复脉膏外敷的安全性及对兔耳缘化疗性静脉炎的影响※

单珍珠 周留勇 尤建良 张辰岑 龚时夏

(江苏省无锡市中医医院内科，江苏 无锡 214071)

1 江苏省无锡市中医医院肿瘤科，江苏 无锡 214071

化疗性静脉炎主要是由于化疗药物对血管的刺激而引起的管壁化学性炎症。化疗药物常造成血管平滑肌痉挛、血管内膜损伤等，导致不同程度的静脉炎［1］。有调查显示，单纯外周静脉输注长春瑞滨注射液引起的静脉炎可高达89．5%［2］。如何预防或减轻化疗药物所引起的静脉炎，保证化疗顺利完成，是肿瘤内科护理工作的一项重要内容。

我们在临床上应用复脉膏预防和治疗化疗性静脉炎10余年，疗效显著，无任何不良反应。本研究拟通过安全性实验(皮肤过敏性实验、皮肤刺激性实验)观察复脉膏外敷的安全性;通过复脉膏外敷观察对兔耳缘静脉化疗性静脉炎的影响，结果如下。

1 材料与方法

1．1 材料

1．1．1 实验动物 普通级白色豚鼠30只，体质量250～300 g，雌雄各半，由江苏省无锡市惠山江南实验动物场提供，动物许可证号 SCXK(苏)2009-0005;普通级健康成年白色家兔53只，体质量2．0～2．5 kg，雌雄不限，由南京安立默科技有限公司提供，动物许可证号SCXK(苏)2010-0002。

1．1．2 药材及试剂 复脉膏(江苏省无锡市中医医院制剂室提供，批号20110302)、基质(主要含有羧甲基纤维素钠、甘油、氮酮等);1%2，4-二硝基氯苯(河南洛染股份有限公司，CAS号97-00-7，质量标准HG/T2553-2003);酒石酸长春瑞滨注射液(江苏豪森药业股份有限公司，国药准字H19990278，规格10 mg/瓶);50%硫酸镁(上海鹤善实业有限责任公司，批号1109165);氯胺酮(江苏恒瑞制药股份有限公司，批号03020832);安尔碘Ⅱ型皮肤消毒剂(上海利康消毒高科技有限公司，批号20111105);10%福尔马林等。

1．1．3 主要仪器及用品 XDS-1B倒置光学显微镜，重庆光电仪器有限公司。其他用品有备皮刀、油纸、无菌纱布、胶布、绷带、6号针头、5号头皮针、5 mL注射器、20 mL注射器、脱毛露、手电筒、体质量秤。

1．2 实验方法

1．2．1 皮肤过敏性实验［3］

1．2．1．1 动物分组 将30只豚鼠按体质量、性别分为3组，即复脉膏组、基质组及对照组，每组各10只，雌雄各半。实验前24 h用备皮刀将3组豚鼠背部两侧皮肤脱毛，面积约为3 cm×3 cm，观察24 h，脱毛部位皮肤完好，无损伤及异常。

1．2．1．2 致敏接触 复脉膏组取复脉膏0．2 g、基质组取基质0．2 g、对照组取1%2，4-二硝基氯苯0．2 mL分别涂在豚鼠右侧脱毛区，然后用1层油纸、2层无菌纱布覆盖，以无刺激性胶布和绷带固定，持续6 h。第7、14 d各同法重复1次。

1．2．1．3 激发接触 于末次致敏后14 d，分别取复脉膏0．2 g、基质 0．2 g、1%2，4- 二硝基氯苯0．2 mL，分别涂于相应组豚鼠的左、右侧脱毛区，固定方法同1．2．1．2项，持续6 h。6 h后用温清水去除药物后即刻观察，然后于24、48、72 h分别观察皮肤过敏反应情况。

1．2．1．4 观察指标 ①皮肤过敏反应平均值:根据表1皮肤过敏反应评分标准进行评分［3］，计算反应平均值。反应平均值=(红斑形成总分+水肿形成总分)/10。②皮肤过敏反应致敏强度［3］:根据致敏率判断3组致敏强度。致敏率0～10%为弱致敏性，20% ～30%为轻度致敏性，40%～60%为中度致敏性，70% ～80%为高度致敏性，90% ～100%为极度致敏性。致敏率=［出现皮肤红斑或水肿(不论程度轻重)的豚鼠例数/受试豚鼠总数］×100%。

表1 皮肤过敏反应评分标准

1．2．2 皮肤刺激性实验［3］

1．2．2．1 一次给药皮肤刺激实验 取健康成年白色家兔4只，雌雄各半，实验前24 h在每只家兔背部脊柱两侧对称区，用备皮刀脱毛4块区域，每块脱毛区面积约5 cm×5 cm。左上区、左下区脱毛部位皮肤保持完好，无损伤及异常;右上区、右下区用6号针头在脱毛部位皮肤上划出“#”形擦伤，直径2 cm，以刺伤表皮、不伤及真皮、有轻度渗血为度，右上区、右下区皮肤破损程度一致。

