红景天苷对局灶性脑缺血大鼠脑组织MAPK信号通路的影响

张小琴，赖文芳，褚克丹，洪桂祝

（福建中医药大学药学院，福建 福州350122）

红景天是蔷薇目景天科红景天属亚灌木或多年生草本植物［1］，主要分布在高山地带，因其生长环境恶劣，气候多变，使其具有极强的环境适应能力和生命力，有滋补强壮、扶正固本的功效。红景天苷是红景天的主要活性成分，近年来对红景天苷药理作用方面的研究有了较大的进展。研究表明红景天苷具有广泛的药理作用，除了抗疲劳、抗肿瘤、抗微波辐射、抗衰老的功效，还有抗缺氧、抗肝纤维化、心脑血管系统保护、抗肾损害、增强记忆、增强免疫、调节内分泌等多种药理作用［2－3］。我们用基因芯片技术，从分子机制上对红景天苷作用于局灶性脑缺血大鼠脑组织基因表达进行研究，以阐明红景天苷对局灶性脑缺血大鼠组织MAPK信号通路的影响。

1 材料与方法

1.1 药物 红景天苷由福建中医药大学生物医药研发中心化学合成实验室提供，纯度98%以上。实验前用超纯水配制，按50m g／k g腹腔注射给药。基因芯片由上海康成生物工程有限公司提供。

1.2 动物 健康成年SD大鼠，雄性，SPF级，体质量250～350g，福建中医药大学实验动物中心提供，许可证号：SYXK（闽）2009－0001。动物分笼饲养，饲养环境：每笼5只；温度：22℃～25℃；相对湿度：40%～70%；饮食：自由进食水和饲料。

1.3 方法 大鼠20只，随机分为3组：正常组、局灶性脑缺血组（模型组）、红景天苷给药组（给药组）。实验采用颈内动脉线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞（MC AO）模型［4］，大鼠用10%水合氯醛溶液腹腔注射麻醉，仰卧固定于手术台上。沿颈部正中切开皮肤，用镊子钝性分离皮下组织，分离到气管前肌后，沿右侧胸锁乳突肌腱向下分离，可见光滑的颈总动脉，分离出颈总、颈外、颈内动脉，结扎颈总动脉、颈外动脉。用动脉夹夹闭颈内动脉，用眼科剪将颈总动脉剪一小口，插入鱼线，插入成功后，结扎颈内动脉，插入深度距动脉分叉约2mm。在伤口处抹上庆大霉素，缝合伤口。将大鼠放入笼中，保温处理，2h后再灌拔线。给药后7d断头取脑，用刀片完整切出左脑（手术侧），放入预先装有RNAlater的冻存管中，置于液氮罐冻存备用。

2 结果

2.1 大鼠脑组织mR NA质检和质控结果 取正常组、模型组、给药组大鼠的左脑，用Trizol法抽提组织R NA，得到R NA样品浓度、总量和质控琼脂糖电泳图，见表1、图1。18S和28S条带都很清晰，总R NA吸光度值A260／A280＞1.9，表明得到的高纯度总R NA，可以用于后期的基因芯片实验。

表1 9个样品O D值、浓度、总量和电泳信息

2.2 红景天苷对局灶性脑缺血大鼠MAPK通路的影响 以红景天苷大鼠芯片阳性表达基因genesymbol为目录，输入京都基因及基因组学数据库（KEGG）得到其蛋白Pathway通路，见图2。

2.3 红景天苷对局灶性脑缺血大鼠MAPK通路关键基因的影响 以通路中出现的阳性基因为序，找到其对应的基因s y m b l e和注释，并对其上下调情况进行统计，见表2。

3 讨 论

MAPK信号通路是由一组以级联方式依次活化的丝／苏氨酸蛋白激酶组成，每种MAPK被特异的MAPK激酶（MAPKK，ME K）激活，后者又被MAPKK激酶（MAPKKK，ME KK）激活。MAPK信号通路正是通过这种三级酶促级联反应激活其下游转录因子，以此将细胞外信号逐级放大并传导到细胞内乃至细胞核，把膜受体结合的胞外刺激物与细胞质和细胞核中的效应分子连接起来。MAPK是该信号通路的枢纽，激活的MAPK通过磷酸化核转录因子、细胞骨架蛋白及酶类等，参与细胞增殖、分化、转录及凋亡调节，并与炎症、肿瘤及其他多种疾病发生机制密切相关［5］。本实验从红景天苷对MAPK信号通路的基因水平进行阐释，红景天苷可能是通过影响了MAPK信号通路的相关基因而产生对局灶性脑缺血大鼠的保护作用，其主要作用靶基因有CACNA1S、CACNB3、CACNG3、DUSP6、FOS、MAPK11、NLK、NR4A1、PRKCB。

表2 红景天苷对局灶性脑缺血大鼠MAPK通路的关键基因的影响

［1］全国中草药编著组 .全国中草药汇编：下册［M］.北京：人民卫生出版社，1996：273－274.

［2］崔艳梅，娄安如，赵长琦 .红景天属植物化学成分及药理作用研究进展［J］.北京师范大学学报：自然科学版，2008，44（3）：328－332.

［3］李丹红，孟玉彩，赵文 .红景天植物生物活性研究进展［J］.毒理学杂志，2008，22（4）：320－323.

［4］XU X，CHUA C C，GAO J，et al.Neuroprotective effect of humanin on cerebral ischemia／reperfusion in jury is mediated by a PI3K／Aktpathway［J］.Brain Res，2008，1227：12－18.

［5］莫建文，黄河，张春强，等 .丝裂原活化蛋白激酶信号通道对大鼠创伤性深静脉血栓形成影响的实验研究［J］.2007，27（10）：919－921.