西红康对实验性糖尿病肾病大鼠肾脏结构和功能的影响

康静蕊，玉山江·艾克木

(新疆医科大学研究生学院，新疆乌鲁木齐 830000)

糖尿病肾病 (diabetic nephropathy，简称DN)是糖尿病临床常见的合并症之一，是西方国家终末期肾病(ESRD)的首要原因，其发病率在我国也有上升趋势［1］。探索糖尿病肾病患者的防治方案，提高糖尿病肾病患者生活质量是目前人们最需要解决的问题。糖尿病属于中医消渴范畴，其病机是阴虚为本、燥热为标，糖尿病肾病早期以阴虚为主，久病阴虚累积气虚，而致气阴两虚，而燥热渐消，气虚无以助血运行，阻滞经脉，形成气阴两虚夹瘀证候。益气养阴、解毒化瘀法是治疗早期糖尿病肾病的基本原则，西红康是在中医络病理论指导下，针对 DN早期气阴两虚、络脉瘀滞的病机研制的中药制剂。本文通过建立DN动物模型，考察西红康对于肾脏尿微量白蛋白排泄的影响及对肾脏的保护作用。为更深入的研究和临床运用提供实验依据。

1 材料和方法

1.1 实验动物 Wistar大鼠32只，雄性，体重180～200 g，由新疆医科大学第一附属医院科技楼动物饲养中心提供，动物合格证号:SCXK(新)2003-0001。所有动物均分笼饲养，饲养温度(20±2)℃，自然光照。所有大鼠均实验前适应性饲养1周。

1.2 试剂和仪器 日立7150型自动生化仪器(日本日立公司);稳豪型血糖试纸(强生(中国)有限公司;H-7650型透射电镜(日本HITACHI);BX63+DP72显微镜(日本OLYMPUS株式会社);BSA124S-CW精密电子秤(赛多利斯科学仪器北京有限公司);JY10001电子秤(上海精密科学仪器有限公司);Accu-chek Advantage血糖仪(德国罗氏)。

链尿佐菌素(Streptozocin，STZ)(美国Sigma公司);糖适平片(北京第六制药厂);西红康方，来自新疆自治区中医院中药房统一采购的中药(批号:1010087)。按传统方法煎熬过滤后，将药液浓缩，使药液浓缩至每毫升含生药量1.9 g。

1.3 模型构建 所有大鼠适应性饲养1周后，高脂高糖饲料喂养4周，4周末按35 mg·kg-1腹腔注射STZ(采用2%枸橼缓冲液配制)。72 h后取血，保留24 h尿量，检测大鼠空腹血糖、尿量和尿糖确定模型是否构建成功。模型建立标准:空腹血糖≥14 mmol·L-1，尿量≥正常尿量50%;尿糖呈强阳性者为DN模型成立，模型复制8周结束［2］。造模大鼠中符合纳入标准者进入本实验。

1.4 实验分组及给药 Wistar大鼠32只，雄性，体重180～200 g，随机分为4组:模型组，中药西红康组，糖适平阳性组，正常对照组，每组8只。西红康方配成混悬液，按每公斤体重(1.0 g药粉·d-1，相当于成人0.15 g·kg-1·d-1)灌胃，每日上午9～10点1次，连续给药56 d(8周)。阳性组:糖适平5 mg·kg-1·d-1(相当于成人300 mg·d-1)，灌胃，每日1次。连续给药56 d(8周)。模型组:每只生理盐水2 mL，灌胃，每日1次。连续给药56 d(8周)。正常组:不作任何处理。以上各组均自由取食，自由饮水。

