毛细支气管炎磷酸化p38MAPK水平及与MCP-4的相关性

陈福将 吴铁峰 蔡振荡

毛细支气管炎磷酸化p38MAPK水平及与MCP-4的相关性

陈福将 吴铁峰 蔡振荡

目的 观察毛细支气管炎患儿血清、鼻咽分泌物（NPS）中磷酸化p38MAPK（P-p38MAPK）水平与单核细胞趋化蛋白4（MCP-4）的相关性，探讨P-p38MAPK的临床意义。方法 毛细支气管炎患儿31例为观察组及同期体检健康儿童30例为对照组，毛细支气管炎急性期、恢复期分别抽取NPS标本，采用酶联免疫吸附法测定血清、NPS中P-p38MAPK、MCP-4含量。结果 在急性期毛细支气管炎患儿血清P-p38MAPK、MCP-4含量与对照组比较差异均有统计学意义（P＜0.01）；中、重度组血清P-p38MAPK、MCP-4含量与轻度组比较差异均有统计学意义（P＜0.01）；毛细支气管炎患儿急性期NPS中P-p38MAPK、MCP-4含量与恢复期比较差异均有统计学意义（P＜0.01）。毛细支气管炎患儿血清中P-p38MAPK含量与MCP-4含量呈显著正相关（r=0.609，P＜0.01，n=31）。毛细支气管炎患儿急性期NPS中P-p38MAPK含量与MCP-4含量呈显著正相关（r=0.742，P＜0.01，n=30）。结论 毛细支气管炎患儿急性期血清、NPS中存在p38MAPK活化增加，并与MCP-4密切相关，提示p38MAPK通路参与调节毛细支气管炎的气道炎症。

毛细支气管炎 磷酸化p38MAPK 单核细胞趋化蛋白4

毛细支气管炎是婴幼儿最常见的下呼吸道感染。研究表明，丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号转导通路在气道炎症中起重要作用，机体发生炎症反应均与p38MAPK的激活紧密相关［1］。单核细胞趋化蛋白4（MCP-4）是C-C趋化因子，能选择性的将Th2细胞从外周募集至炎症部位，从而引起Th2介导的炎症反应［2］。作者观察毛细支气管炎患儿血清、NPS中P-p38MAPK水平及MCP-4的相关性，报道如下。

1 临床资料

1.1 一般资料 观察组：选择本院2012年9月至2013年3月毛细支气管炎住院患儿31例，男17例，女l4例；平均（7.8±4.2）月龄。入院前病程（3.47±1.65）d，诊断符合＜＜实用儿科学＞＞［3］第七版，均为首次发病，无基础心肺疾病。临床分度参考Bearman等［4］提出的标准，分为轻、中、重度。对照组：同期保健门诊体检健康儿30例，男16例，女l4例；平均（8.5±4.1）月龄。无个人和家族特应症（如支气管哮喘、过敏性鼻炎、特应性皮炎等）病史。两组性别、月龄差异均无统计学意义（P＞0.05）。本项目获院医学伦理学委员会的批准并得到患儿家长的知情同意。

1.2 方法 血液标本采集：所有对象于入院后次日早晨抽取空腹静脉血2ml，室温20～25℃，放置60min，2000r/min，离心10min，离心半径17.8cm，留取血清-70℃冻存备测。鼻咽分泌物（NPS）标本采集：毛细支气管炎患儿入院后第1天、第5天分别抽取NPS，经处理后将NPS吸入抽提管内，反复2～3次。取NPS 0.5ml，按1：2体积加入生理盐水，再加入抗黏液剂二硫苏糖醇（DTT）2～3滴，用吸管反复吹打至痰液稀薄，约3～5min，3000r/min，离心10min，离心半径17.8cm，留取上清液-70℃冻存备测。

1.3 ELISA测定 所有对象标本采用酶联免疫吸附分析法测定血清及NPS中P-p38MAPK、MCP-4浓度，P-p38MAPK试剂盒购自BIOSOURCE公司，MCP-4试剂盒购自R＆DSystems公司，均按说明书进行操作。

1.4 统计学方法 采用SPSS13.0软件。数据以（x±s）表示。采用t检验，两变量相关分析采用Bivariate过程的Pearson等级相关法。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组血清中P-p38MAPK、MCP-4含量比较 见表1。

表1 两组血清中P-p38MAPK、MCP-4含量比较（x±s）

2.2 毛细支气管炎患儿NPS急性期与恢复期中P-p38MAPK、MCP-4含量比较 见表2。

表2 NPS急性期与恢复期中P-p38MAPK、MCP-4含量比较（x±s）

2.3 毛细支气管炎患儿轻度、中重度血清P-p38MAPK、MCP-4比较 见表3。

表3 急性期轻度、中重度血清P-p38MAPK、MCP-4的含量比较（x±s）

2.4 相关性分析 毛细支气管炎患儿血清中P-p38MAPK含量与MCP-4含量呈显著正相关（r=0.609，P＜0.001，n=31）。毛细支气管炎患儿急性期NPS中P-p38MAPK含量与MCP-4含量呈显著正相关（r=0.742，P＜0.01，n=30）。

