γ－干扰素释放试验（TB－IGRA）在结核性胸膜炎诊断中的应用

王 健，刘 欣

我国是全球22个结核病高负担国家 （占全球结核病例的80%）之一，结核病发病类型多样，几乎全身各个组织脏器都能受到结核杆菌感染，在平时诊疗过程中，经常会遇到不典型肺外结核、肺结核，尤其是肺外结核常因病情隐匿或表现不典型，极易误诊漏诊［1］，对感染结核杆菌的患者进行早期诊断和治疗是改善其疾病预后的关键，也是目前发展中国家结核防治工作的重点。但目前的鉴别方法有限，实验室诊断方法主要有细菌培养、结核抗体检测、PPD试验等。细菌学是诊断结核的金标准，但常规培养需要时间长，而且阳性率取决于采集标本中细菌的数量，不利于早期诊断与治疗。血清中结核抗体检测对肺结核和肺外结核的诊断都有一定价值［2］，但若患者免疫功能低下、结核抗体的滴度低、患者处于感染初期，抗体尚未产生等因素，血清结核抗体检测同样也存在假阳性和假阴性的问题［3］。PPD试验在我国应用广泛，但特异性不够好，由于我国一直实施的卡介苗（BCG）作为常规接种疫苗，PPD的阳性或者弱阳性结果很可能是由BCG接种引起的，同时不能除外非结核分枝杆菌（NTM）感染。其次PPD试验对潜伏性结核分枝杆菌感染的敏感性一般，而且对于免疫抑制者结果难以确定［4，5］。

1 资料与方法

1.1 一般资料 收集2012年11月—2014年11月笔者所在医院92例诊断结核性胸膜炎患者的临床资料，其中男76例，女16例；年龄18～82岁。结核性胸膜炎患者的诊断均依据临床表现、细菌学、影像学或1个月内抗结核药物治疗情况。

1.2 方法

1.2.1 结核抗体检测 静脉抽取肘静脉血4 ml，采用免疫胶体金法，试剂盒来自上海奥普生物医药有限公司。

1.2.2 γ－干扰素释放试验 试剂盒来自北京万泰生物药业股份有限公司。按照说明书操作，抽取所有患者外周静脉血液 4 ml，在 2 h内各分装 1.0 ml到本底对照培养管（N）、测试培养管（T）及阴性对照培养管（P）三个培养管中，于37℃恒温箱 （22±2）h培养，全血离心10 min，取上清血浆进行ELISA检测。通过酶标仪检测吸光度（A值），用校准品浓度值与A值拟合乘幂曲线，计算样品中IFN－γ含量，设定测试培养管（T）含量值＝T，本底对照培养管（N）含量值＝N，阴性对照培养管（P）含量值＝P。结果N≤400实验有意义，当T－N≥14，并且≥25%N，不管 P－N 为任何值，均为阳性；当 T－N≥14，但＜25%N，或＜14 时，此时 P－N≥20 均为阴性；若 T－N＜14，P－N＜20 或 T－N≥14，但＜25%N，且 P－N＜20 时，实验结果为不确定。最后结果以阳性、阴性及不确定三种方式表达。

1.3 评价指标 以临床最终诊断结果作为金标准，评价两个试验的灵敏度、特异度、假阳性率和假阴性率。

1.4 统计学处理 采用SPSS 17.0统计软件进行分析。计数资料采用χ2检验。以P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结 果

92例患者中共诊断出结核性胸膜炎67例，诊断率72.8%，非结核性胸膜炎25例占27.2%。两种检测在疾病诊断中的结果见表1。

表1 两种检测方法在疾病诊断中的结果（例）

TB－IGRA检测的敏感性为84.8%，特异性为 88%，假阴性率为15.2%，假阳性率为12%，阳性预测值94.9%、阴性预测值68.8%。结核抗体的敏感性为64.4%，特异性为54.5%，假阴性率为 35.6%，假阳性率为 45.5%，阳性预测值 71.7%、阴性预测值46.2%。TB－IGRA检测的灵敏度和特异度显著高于结核抗体，两者差异有统计学意义（P＜0.05）；而假阴性率和假阳性率低于结核抗体，两者差异也有统计学意义 （P＜0.05）。

3 讨 论

γ－干扰素释放试验（TB－IGRA）是检测结核疾病的一种新型免疫学方法，由酶联免疫斑点试验优化发展而来。其作用原理为当人体感染结核分枝杆菌后，能产生特异性T淋巴细胞，并存在于外周血中，外周血中的特异性T淋巴细胞再次接触结核抗原后被激活，并分泌γ－干扰素。TB－IGRA用结核分枝杆菌特异抗原在体外刺激待检者的全血，经过培养后，定量检测血清中的γ－干扰素含量变化，即可判断体内是否存在结核特异的T淋巴细胞，进而说明是否存在结核分枝杆菌感染。其检测不受卡介苗及其他致病性非结核分枝杆菌的干扰，且操作简单24 h即可得出结果。同时通过定量检测上清中的γ－干扰素含量变化量可判断患者病程进展和体内细菌数量：治疗开始后，结核患者中IGRA的敏感性和反应强度均有明显的下降趋势，提示体内细菌数量同TB－IGRA反应呈正相关［6］，已有相关文献报道［7，8］。 国外研究显示 TBIGRA在活动性结核病例中敏感性达90%以上［9］，特异性达97～100%［9］， 本院收治的患者中 TB－IGRA 检测的敏感性、特异性均较文献偏低，考虑与收集的病例数偏少相关，同时有1例结果出现不确定，该患者被证实长期服用激素，免疫功能下降。TB－IGRA试验也存在着一些缺点：比如试剂价格较昂贵，阳性结果仅提示患者存在结核感染，是否为活动性结核仍需要结合临床症状、病史以及其他辅助检查等进行综合判断；阴性结果也可能是假阴性，也得根据临床资料综合考虑；长期服用免疫抑制药的患者或免疫功能低下的患者有可能出现不确定结果。因此，TB－IGRA检测仍需进一步研究完善。总的来说，TB－IGRA灵敏度和特异度显著高于结核抗体检测，而假阴性率和假阳性率低于结核抗体检测，其临床应用价值明显高于结核抗体检测，值得临床推广应用。

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