

3.2.2 大鼠红细胞聚集指数

如表6所示，二色波罗蜜乙酸乙酯提取物随着剂量的增大，其红细胞聚集指数的呈现下降的趋势（P＜0.01）.

表6 二色波罗蜜乙酸乙酯提取物大鼠红细胞聚集指数比较（±s）

表6 二色波罗蜜乙酸乙酯提取物大鼠红细胞聚集指数比较（±s）

与空白对照组比，**P＜0.01；与模型组比，##P＜0.01.

组别剂量（mg·kg-1）红细胞聚集指数空白对照组等容9.28±0.10##模型组等容10.55±0.14**丹参片组1009.63±0.13**##低剂量组1008.36±0.06**##中剂量组2006.75±0.17**##高剂量组3006.24±0.19**##

3.2.3 大鼠血小板数

如表7所示，二色波罗蜜乙酸乙酯提取物随着剂量的增大，血小板数呈现下降的趋势（P＜0.01）.

表7 二色波罗蜜乙酸乙酯提取物大鼠血小板数比较（±s）

表7 二色波罗蜜乙酸乙酯提取物大鼠血小板数比较（±s）

与空白对照组比，**P＜0.01；与模型组比，##P＜0.01.

组别剂量（mg·kg-1）血小板数（/L）空白对照组等容532.00±65.39##模型组等容1130.00±39.75**丹参片组100770.00±45.76**##低剂量组100804.75±42.95**##中剂量组200664.00±33.97**##高剂量组300543.00±41.06##

3.2.4 大鼠TT、PT、APTT及FIB 测定结果

如表8所示，二色波罗蜜乙酸乙酯提取物对TT、PT、APTT、FIB的影响（P＜0.01），呈现出一定的量效关系.

表8 二色波罗蜜乙酸乙酯提取物大鼠TT、PT、APTT、FIB测定结果比较（x±s）

4 讨论

本实验采用血液流变学的指标观察二色波罗蜜不同提取物对血瘀大鼠的影响.全血粘度是一个综合性指数，它是血浆粘度、红细胞变形指数和聚集能力、血小板流变特性的综合表现.全血粘度增高，反映血液的“粘”；血浆粘度增高，反映血液的“凝”；红细胞聚集指数增高，反映血液的“聚”.如果红细胞刚性增高、聚集性过强，则此时红细胞会聚集成串成团，流动困难，使血粘度增高.本实验以二色波罗蜜提取物应用于血瘀模型大鼠，观测到其使大鼠血液粘、凝、聚状态明显改善，提示该药能改善血瘀模型大鼠异常的血液流变性，这在一定程度上证实该药具有较强的活血化瘀作用，而改善血液流变性可能是其活血化瘀机制之一.从综合各指标的情况来看，二色波罗蜜的有效部位应该是二色波罗蜜的乙酸乙酯提取物，且二色波罗蜜的乙酸乙酯提取物呈现一定的量效关系.

本实验研究了二色波罗蜜对改善血瘀模型大鼠血液流变学各项指标的作用，证实了其活血化瘀的药效，为进一步研究其活血化瘀的具体作用机制及有效成分，从而最终将其开发成预防和治疗血瘀疾病的药物提供实验依据. ■

Abtract: Objective: To observe the hemorheology effect of extracts from Artocarpus styracifolius Pierre on the blood stasis model rats. Methods: The whole blood viscosity, plasma viscosity, red cell assembling index, platelet number, TT, PT, APTT and FIB were tested by continual exhaustive swimming model rats. Results: Compared with the model group, the index of hemorheology was improved by the extracts of Artocarpus styracifolius Pierre. The whole blood viscosity, plasma viscosity, red cell assembling index, platelet number, TT and FIB were reduced by the extracts from Artocarpus styracifolius Pierre. The PT, APTT were increased by extracts from Artocarpus styracifolius Pierre. Conclusion: The extracts from Artocarpus styracifolius Pierre had effect of improving index of hemorheology and the active fraction came from the ethyl acetate extracts from Artocarpus styracifolius Pierre.

Key woeds: Artocarpus styracifolius Pierre; hemorheology; active fraction【参考文献】

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【责任编辑 谢文海】

The Hemorheology Effect of Artocarpus styracifolius Pierre on the Blood Stasis Model Rats

LU Hai-xiao1，FENG Chun-feng2，HUANG Mei-ling1，WANG Yan-hua1，HE Xiao-fang1
(1. Yulin Normal University, Yulin, Guangxi 537000; 2. Yulin Maternal and Children Health Hospital, Yulin, Guangxi 537000)

R285.5

A

1004-4671（2015）02-0065-05

2014-03-01

广西教育厅科研项目（2013YB203）。

卢海啸（1974～），男，汉族，广西百色人，玉林师范学院生命科学与技术学院副教授，博士，研究方向：天然活性物质。