漆姑草多糖的提取及其含量的测定

胡明华，江忠远，金 茜

（遵义师范学院黔北特色资源应用研究实验室，贵州遵义563002）

漆姑草多糖的提取及其含量的测定

胡明华，江忠远，金 茜

（遵义师范学院黔北特色资源应用研究实验室，贵州遵义563002）

探讨了漆姑草多糖提取及含量测定的方法。采用蒸馏水溶解乙醇沉降法提取漆姑草中的多糖，用苯酚-硫酸法测定其含量。实验结果表明：该方法简单、方便、无污染，从漆姑草中提取的多糖含量高达20.19%。

漆姑草；多糖；含量；水提醇沉法

多糖物质是很多中草药的主要成分，生物活性较高，研究表明漆姑草水粗提物对人白血病K562细胞株具有较强的抑制作用[3]，具有较高的开发利用价值，因此探讨漆姑草多糖提取及含量测定的方法具有实际意义，可为漆姑草多糖药应用于临床提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料

漆姑草购于遵义市中医院，并经遵义市中医院孔蕾药剂师及遵义师范学院卫生院赵淑敏副主任医师鉴定。

样品经低温干燥后，用中药粉碎机破碎，过70目筛，采用四分法缩分，存放于玻璃瓶中备用。

1.2 仪器与试剂

仪器：T6新世纪紫外-可见分光光度计（普析通用）；RE-2000E旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；电子天平（北京多利斯仪器有限公司）；HH-1恒温水浴锅（海浦东物理光学仪器厂）。

试剂：葡萄糖、苯酚、浓硫酸、氯仿、无水乙醇、丙酮、正丁醇、石油醚（bp：30～60℃）、95%乙醇均为分析纯。

1.3 漆姑草多糖的提取方法

准确称取待用漆姑草70g于烧杯中，在25℃下用95%乙醇浸泡3次，每次浸泡时间为5h，95%乙醇用量依次为350mL、250mL、200mL。过滤，滤渣挥干溶媒后分三次加入蒸馏水400mL、250 mL、150 mL，于97℃水浴锅中浸提，每次3h，合并滤液，减压浓缩至150 mL。离心除去不溶物，过滤。滤液在搅拌下缓慢倒入95%乙醇至其醇浓度在80%左右，0～5℃静置一天。过滤，分别用20mL无水乙醇、20mL丙酮冲洗沉淀，于40℃真空干燥一天，得灰色粗产物3.9446g。

将上述粗产物用150mL二次蒸馏水溶解，离心分离上层清液。上层清液用Sevage试剂（氯仿:正丁醇=4:1）脱蛋白6次，直至无明显蛋白层[4-5]。收集上层透明液体，水浴蒸发至20mL，加入40mL无水乙醇醇析多糖，过滤。分别用20mL无水乙醇、20mL丙酮分多次冲洗沉淀，将沉淀物于40℃真空干燥一天得漆姑草多糖1.4381g。

1.4 葡萄糖标准溶液的配制

准确称取105℃恒重的葡萄糖10mg，定量转移至250 mL棕色容量瓶中，使其浓度为，用于漆姑草多糖的测定。

2 结果与讨论

2.1 苯酚-硫酸液的配制与测定波长的选择

取分析纯苯酚120g，在硫酸浴中蒸馏，收集180～182℃馏分。准确称取5.0g苯酚蒸馏物，用少量二次蒸馏水溶解，转移至100mL棕色容量瓶中定容，0～5℃冷藏备用。

在10mL具塞刻度试管中分别加入1.0mL葡萄糖标准液、1.0mL苯酚储备液，震荡下加入5.0mL95%硫酸溶液，混匀后沸水浴加热15min，冷至室温，在450～510nm范围内进行光谱扫描，其最大吸收峰波长为490nm（见图2）。