温水清洗脱毛区域，无菌纱布拭干后，左上区、右上区直接涂以复脉膏0．2 g，左下区、右下区直接涂以基质0．2 g，均匀涂抹，面积约 3cm×3 cm，并以1层油纸、2层无菌纱布覆盖，无刺激胶布及绷带固定。24 h后用温水清洗去除复脉膏和基质，去除药物后1、24、48、72 h肉眼观察并记录涂敷部位红斑和水肿形成情况。

1．2．2．2 多次给药皮肤刺激实验 另取健康成年白色家兔4只，雌雄各半，实验方法同1．2．2．1项，每日给药1次，连续1周。末次给药后用温水清洗去除复脉膏和基质，1、24、48、72 h后肉眼观察并记录涂敷部位红斑和水肿形成情况。

1．2．2．3 观察指标 ①皮肤刺激反应评分［3］:依据表2对家兔每个区的红斑及水肿情况进行评分。②皮肤刺激反应强度［3］:计算家兔每个区反应平均分值［反应平均分值=(红斑形成总分+水肿形成总分)/4］，＜0．5分为无刺激性，0．5～2．99分为轻度刺激性，2．99～6．0分为中度刺激性，≥6．0分为强刺激性。

表2 皮肤刺激反应评分标准 (分)

1．2．3 对兔化疗性静脉炎的影响实验［4-8］

1．2．3．1 动物分组及备皮 取健康成年白色家兔45只，随机分为3组，即复脉膏组、硫酸镁组、对照组，每组各15只。各组白兔分别脱去右耳毛发，温水清洗备用。观察24 h，脱毛部位皮肤完好，无损伤及异常。

1．2．3．2 化疗药物注入 3组白兔均予氯胺酮(60 mg/kg)腹腔注射麻醉，然后安尔碘Ⅱ型皮肤消毒剂消毒右耳缘静脉周围皮肤;距耳根1 cm处为穿刺点，向耳尖方向穿刺;穿刺后行透光检查，对疑有穿刺渗漏者弃去;穿刺成功后，将配制好的酒石酸长春瑞滨注射液(1．8 mg/kg)快速推注，约5 min内注射完毕。行透光检查，穿刺无渗漏，推注药液后耳缘静脉局部无渗液。

1．2．3．3 用药方法 复脉膏组:在右耳缘穿刺点上方约0．5 cm处沿耳缘静脉予复脉膏外敷，范围约为5 cm×2 cm，厚度为0．3 cm，外用保鲜膜覆盖，并固定防止脱落，4 h后去除，清水洗净。硫酸镁组:在右耳缘穿刺点上方约0．5 cm处沿耳缘静脉予50%硫酸镁湿敷，范围约为5 cm×2 cm，外用保鲜膜覆盖，并固定防止脱落，4 h后去除，清水洗净。对照组:不采用任何防治措施。

1．2．3．4 标本采集及观察方法 清除药物后24 h、7 d、14 d，分别随机取各组白兔5只，切取右侧耳缘静脉标本。具体方法:以穿刺点前2 cm处为中心，切下面积为0．8 cm2(2．0 cm ×0．4 cm)、厚4 μm左右的耳廓组织，用10%福尔马林固定，石蜡包埋，常规病理切片，苏木精—伊红(HE)染色，光学显微镜下观察耳缘静脉病理学变化，包括血管内皮细胞肿胀、血管周围水肿、管腔淤血、管壁增厚、纤维增生程度、炎症细胞浸润等。所有白兔耳缘静脉标本均由江苏省无锡市中医医院病理科从事病理诊断工作10余年的专职人员进行观察，并由2人一致判定，且整个实验过程中不知标本的分组。轻、中、重判断标准，根据参考文献［4-8］，由病理科从事病理诊断工作10余年的3位医师共同制订。

1．3 统计学方法 所有数据采用SPSS 17．0软件包进行统计分析，等级资料采用秩和检验，以P＜0．05为差异有统计学意义。

2 结果

2．1 皮肤过敏性实验结果 对照组豚鼠在使用1%2，4-二硝基氯苯激发给药6 h后，均有轻度至中度红斑出现，但无水肿形成，致敏率100%，为极度致敏性;复脉膏及基质组豚鼠在激发用药后，均无红斑及水肿形成，致敏率为0，为弱致敏性。见表3。

