雌激素受体β基因多态性与汉族高龄女性高脂血症的相关性研究

辛佳蔚，章军建，刘昌云，杨英，罗玲

雌激素受体β基因多态性与汉族高龄女性高脂血症的相关性研究

辛佳蔚1，章军建2，刘昌云1，杨英2，罗玲1

目的：探讨雌激素受体β（ERβ）基因多态性与中国汉族绝经后女性高脂血症之间的相关性。方法：检测59例高脂血症绝经后妇女（高脂血组）及59例无高脂血症的同龄女性（对照组）的ERβrs944050的单核苷酸多态性，分析其与高脂血症的关联性。结果：ERβ的SNPrs944050的等位基因A、G频率在高脂血组和对照组分别为0.500、0.500、0.669、0.331。基因型频率分布符合Hardy-Weinberg平衡。SNP rs944050，A/A、G/G与G/A+G/G之间差异有统计学意义（P=0.02）。SNPrs944050的等位基因G升高高脂血症发生的风险（OR= 2.03，95%可信区间为1.20～3.43）。结论：在中国汉族绝经后妇女中，ERβ基因SNPrs944050的单核苷酸多态性与高脂血症相关。

高脂血症；雌激素受体β；相关性；多态性；妇女

大量研究证明，高脂血症作为一种重要的脂代谢异常疾病，是脑血管病的重要危险因素[1]。人体血脂代谢既受先天遗传因素影响，也受后天饮食习惯、生活方式等因素影响，雌激素已被证明具有显著的心脑血管保护作用。现代研究发现，雌激素的生物学效应主要通过雌激素受体（estrogen receptor，ER）介导[2]，并可改善人体脂代谢，延缓动脉粥样硬化损伤[3]。因此，ER基因多态性及由此引起的ER表达的改变可能会与雌激素的血脂保护作用相关。为此，本研究通过检测湖北地区汉族绝经后妇女高脂血症患者和无高血脂的绝经后妇女的ERβrs944050位点的基因多态性，探讨ERβ基因多态性在中国汉族绝经后妇女中与高脂血症的相关性。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集2013年9月至2015年1月于武汉大学中南医院就诊的高脂血症汉族绝经后妇女59例为高脂血组，平均年龄（71.08±0.86）岁。另选择59例无高脂血症的年龄匹配的汉族女性为对照组，平均年龄（71.44±1.28）岁。所有入选者均为自然人群，无血缘关系。排除继发性（包括药物相关性）及家族性高脂血症、绝经过早、卵巢切除及应用激素替代治疗（hormone replacement therapy，HRT）者。高脂血症诊断标准按照《2007年中国成人血脂异常防治指南》制定标准[4]，甘油三酯（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白（low densith lipoprotein-cholesterol，LDL-C）和/或总胆固醇（total cholesterol，TC）升高（TG≥1.76mmol/L、LDL-C≥3.37mmol/L、TC≥5.18mmol/L）。所有入组者在首次就诊及明确是否存在高脂血症时均未服用他汀类降脂药物或其他影响血脂水平的药物，诊断后则允许服用他汀类降脂药物。

1.2 主要试剂

离心柱型血液基因组DNA提取试剂盒、DNA染料[天根生化科技（北京）有限公司]；Taq酶、ExTaq酶、dNTPs、DNA分子量标准 [日本宝生物工程（大连）有限公司]。扩增引物委托上海生工生物工程技术服务有限公司合成。

1.3 方法

记录2组糖尿病及身体质量指数（bodymass index，BM I）值。

1.3.1 DNA提取及检测 将20μL蛋白酶K溶液加入全血标本混匀，加入200μL缓冲液 GB，混匀，56℃放置10m in。加200μL无水乙醇，混匀。将所得上部溶液加入吸附柱CB3，依次分别加入500μL缓冲液GD，700μL漂洗液PW，500μL漂洗液PW，将吸附柱CB3放回收集管中，最后转入1.5m L离心管中，向吸附膜中间位置悬空滴加200μL脱缓冲液TB，室温放置2m in，12 000rpm离心2min，弃去废液，室温放置数分钟，以彻底晾干漂洗液。用l%琼脂糖凝胶在120 V电压条件下电泳，检测全血标本基因组DNA是否完整。

1.3.2 PCR体外扩增目的基因 在Biorad iCycler PCR仪进行PCR扩增，扩增程序如下：预变性2min，变性30 s（94℃），退火30 s（62℃），延伸1min（72℃），共循环35次，终延伸10m in（72℃），扩增产物在4℃条件下保存。将其在1%的琼脂糖胶上电泳分离，对目的条带（700 bp）进行切胶。使用DP209-离心柱型-普通DNA凝胶回收试剂盒对切胶后的PCR产物进行纯化回收。

1.3.3 测序及结果分析 基因测序采取双脱氧法进行，仪器为ABI3730测序仪，测序结果分析采用Bioedit Sequence AlignmentEditor软件进行。

1.3.4 血脂测定 所有受试者均于清晨8:00采空腹血，血标本采用 Olympus AU-1000全自动生化分析仪进行血清TC、TG、高密度脂蛋白（high densith lipoprotein-cholesterol，HDL-C）、LDL-C测定，每次测定均选用高、中、低3种质控样品分析。

1.4 统计学处理

应用SPSS17.0软件分析数据，分析检验对象是否属于Hardy-Weinberg平衡群体，χ2检验，P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 2组间糖尿病、原发性高血压和超重患者比较

