精甲霜灵·咯菌腈·嘧菌酯11%悬浮种衣剂高效液相色谱分析

刘春杰，叶 珊，吴婷燕，姚二艳，夏 俊

（浙江新安化工集团股份有限公司，浙江 建德 311600）

精甲霜灵（metalaxyl-M，CAS号：70630-17-0，分子式：C15H21NO4）属于酰胺类杀菌剂，主要用于处理种子、茎叶及土壤，对由卵菌纲病原菌引起的烟草白粉病、黑胫病及蔬菜、果树等作物的疫病、霜霉病都具有高效的防治效果[1]，但容易产生抗药性，所以将它常与其他药剂混配使用。

嘧菌酯（Azoxystrobin，CAS号：131860-33-8，分子式：C22H17N3O5）是甲氧基丙烯酸酯类杀菌农药，是新型高效、广谱、内吸性杀菌剂，与目前已有杀菌剂无交互抗性，对14-脱甲基化酶抑制剂、苯甲酰胺类、二羧酰胺类和苯并咪唑类产生抗性的菌株有效。它可用于茎叶喷雾、种子处理，也可进行土壤处理，对几乎所有真菌纲(子囊菌纲、担子菌纲、卵菌纲和半知菌类)病害如白粉病、锈病、颖枯病、网斑病、霜霉病、稻瘟病等均有良好的活性。它用于谷物、水稻、葡萄、马铃薯、蔬菜、果树及其他作物，均较安全[2]。

咯菌腈（Fludioxonil，CAS号：131341-86-1，分子式：C12H6F2N2O2）是一种超广谱、非内吸吡咯类触杀性杀菌剂，作用机理是通过抑制葡萄糖磷酰化的有关转移，并抑制真菌菌丝体的生长，最终导致病原菌死亡，与现有杀菌剂无交互抗性，是一种新型的高效、低毒、低残留的仿生杀菌剂[3]。它对主要的担子菌、半知菌、子囊菌和卵菌等植物病原菌的EC95均＜1mg ai/L。对柄锈菌属、禾生球腔菌（小麦壳针孢）、颖枯壳针孢（小麦颖枯病菌）和圆核腔菌（大麦网斑病菌）有很好的防效，而且持效性好，并能提高作物产量。它可用于种子处理，也可防治种子带菌及土壤传播的真菌病害。

精甲霜灵、嘧菌酯和咯菌腈的结构式分别见图1、图2和图3。

图1 精甲霜灵

图2 嘧菌酯

图3 咯菌腈

目前国内精甲霜灵、嘧菌酯、咯菌腈等原药或单剂的分析方法已有报道[4-8]，但是这3种农药的混配制剂的分析方法并未见报道。本研究采用反相高效液相色谱法，在同一个色谱条件下实现了精甲霜灵、嘧菌酯、咯菌腈与杂质的有效分离。该方法操作简便、快速、准确，分离效果好，准确度和精密度均能达到定量分析的要求，适用于该制剂产品的质量监督和检测。

1 试验部分

1.1 试剂和溶液

甲醇：色谱纯；水：新蒸二次蒸馏水；精甲霜灵标样：已知质量分数≥98%（来自Dr.Ehrenstorfer）；嘧菌酯标样：已知质量分数≥98%（来自沈阳化工研究院有限公司）；咯菌腈标样：已知质量分数≥99%（来自Dr.Ehrenstorfer）；11%精甲霜灵·咯菌腈·嘧菌酯悬浮种衣剂（自制）。

1.2 仪器和设备

高效液相色谱仪：Agilent1200，具有二极管阵列检测器和自动进样器；Agilent1200色谱工作站；色谱柱：250mm×4.6mm（i.d.）不锈钢柱，内装CAPCELLPAKC18、5μm填充物；Millipore超纯水制备系统；过滤器：滤膜孔径约0.45μm；超声波清洗器。

1.3 色谱操作条件

流动相：甲醇+水(体积比60∶40)；流速：0.8 mL/min；检测波长：270 nm；进样量：5μL；柱温：30℃；上述条件下的保留时间：精甲霜灵12.4 min，嘧菌脂18.4min，咯菌腈23.9min。

上述液相色谱操作条件是典型的，可根据不同的仪器特点，对给定的参数做适当的调整，以期获得最佳效果。典型的精甲霜灵、嘧菌酯和咯菌腈标样、11%精甲霜灵·咯菌腈·嘧菌酯悬浮种衣剂的高效液相色谱图分别见图4和图5。