3 讨论

MAPK家族是一族胞浆内广泛分布的含有丝氨酸苏氨酸的蛋白激酶，其级联激活方式相似，都通过保守的三级酶促级联反应，最终导致一系列下游信号的活化。p38MAPK是MAPK家族中的一个成员，能被炎症、应激、损伤等因素启动信号激活，而参与细胞的炎症和凋亡［1］。研究表明，MAPK信号转导通路在炎症中起重要的作用。p38MAPK信号转导通路直接或间接影响单核/吞噬细胞免疫调节功能，p38MAPK抑制剂能阻止单核细胞的分化和趋化迁移，以及抑制MCP-1和巨噬细胞炎症蛋白-1α的趋化作用［5］。有研究证实，重症哮喘患者的肺泡细胞存在p38MAPK活化的增加［6］。Mercado等［7］通过重症哮喘外周血单核细胞的研究发现，IL-4、MCP-1的释放可促使哮喘p38MAPK的活化，应用p38MAPK抑制剂能恢复糖皮质激素的敏感性，提示p38MAPK通路参与调控哮喘的气道炎症。

MCP-4是与气道炎症密切相关的趋化因子，可诱导和趋化单核细胞、嗜酸细胞、嗜碱细胞、、、T淋巴细胞浸润。Kalayci 等［8］认为哮喘慢性缓解期的血浆MCP-4平均水平显著低于正常人的平均水平，哮喘急性发作期的血浆MCP-4平均水平也显著高于慢性缓解期；认为MCP-4是评价哮喘敏感性以及病情是否恶化的一个生物指标。武帆等［9］研究发现，哮喘发作期组患儿血清MCP-4水平明显高于哮喘缓解组、肺炎组及健康对照组，MCP-4参与儿童哮喘发病，并与病情严重程度有关，其水平可作为儿童哮喘诊断和病情评价指标。作者前期研究［10］认为 ，毛细支气管炎患儿急性期血清MCP-4与临床病情严重程度密切相关，认为测定血清MCP-4水平对判断毛细支气管炎病情严重程度有重要的临床价值。本资料也显示，毛细支气管炎患儿急性期外周血中MCP-4水平明显高于健康对照组，急性期NPS中MCP-4水平明显高于恢复期。

目前尚无p38MAPK与MCP-4相关性的研究报道，作者推测与MCP-1相类似，一方面MCP-4的释放可激活p38MAPK，另一方面，p38MAPK通过对基因表达的调控作用，影响MCP-4的表达、产生。本资料显示，血清中P-p38MAPK含量与MCP-4含量有显著正相关（r=0.609，P＜0.01），且急性期NPS中与MCP-4含量也有显著正相关（r=0.742，P＜0.01）。这表明P-p38MAPK与MCP-4密切相关，可反映毛细支气管炎的炎症情况。综上所述，作者认为毛细支气管炎患儿急性期血清、NPS中存在p38MAPK的活化的增加，并与MCP-4密切相关，提示p38MAPK通路参与调节毛细支气管炎的气道炎症。

1 Cuadrado A, Nebreda AR. Mechanisms and functions of p38 MAPK signalling. Biochem J. 2010, 429(3):403～417.

2 Odaka M, Matsukura S, Kuga H, et al. Differential Regulation of Chemokine Expression by Th1 and Th2 Cytokines and Mechanisms of Eotaxin/CCL-11 Expression in Human Airway Smooth Muscle Cells Int Arch Allergy Immunol. 2007,143(Suppl 1): 84～88.

3 胡亚美,江载芳,诸福棠.实用儿科学.第七版.北京:人民卫生出版社,2008.1199～1201.

4 Bearman JE, Tal A,Baviski C, et al. Dexamethasone and salbutamol in the treatment of acute wheezing in infants. Pediatrics, 1983,71(1):13～18.

5 Ayala JM, Goyal S, Liverton NJ, et al. Serum-induced monocyte differentiation and monocyte chemotaxis are regulated by the p38 MAP kinase signal transduction pathway. J Leukoc Biol, 2000,67(6):869～875.

6 Bhavsar P, Khorasani N,Hew M, et al. Effect of p38MAPK inhibition on corticosteroid Suppression of cytokine release in severe asthma.,Eur Respir J 2010, 35(4): 750～756.

7 Mercado N, Hakim A, Kobayashi Y, et al. Restoration of corticosteroid sensitivity by p38 mitogen activated protein kinase inhibition in peripheral blood mononuclear cells from severe asthma. PLoS One. 2012,7(7): e41582.

8 Kalayci O, Sonna L A,Woodruff P G, et al. Monocyte Chemotactic Protein-4(MCP-4; CCL-13):A Biomarker of Asthma. J asthma. 2004,41(1):27～33.

9 武帆,孙中厚,衣瑞华,等.哮喘儿童外周血MCP-4、MDC、CysLTs检测及临床意义.中国儿童保健杂志,2013,21,(7),733～736.

10 陈福将,李昌崇,罗运春,等. 毛细支气管炎患儿血清MCP-4、MDC和IL-4水平及临床意义.临床儿科杂志,2007,25(5),361～363.

325000 浙江省温州市中西医结合医院呼吸科