2组糖尿病患者数量差异无统计学意义（P=0.08）；高脂血组的原发性高血压患者比例和超重（BM I值≥23 kg/m2）患者比例高于对照组，差异有统计学意义（P=0.04，P=0.01），见表1。

表1 2组相关危险因素比较[n(%)]

2.2 2组间基因型频率比较

高脂血组和对照组SNP rs944050基因型频率和基因频率的分布均符合Hardy-Weinberg平衡，是遗传平衡群体，具有群体代表性。2组SNP rs944050的基因型分布存在显著差异（P=0.02）；rs944050位点以A/G基因型较多，SNP rs944050的A/A基因型与G/G+A/G基因型之间差异无统计学意义（P=0.05），见表2。

表2 2组基因型频率比较[n(%)]

2.3 2组间等位基因频率比较

2组SNP rs944050的等位基因频率差异有统计学意义（P=0.01）；每个G等位基因使患高脂血症的风险升高2.03倍（P=0.01）；对照组有33.1%的患者发生此类突变，高脂血组中突变的比例达50.0%，见表3。

表3 2组间等位基因频率比较[n(%)]

3 讨论

当前研究发现，人体内存在两种雌激素受体，ERα和ERβ，其位于受体N端的主要功能域（AF-1），并在结构和功能上有很大差异[5]。研究已证实，ERα基因多态性与血脂代谢有着明显的相关性[6]。在血管平滑肌细胞中，雌激素主要通过ER的介导发挥其对血脂代谢的调节作用。然而，除了ERα外，ERβ也在血管平滑肌细胞中有着优势表达[7]，且已被广泛证明与血管性痴呆、冠心病等多种疾病密切相关[8,9]，而高脂血症正是这些疾病的重要危险因素之一。因此，ERβ基因多态性也极有可能影响到个体对高血脂的易患性。

本研究通过分析59例中国无高脂血症的汉族绝经后妇女和59例高脂血症妇女的ERβ基因多态性，发现高脂血组SNPrs944050有50.0%的患者发生了A→G突变，而对照组中此类突变的比例仅33.1%，每个G等位基因使中国汉族女性高脂血症患病率风险升高2.03倍（P= 0.01）。目前，SNP rs944050影响高脂血症患病率的机制尚不清楚。ERβ基因多态性被认为是影响受体表达及功能的重要因素，SNP rs944050的突变可能影响ERβ转录过程中RNA的正常剪接或与其相关的多态性的改变，影响其转录活性，从而最终影响受体的表达和功能[10]。SNP rs944050影响ERβ受体功能的具体机制还有待进一步探讨，需要更多基因水平的研究来进行证实。笔者基于现有证据推测，SNP rs944050突变极可能影响ERβmRNA转录和翻译效率，改变受体相关蛋白的表达，从而最终影响ERβ受体与雌激素结合的活性。

本研究表明，ERβ基因多态性可能是导致高脂血症的危险因素之一。单核苷酸多态性分析可能有助于雌激素功能的研究，并可能成为预测高脂血症的一种有效方法，进而可为高脂血症的早期诊治提供有力的理论指导。后续大样本的临床和基础研究有助于对其中可能的机制做进一步阐述。

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[4] 许海燕,顼志敏,陆宗良.中国成人血脂异常防治指南(2007)概要与解读[J].中华老年心脑血管病杂志,2008,10:238-240.

[5] Zhao L,Woody SK,Chhibber A.Estrogen receptorβin Alzheimer's disease:from mechanisms to therapeutics[J].Ageing Res Rev,2015, doi:10.1016/j.arr.2015.08.001.

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（本文编辑：王晶）

Association of Estrogen Receptor β Gene Polymorphisms with Hyperlipoidemia in Elder Women

XIN Jia-wei,ZHANG Jun-jian,LIU Chang-yun,YANG Ying,LUO ling.Department of Neurology,Fujian Medical University Union Hospital,Fuzhou 350001,China

Objective: To explore a potential association between the estrogen receptor β (ERβ) gene polymorphisms and hyperlipoidemia in postmenopausal women. Methods: The relationship of the polymorphism (rs944050) with hyperlipoidemia was examined in 59 postmenopausal women with hyperlipoidemia (hyperlioidemia group) and 59 healthy age-matched controls(control group). Results: In both the hyperlipoidemia group and control group, the ERβ allelic frequencies of A and G were 0.500,0.500,0.669,and 0.331 respectively. The distributions of the genotype of the polymorphism rs944050 was in Hardy-Weinberg equilibrium. A statistical difference between the wild-type genotype and heterozygous and homozygous variant genotypes was observed (P=0.02). The variant allele G of rs944050 in the ERβ gene increased the risk of hyperlipoidemia (OR=2.03, 95%CI=1.20～3.43). Conclusion: The polymorphism rs944050 in the ERβ gene is associated with an increased risk of hyperlipoidemia in Chinese Han postmenopausal women.

hyperlipoidemia; estrogen receptor β; association; polymorphisms; women

R741;R741.02

A DOI 10.3870/sjsscj.2015.06.009

1.福建医科大学附属协和医院神经内科 福州350001 2.武汉大学中南医院神经内科 武汉 430071

福建省自然科学基金青年基金 （No.2015J05154）；福建省社会发展引导性（重点）项目（No.2013Y0042）

2015-09-11

章军建 wdsjkx@163.com； 刘昌云 13365910778@163.com