1.5 观察指标 一般情况:对各组大鼠的行为表现、饮水量、尿量、精神状态、饮食、毛色、体重等进行观察，每天供给足量普通饲料及饮水。血糖测定:一次性腹腔注射链脉佐菌素72 h后及用药8周后，使用内径为1.0 mm的毛细玻璃管刺入大鼠眶后静脉丛取血，测定每只大鼠的血糖值。24 h尿微量白蛋白测定:分别于给药前和8周末，用代谢笼留取每只大鼠 24 h尿液，记录尿量;取 2 mL，-20℃冰箱保存，用于尿微量白蛋白测定测定。尿微量白蛋白用大鼠尿微量白蛋白ELISA(酶联免疫法)试剂盒测定。肾脏病理切片的观察:实验8周末，取所有大鼠肾脏病理切片，分别在光镜和电镜观察4组大鼠的病理切片下的肾脏的情况。

1.6 统计学分析 所有统计在SPSS 13.0软件上完成。观测数据均为计量资料，采用(±s)表示，均通过正态性检验。各指标资料均以给药前的数据水平作为协变量，对8周后的观测结果进行统计校正，据此进行单因素方差—协方差分析及各组间的两两比较。显著性水准α=0.05。

2 结果

2.1 各组大鼠血糖和体重变化 各组大鼠血糖和体重两指标的资料列于表1。考虑到该两指标在给药前的数据水平会对用药后8周的结果产生一定的影响，故行单因素方差—协方差分析，即以给药前的数据作为协变量处理，对8周后的结果进行统计控制。整体分析结果(单因素方差—协方差分析)显示:用药8周后的血糖和体重资料的4组整体比较，均有统计学意义(P＜0.05)，遂继续进行各组间两两比较。

经两两组间比较并结合数据来看:给药前，模型组、阳性组和西红康组在血糖、体重指标中均很接近。给药8周后，阳性组和西红康组血糖水平相对于模型组均有统计学差异(P＜0.05)，阳性组和西红康组体重相对于模型组也均有显著性统计学差异(P＜0.05);阳性组和西红康在血糖水平和体重均无统计学差异，见表1。

表1 各组大鼠血糖和体重变化(n=8，±s)

表1 各组大鼠血糖和体重变化(n=8，±s)

组别血糖/mmol·L-1给药前 用药后8周体重/g给药前 用药后8周A 组:正常组 6.72 ±1.23 6.81 ±1.52 336.32 ±13.42 441.12 ±16.23 B 组:模型组 19.11 ±4.32 17.81 ±5.23 313.23 ±11.29 299.23 ±13.26 C 组:阳性组 18.76 ±4.06 12.24 ±3.78 319.10 ±12.47 365.21 ±14.23 D组:西红康组 18.89 ±5.29 13.22 ±3.62 314.71 ±11.85 369.26 ±14.26整体方差—协方差分析(F，P)方差分析 18.440，0.000 11.47，0.000 6.297，0.002 126.95，0.000协方差分析 6.690，0.015 15.518，0.001校正后方差分析 — 4.11，0.016 — 105.22，0.000多重比较-LSD检验(LSD-t，P)A 组 vs B 组 — 3.253，0.003 — 17.173，0.000 A 组 vs C 组 — 0.213，0.833 — 8.710，0.000 A 组 vs D 组 — 0.736，0.468 — 7.672，0.000 B 组 vs C 组 — 3.040，0.005 — 8.464，0.000 B 组 vs D 组 — 2.517，0.018 — 9.501，0.000 C 组 vs D 组 — 0.523，0.605 — 1.038，0.308

2.2 各组大鼠尿微量白蛋白比较 各组大鼠24 h尿微量白蛋白资料列于表2。同前方法，行单因素方差—协方差分析。整体分析结果(单因素方差—协方差分析)显示:该指标用药8周后的4组整体比较，均有统计意义(P＜0.05)，遂继续进行各组间两两比较。

经两两组间比较并结合数据来看，正常组相对于模型组、阳性组、西红康组均有显著性统计学差异(P＜0.05);模型组相对于阳性组、西红康组也均有显著性统计学差异(P＜0.05);此外，阳性组相对于西红康组也有显著性差异(P＜0.05)，见表2。

