紫金龙的薄层色谱鉴别方法研究※

耿燕娜张文鑫王建新

（1河南大学淮河医院药学部，开封475000；2河南中医学院第一附属医院药学部，郑州450000；3复旦大学药学院，上海200032）

紫金龙的薄层色谱鉴别方法研究※

耿燕娜1张文鑫2王建新3*

（1河南大学淮河医院药学部，开封475000；2河南中医学院第一附属医院药学部，郑州450000；3复旦大学药学院，上海200032）

目的建立紫金龙药材的薄层色谱鉴别方法。方法以异紫堇定、紫堇定为对照品，用三氯甲烷-甲醇-氨水（50:1:0.5）进行薄层展开。结果建立的紫金龙药材的薄层色谱放鉴别方法，层析图显示分离效果佳，斑点清晰。结论本法准确、简便、重现性好，可用于紫金龙药材及其制剂的质量控制。

紫金龙；薄层色谱法；异紫堇定；紫堇定

罂粟科紫金龙属植物为一年生或多年生草质藤本。该属共有7种植物，分布于喜马拉雅地区至我国西部。我国产4种，产于西南部。紫金龙Dactylicapnos scandens（D.Don）Hutch.为其中一种，生长于海拔1100～3000 m的林下、山坡、石缝或水沟边、低凹草地、沟谷，产于我国四川西南部（冕宁），云南西北部（德钦）、西部、中部至东南部，广西西部和西藏东南部等地［1］。其商品药材紫金龙为紫金龙植物Dactylicapnos scandens（D.Don）Hutch.的干燥根，又名串枝莲、碗豆七、川山七、兹坚轮（白族语）等，是我国云南省白族传统习用中草药，秋末采挖，除去泥土、杂质，晒干即得［2］。紫金龙药材味苦、辛，性凉；有镇痛止血、降血压等功效，用于治疗胃痛，神经性头痛，牙痛，高血压，血崩，内出血，跌打损伤等疾患［2-4］；在《云南省药品标准》［2］和《云南中药资源名录》［3］中都有记载，曾被《中国药典》1977年版收载［4］。但原药材标准只记载有性状、理化鉴别等项，不能很好的控制药材质量。

除了具有显著镇痛作用外，紫金龙还具有多方面的药理作用，云南白药公司以紫金龙为主药，研制出用于治疗胃及十二指肠溃疡、慢性胃炎的胃得康胶囊［5］。金业全［6］等研制了紫金龙药酒，用于类风湿性关节炎的治疗，临床观察疗效显著。三九集团以紫金龙提取物为主要成分，开发了治疗近视的准字号药品999近视乐眼药水。因此，有必要对紫金龙药材的质量标准进行研究提高，以扩大其应用范围，造福人类。

目前控制药材质量的方法大多是采用控制药材中某个或某类成分；而紫金龙化学成分的研究报道较少：吴大刚［7-10］等国内学者对紫金龙化学成分进行研究，分离鉴定了异紫堇定、紫堇定等生物碱类成分，同时药理学实验证实生物碱是其具有镇痛等药理作用的主要活性成分［11］，说明生物碱可能为紫金龙的主要有效成分。故本文针对紫金龙的生物碱成分，以异紫堇定和紫堇定为对照品，建立紫金龙药材的薄层色谱鉴定方法，为药材质量标准的研究和制定提供依据。

1 材料与仪器

紫金龙（购于上海市药材公司）、异紫堇定（购于Sigma公司，批号：545368）、三氯甲烷、甲醇、碘化钾、次硝酸铋等为分析纯（购于国药集团化学试剂有限公司）、BP211D型电子天平（德国Sartorius公司）、DRT-TW型调温电热套（郑州长城科工贸有限公司）。

2 方法与结果

2.1 紫堇定对照品的制备

2.1.1 紫堇定对照品的分离纯化取紫金龙药材9.2 kg，乙醇渗漉提取，得粗提物2.1 kg，粗提物加入1%盐酸溶液使溶解，过滤，滤液用25%氨水调节pH至10，用氯仿提取三次，提取液回收蒸干得570 g提取物10，取其中的200 g，采用硅胶柱层析分离，三氯甲烷-甲醇梯度洗脱（100∶1→10：1），共得到1→8个组分，取组分6，进行硅胶薄层分离，石油醚-丙酮（1∶1）洗脱分离，得到单体生物碱DS-2。以TMS为内标或以各种氘代溶剂峰化学位移为准（CDCl3：δH7.26，δC77.0），采用核磁共振仪和质谱仪分别1H-NMR、13C-NMR和EI-MS等图谱，与文献对照可知，具体鉴定结果见下。

图1 d-corydine（DS-2）

d-紫堇定（d-Corydine＜DS-2＞）无色针状结晶；mp149℃.1H-NMR（CDCl3，400 MHz），δ：8.70（1H，s，OH），7.08（1H，d，J=8.2Hz，H-8），6.87（1H，d，J=8.2Hz，H-9），6.69（1H，s，H-3），3.91（3H，s，OCH3），3.90（3H，s，OCH3），3.73（3H，s，OCH3），2.53（3H，s，NCH3）；13C-NMR，δ：151.8（C-10），149.2（C-2），143.8（C-1），142.3（C-11），130.7（C-7a），128.0（C-11a），126.4（C-3a），124.3（C-8），123.8（C-1b），119.2（C-1a），111.3（C-9），110.9（C-3），62.7（C-6a），62.0（C11-OCH3），56.0（C10-OCH3），56.0（C2-OCH3），52.7（C-5），43.8（N-CH3），35.4（C-7），28.9（C-4）；EI-MS，m/z：341［M］+，326，310.以上波谱数据基本与文献［12-14］一致，故推断DS-2为d-紫堇定。