图1 最大吸收波长

2.2 标准曲线的制作

分别取0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4mL葡萄糖标准液于7支10.0mL具塞刻度试管中，用二次蒸馏水稀释至2.0mL，以2.0mL二次蒸馏水作空白试验。在具塞刻度试管中加入1.0mL苯酚储备液，摇匀，震荡下加入5.0mL95%硫酸溶液，摇匀后沸水浴加热15min。冷至室温，于490nm下测定其吸光度。以葡萄糖浓度为横坐标，吸光度为纵坐标制作葡萄糖标准曲线，得标准曲线回归方程：A=0.01708C-0.00663，R2=0.9990（见图2）。

图2 葡萄糖标准曲线

2.3 漆姑草多糖含量的测定

准确称取恒重后的漆姑草多糖10mg，用少量二次蒸馏水溶解后移入50mL棕色容量瓶中，定容。准确量取该溶液2mL，按照标准曲线测定方法测定其吸光度，用回归方程计算测定溶液中葡萄糖的浓度。

漆姑草多糖含量（%）=C×D×0.9/W×1000

式中：W为多糖的质量（mg），C为漆姑草多糖溶液中葡萄糖的浓度为漆姑草多糖的稀释因素：D=2×100/0.2=1000，0.9为葡萄糖校正系数。

由公式计算出提取的漆姑草多糖含量为20.19%。

2.4 紫外吸收光谱

取恒重后的漆姑草多糖l0mg，加适量二次蒸馏水溶解，用二次蒸馏水作空白，在200～600 nm范围内测定其吸收光谱（见图4）。

图3 紫外吸收光谱

由图3可看出，漆姑草多糖水溶液在280nm处有微弱吸收，说明用Sevage法除蛋白后的多糖仍残留有微量蛋白质、多肽；但在260nm处无吸收现象，说明溶液中无核酸存在。

2.5 漆姑草多糖的性质

漆姑草多糖恒重品为灰白色，无味，溶于热水，不溶于试剂级的无水乙醇、环己烷、二甲苯、四氯化碳、环己酮等有机溶剂。Molish反应有紫色环生成，苯酚-硫酸法呈阳性反应。

3 结论

采用95%乙醇浸泡去除漆姑草中的生物碱、苷类、低聚糖等物质，水溶醇析法提取多糖，Sevage法除蛋白，经分光光度法测定漆姑草多糖含量为20.19%。

漆姑草多糖经95%H2SO4酸化后水解为单糖，单糖脱水生成糠醛衍生物，最后和苯酚反应生成有色物质，显色反应稳定。用紫外可见分光光度法检测漆姑草多糖的含量，方法简单、可靠。

[1]国家中医药管理局《中华本草》编写组.中华本草[M].上海:上海科学技术出版社,1994．

[2]黄筑艳,李焱.漆姑草挥发油成分的研究[J].长春师范学院学报,2006,25(5):58-60．

[3]张素英,何林.漆姑草石油醚提取物化学成分分析及抗肿瘤活性筛选[J].安徽农业科学，2010,38(28):15590-15591.

[4]田卫.植物多糖的研究[D].兰州:兰州大学,2007．

[5]吴亚林.几种天然生物活性多糖的化学研究[D].杭州:浙江大学,2007．

（责任编辑：朱 彬）

On the Extraction and Determination of Polysaccharide in Sagina Japonica

HU Ming-hua，JIANG Zhong-yuan，JIN Qian
(The Application Research Lab for Featured Resources of Qianbei,Zunyi Normal College,Zunyi 563002,China)

This paper gives a full account of the extraction and determination of polysaccharide in Sagina Japonica.The study adopts the distilled water to dissolve ethanol to extract polysaccharide and then use phenol-sulfuric aid method to determine its content.The experiment shows that this method is simple and convenient,and the content of the polysaccharide reaches 20.19%.

Sagina Japonica;polysaccharide;content;water extraction and alcohol precipitation

O629.12

A

1009-3583（2015）-0102-03

2015-01-11

胡明华，男，贵州遵义人，遵义师范学院化学化工学院实验师。