表2 各组大鼠24 h尿微量白蛋白比较(n=8，±s)/μg

表2 各组大鼠24 h尿微量白蛋白比较(n=8，±s)/μg

组别 给药前 用药后8周A组:正常组86.56 ±14.41 85.35 ±13.39 B 组:模型组 504.24 ±56.23 757.81 ±75.23 C 组:阳性组 500.22 ±63.21 656.92 ±89.78 D 组:西红康组 509.26 ±51.98 532.22 ±43.53整体方差—协方差分析(F，P)方差分析 138.947，0.000 178.30，0.000协方差分析 6.317，0.018校正后方差分析 — 26.13，0.000多重比较-LSD检验(LSD-t，P)A 组 vs B组 — 14.664，0.000 A 组 vs C组 — 11.407，0.000 A 组vs D 组 — 7.137，0.000 B 组vs C组 — 3.257，0.003 B组 vs D 组 — 7.527，0.000 C组vs D组 — 4.270，0.000

2.3 各组大鼠肾脏结构变化 正常组大鼠肾脏肾小球结构完整，未见体积增大;模型组大鼠肾小球体积增大，系膜细胞发生中度增生，肾间质可见炎症细胞浸润，系膜区增宽，毛细血管基底膜弥漫性增厚，肾小球上皮细胞肿胀;阳性组肾小球体积减少，系膜细胞发生增生缓解，轻度增生，有少量炎症细胞浸润，系膜区增宽减少，毛细血管基底膜轻度增厚;西红康组肾小球降低，系膜细胞轻度增生，肾间质可见少量炎症细胞浸润，少量胶原纤维，基底膜轻度增厚。见图1。

正常组大鼠肾脏系膜细胞、滤过膜内皮细胞和足细胞均结构正常，细胞核清晰，细胞质内可见各细胞器;模型组毛细血管基底膜结构模糊，系膜细胞基质增生，足细胞呈不规则形，可见较大电子密度高的泡状结构，内皮细胞胞质局部融合;阳性组和西红康组病理状态均有所改善，毛细血管基底膜结构较清晰，系膜细胞和系膜基质基本恢复正常，足细胞结构清晰，可见核局部，内皮细胞胞质融合程度下降。见图2。

3 讨论

糖尿病肾病是糖尿病最常见的慢性微血管并发症之一。在糖尿病中的发病率高达47.66%，是造成慢性肾功能衰竭的常见病因，占糖尿病患者死亡率的60%，其临床表现为不同时期的蛋白尿、肾脏结构改变、肾小球滤过率改变(早期增加，晚期进行性下降)、高血压、肾功能衰竭等［3］。糖尿病肾病发病隐匿，早期不易被发现，出现症状时肾脏的病变已经不可逆转。长年糖尿病导致肾脏的滤过功能被破坏，最初表现为微量白蛋白尿。随着病程延长，尿蛋白增加，肾脏排除血中毒素的能力逐渐减退，最终发展为终末期肾病［4］。

糖尿病肾病的治疗史上，中医医学对糖尿病肾病的病因病机的认识和治疗有着悠久的历史，糖尿病肾病的形成多由禀赋不足、过食肥甘、情志所伤、劳欲过度等引起［5］。近代医家对DN病机认识颇多，但以本虚标实为主，消渴日久，耗气伤阴而致气阴两虚，渐致阴阳五脏亏虚，而湿、浊、痰、瘀诸邪蕴结于肾，故“本虚标实”为本病的基本病机［6］。中医从整体出发，根据“五脏皆柔弱者，善病消瘅”，认为糖尿病肾病早期以正气虚损为主，久病必虚，气阴两虚，存在于从糖尿病到糖尿病肾病的全过程中［7］。