图4 精甲霜灵、嘧菌酯和咯菌腈标样高效液相色谱图

图5 11%精甲霜灵·咯菌腈·嘧菌酯悬浮种衣剂高效液相色谱图

1.4 测定步骤

1.4.1 标样溶液的配制

称取精甲霜灵标样0.02g、嘧菌酯标样0.04g、咯菌腈标样0.01g(精确至0.00002g)置于同一个50mL容量瓶中，加入甲醇，超声溶解，稀释至刻度，摇匀。

1.4.2 样品溶液的配制

称取约0.65 g（精确至0.000 02 g）11%精甲霜灵·咯菌腈·嘧菌酯悬浮种衣剂于50mL容量瓶中，加入甲醇，超声溶解，稀释至刻度，摇匀。

1.4.3 测定

在上述操作条件下，待仪器基线稳定后，连续注入数针标样溶液，直至相邻两针标样溶液的响应值相对变化<1.5%后，按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。

1.4.4 计算

将测得的两针试样溶液以及试样前后两针标样溶液中精甲霜灵（嘧菌酯或咯菌腈）峰面积分别进行平均。试样中精甲霜灵（嘧菌酯或咯菌腈）的质量分数X（%），按式（1）计算：

式中：A1为标样溶液中精甲霜灵（嘧菌酯或咯菌腈）峰面积的平均值；A2为试样溶液中精甲霜灵（嘧菌酯或咯菌腈）峰面积的平均值；m1为标样的质量，g；m2为试样的质量，g；ω 为标样中精甲霜灵（嘧菌酯或咯菌腈）的质量分数，%。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件的选择

检测波长的选择：精甲霜灵在200～280 nm、嘧菌酯在200～290nm、咯菌腈在200～300nm均有较大的吸收，3个组分的最大吸收波长都是210nm附近，考虑到溶剂及助剂对吸收的影响，选定270nm为测定波长，该波长下各组分吸收较强，溶剂和助剂干扰小，吸收曲线较为平缓。

流动相的选择：根据精甲霜灵、嘧菌酯和咯菌腈的物化性质，选择甲醇作为溶剂溶解样品。流动相的选择则根据化合物的特点，对甲醇和水按不同比例，在上述2.3色谱条件下进行选择比较。经测定，甲醇+水比例在体积比100∶0～50∶50之间调节，同时考虑到色谱柱的承受压力以及出峰时间，选择流速为0.8mL/min和甲醇+水（体积比60∶40）为流动相时分离效果较好。该条件下3个组分及杂质峰都可以得到很好的分离，峰形对称，基线平稳。

2.2 线性相关性试验

配制精甲霜灵、嘧菌酯和咯菌腈的质量浓度分别为45～452mg/L、88～884mg/L和23～226 mg/L标样溶液，在上述色谱操作条件下进行分析，得出相应值。分别以精甲霜灵、嘧菌酯和咯菌腈质量浓度为横坐标，相应的峰面积为纵坐标绘制标准曲线。精甲霜灵、嘧菌酯和咯菌腈线性方程分别为y＝0.4789x+11.591、y＝6.0968x+13.918和y＝14.238x+14.144，其线性相关系数分别为0.9998、0.9997和0.9997。

2.3 精密度试验

选取同一批次的11%精甲霜灵·咯菌腈·嘧菌酯悬浮种衣剂试样，在上述的色谱条件下平行测定5次，测得精甲霜灵、嘧菌酯、咯菌腈的标准偏差为分别为0.03、0.05和0.03，变异系数分别为0.93%、0.82%和2.80%（见表1）。

表1 精密度试验结果

2.4 准确度试验

称取5份已知含量的试样，分别加入一定量的精甲霜灵、嘧菌酯和咯菌腈标准品，在上述色谱操作条件下进行分析，测得精甲霜灵、嘧菌酯和咯菌腈的平均回收率分别为99.40%、100.10%和99.44%（见表2）。

表2 准确度试验结果

3 结论

试验结果表明：本方法在同一色谱条件下测定3种有效成分，具有较高的准确度和精密度，良好的线性关系，具有简便、准确、快速及分离效果好的优点，是一种可行的分析方法。

[1]梁有,赵金尧,周恩荣,等.反相液相色谱法测定烟叶中精甲霜灵残留[J].现代农药,2013,12（1）：39-43.

[2]于康平,李泽方,徐韶康,等.嘧菌酯的高效液相色谱分析[J].农药,2008,47（4）：275-276.

[3]黄雅俊,郭利丰.咯菌腈25 g/L悬浮种衣剂的高效液相色谱分析[J].农药科学与管理,2012，33（3）：34-36.

[4]徐妍,张政.15%R-瑞毒霉微乳剂的高效液相色谱分析[J].农药,2000,39（4）：15-16.

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