表3 皮肤过敏性实验结果

2．2 皮肤刺激性实验结果 一次给药皮肤刺激实验及多次给药皮肤刺激实验结果均为:经肉眼观察，复脉膏及基质对健康成年白色家兔完整皮肤及破损皮肤在去除受试药物后1、24、48、72 h，均未致红斑、水肿形成，皮肤刺激反应评分均为0，皮肤刺激反应强度均为0，即无刺激性。

2．3 对兔化疗性静脉炎的影响实验结果

2．3．1 显微镜下3组兔耳缘静脉损伤情况 去除药物24 h后，对照组兔耳缘静脉损伤严重，显微镜下示血管内皮严重破坏，内皮细胞肿胀、局部水肿，管腔淤血，管壁增厚，纤维增生，大量红细胞和炎症细胞浸润;硫酸镁组兔耳缘静脉血管内皮破坏，内皮细胞轻到中度肿胀，局部轻到中度水肿，管腔轻到中度淤血，管壁轻到中度增厚，纤维轻到中度增生，有炎症细胞浸润;复脉膏组兔耳缘静脉大致为正常血管。7 d后，对照组兔耳缘静脉损伤仍较严重;硫酸镁组静脉血管破坏得到一定改善;复脉膏组静脉大致为正常血管。14 d后，对照组静脉损伤仍偏重;硫酸镁组静脉血管破坏进一步改善;复脉膏组静脉大致为正常血管。

2．3．2 3组兔耳缘静脉损伤程度分级比较 见表4。

表4 3组兔耳缘静脉损伤程度分级比较只

表4数据经秩和检验，观察24 h、7 d及14 d，硫酸镁组及复脉膏组兔耳缘静脉损伤较对照组同期减轻，复脉膏组较硫酸镁组减轻，比较差异均有统计学意义(P ＜0．05)。

3 讨论

化疗性静脉炎属中医学脉痹、恶脉等范畴，乃因药石攻伐，伤及脉络，湿、热、邪、毒外侵，搏结脉道，脉络滞塞不通，气血瘀滞，凝聚肌肤，而成红、肿、热、痛。故治当以清热解毒、活血祛瘀、祛湿消结、通络止痛、扶正祛邪为法。复脉膏以此法组方，由生大黄、野菊花、三棱、莪术、丹参、乳香、没药、党参、冰片组成。方中生大黄清热解毒，活血祛瘀，泻下攻积，清热利湿，达到祛瘀生新之功效，是为君药;野菊花清热解毒，三棱、莪术破血逐瘀，行气消积、止痛，共为臣药，辅助君药清热解毒、活血祛瘀，散结止痛;丹参活血化瘀，凉血消痈，乳香、没药活血止痛，消肿生肌，共为佐药，佐助君、药清热解毒，活血祛瘀，祛湿散结，通络止痛;党参益气、生津、养血，亦为佐药，佐助君药扶正祛邪;冰片清热解毒，消肿止痛，性善走窜开窍，无往不达，是为使药。现代药理研究表明，生大黄、野菊花、莪术、丹参、乳香、没药、冰片均具有不同程度的抗菌、消炎作用;生大黄、三棱、莪术、丹参可抑制血小板聚集，抗血栓形成，改善微循环;三棱、丹参、乳香、没药、冰片有止痛作用;党参、莪术能增强机体免疫功能［9-10］。

本研究通过皮肤过敏性实验、皮肤刺激性实验证实，复脉膏及其基质经反复致敏、激发接触后对豚鼠皮肤均无致敏作用;复脉膏及其基质经一次和多次给药对家兔完整及破损皮肤均未引起红斑或水肿。提示复脉膏经皮肤局部给药具有非常好的安全性，临床上可放心使用。

长春瑞滨具有高渗透性，能透过血管渗入皮下组织间隙，可直接刺激神经末梢，引起局部炎症性反应;能破坏细胞膜内外渗透压平衡，使pH值改变而引起静脉炎或毛细血管痉挛，导致局部供血减少，组织缺血、缺氧，进而极易形成化疗性静脉炎［11］。因此，本研究以长春瑞滨兔耳缘静脉注射造成静脉损伤。50%硫酸镁湿敷对化疗性静脉炎有一定的防治作用，可消除化疗药物引起的血管痉挛和内膜细胞水肿，使血管平滑肌松弛，减轻血管炎性反应，是临床上常用的方法，因此本研究以此为对照药物［12］。

本研究发现，复脉膏外敷可以很好的防止化疗药物酒石酸长春瑞滨注射液所致的兔耳缘静脉血管内皮细胞肿胀、局部水肿、管腔淤血、管壁增厚、纤维增生、炎症细胞浸润，进而达到防治化疗性静脉炎的目的，且防治效果优于50%硫酸镁湿敷。

综上所述，复脉膏外敷可以安全有效的防治实验性化疗性静脉炎，可应用于临床研究使用。

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