本研究认为糖尿病肾病是在糖尿病以阴虚为本，气阴两虚为基本证型的基础上进一步演变而来。气阴两虚是糖尿病肾病本虚之基本病机，瘀血贯穿于糖尿病肾病始终，本病发生与肾、肝、脾、肺、心渐次受伤有关。为此本研究在老中医经验方基础上，结合新疆道地药材及糖尿病肾病特点建立西红康组方。西红康针对糖尿病肾病气阴两虚夹血瘀的发病机制，采用益气养阴，解毒化瘀法。方中黄芪、太子参补气养阴，芡实、山茱萸、山药补肾固精，熟大黄逐瘀清热，川芎、草红花、红景天活血化瘀通络，诸药合用益气养阴、补肾活血功能［8］。现代药理研究表明，黄芪及有效成分有较好地降低尿蛋白、降糖、降压和扩张血管作用，可明显降低糖化血红蛋白，减少微量白蛋白排出［9］;有研究亦表明，黄芪有防止或逆转蛋白尿作用，其减少大多数肾脏疾病尿量的排泄被大家所公认［10］。且黄芪可抑制肾脏一氧化碳(NO)的产生，可部分纠正糖尿病早期肾血流动力学异常，对DN的发生有一定的预防作用［11］。山茱萸、山药均有降糖的作用，大黄及有效成分可以抑制肾小球系膜细胞增殖，抑制血管紧张素转换酶，具有延缓肾衰进展，保护肾功能的作用［12］。川芎、草红花、红景天均有扩张外周血管，增加器官血流量，抑制血小板凝集的功效。诸药相配，共凑益气养阴、解毒化瘀之效。

本研究中发现，西红康给药8周后，可明显的降低模型大鼠的血糖水平，说明该组方具有降血糖的功能，通过对尿微量白蛋白的检测，西红康显著降低了尿微量白蛋白的含量，且优于对照组，西红康可改善糖尿病肾病的肾脏功能，通过对肾结构的病理学观察，西红康可保护肾脏结构受损。综上述，西红康汤具有较好地控制血糖、降低尿微量白蛋白的作用，从而可以延缓糖尿病肾病的进展，保护肾功能，为临床使用该组方提供了更丰富的理论资料。

［1］陈 曦，汪永忠，段贤春，等.中药有效成分防治糖尿病肾病的实验研究进展［J］.安徽医药，2013，17(9):1461-1463.

［2］朱铁锤.决明子对糖尿病大鼠肾脏纤维化的抑制作用［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18(24):315-319.

［3］高若愚，曲竹秋，常 柏，等.抵挡汤对糖尿病肾病大鼠肾脏ICAM-1作用的影响［J］.中国实验方剂学杂志，2012，18(12):143-145.

［4］耿文佳，魏日胞，毛 炜，等.复方肾华片对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用研究［J］.中国中西医结合杂志，2012，32(3):352-355.

［5］王凤玲，唐丽琴，杨 峰，等.小檗碱对高脂合并STZ诱导的糖尿病肾病大鼠肾脏FN与CTGF表达的影响［J］.安徽医药，2013，17(4):549-551.

［6］兰 平，尹爱萍，申 斐，等.2型糖尿病肾病患者血清内脂素水平的变化［J］.西安交通大学学报(医学版)，2012，33(6):735-738.

［7］马丽娟，杜国利，吕文魁，等.氯沙坦钾对2型糖尿病肾病大鼠肾脏 TGF-β1、CD68 和 MCP-1 表达的影响［J］.中国病理生理杂志，2012，28(5):947-950.

［8］李黎莉.陈志强.益气养阴活血通络方对糖尿病肾病大鼠足细胞的影响［D］.石家庄:河北医科大学，2012.

［9］徐 刚，刘茂林，傅珍春，等.三七总皂苷对糖尿病肾病大鼠的肾脏保护作用及机制［J］.中国临床药理学杂志，2012，28(9):665-667.

［10］张振忠，豆小妮，赵宏波，等.参芪糖肾安胶囊治疗糖尿病肾病的动物实验研究［J］.现代中医药，2007，27(5):69-71.

［11］祁忠华，林善锬，黄宇峰.黄芪改善糖尿病早期肾血流动力学异常的研究［J］.中国糖尿病杂志，1999，7(3):147-149.

［12］许榕仙，范岩峰，向建军，等.叶酸、维生素B12对糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用的研究［J］.卫生研究，2012，41(6):911-915.