2.1.2 紫堇定对照品的纯度测定

2.1.2.1 检测波长的选择HPLC法对紫堇定对照品进行分析，采用二极管阵列检测器（DAD）进行全波长扫描，可知在265nm和300～310nm波长下均有较大吸收。故选择在265nm、310nm处测得紫堇定的峰面积，以面积归一化法计算紫堇定的纯度。

2.1.2.2 色谱条件色谱柱：Hypersil BDS C18（4.6mm× 250mm，5μm）柱；流动相：A相为0.2%磷酸水溶液（三乙胺调pH为7.0）-B相为甲醇＝52：48；柱温：30℃，波长：265nm，300nm。结果见图2，结果显示制得的紫堇定对照品纯度大于98%，可用于薄层色谱研究。

图2 紫堇定对照品的HPLC图谱

2.2 对照品溶液制备分别称取异紫堇定和紫堇定对照品，配制成浓度分别为0.4 mg·ml-1和0.1 mg·ml-1的对照品溶液。

2.3 供试品溶液制备取紫金龙药材，粉碎，取过四号筛下药粉0.3 g，置滤纸筒内，氨水润湿，加入20 ml三氯甲烷索氏回流提取2 h，提取液蒸干，残渣加入甲醇10 ml溶解，即得。

2.4 薄层色谱鉴别

2.4.1 色谱条件薄层板：硅胶GF254板展开剂：三氯甲烷-甲醇-氨水（50∶1∶0.5）。检识方法：紫外光254 nm检识；碘化铋钾显色检识。

2.4.2 薄层展开实验按照薄层色谱法（《中国药典》2005版一部附录ⅥB）试验［15］，吸取上述三种溶液各1～2μl，分别点于同一硅胶GF254板上，展开，展距8 cm，晾干，于254 nm紫外光下检识，并用碘化铋钾显色检识。

3 实验结果

薄层色谱鉴别结果见图3。

图3 紫金龙药材薄层色谱图

5 紫堇定对照品

在254 nm波长紫外光下检识，可以看到供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同颜色的斑点。采用碘化铋钾试液显色后，可以看到供试品色谱中，在与对照品相应的位置上，显相同的桔红色斑点。

3 结论与讨论

本文首次建立了薄层色谱法鉴别紫金龙药材，方法准确、简便、重现性好。异紫堇定、紫堇定作为紫金龙药材中的主要生物碱，同时也是同分异构体，建立同分异构体的薄层色谱分析方法存在较大的难度。我们对常用的生物碱展开系统：1）三氯甲烷-甲醇-氨水；2）三氯甲烷-甲醇；3）石油醚-丙酮；4）三氯甲烷-丙酮进行了比较研究，其中以展开剂三氯甲烷-甲醇-氨水（50∶1∶0.5）进行展开，斑点Rf值适中，且异紫堇定斑点和紫堇定斑点分离情况较好，斑点较圆整，可作为紫金龙药材的薄层色谱鉴别方法，异紫堇定和紫堇定为生物碱成分，在进行薄层色谱展开时，容易出现拖尾现象，加入氨水后，斑点拖尾得到大大改善。

［1］中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志［M］.32卷.北京：科学出版社，1999:89-91.

［2］云南省卫生局.云南省药品标准［S］，1974:323-324.

［3］云南省药材公司.云南中药资源名录［M］.北京：科学出版社，1993:168.

［4］中华人民共和国药典·一部［S］.北京：化学工业出版社，1977:586.

［5］陈庆党，刘汉源.正交试验法优选紫金龙提取的最佳工艺条件［J］.中草药，1996，27（增刊）:102-103.

［6］金业全，魏桂湘.紫金龙药酒的研制及临床应用［J］.蚌埠医学院学报，1996，21（1）:49.

［7］吴大刚.紫金龙的生物碱成分［J］.中草药通讯，1977，4:153-155.

［8］钱金栿，周粤.白族草药紫金龙成分的研究［J］.西北药学杂志，2000，l5（2）:57-58.

［9］严田青，艾铁民.紫金龙化学成分的研究［J］.中草药，2004，35（8）:861-862.

［10］王富华，胡晓，王建新，等.紫金龙的生物碱类成分［J］.中国中药杂志，2009，34（16）:2057-2059.

［11］吴勐，王银叶，艾铁民.紫金龙总生物碱的镇痛作用及其机制初探［J］.中草药，2003，34（11）:1022-1025.

［12］Shamma M，et al.Phytochemistry，1973，12:1505.

［13］Desai HK，et al.Heterocycles，1993，36（5）:1081.

［14］Galinis DL，et al.Tetrahedron，1993，49（7）:1337.

［15］中华人民共和国药典·一部［S］.北京：化学工业出版社，2005:附录31-32.

Study on the TLC of the root of Dactylicapnos scandens

GENGYanna1，ZHANGWenxin2，WANGJianxin3*
（1Department of Pharmacy，Huaihe Hospital of Henan University，Henan Province，Kaifeng475000，China；2Department of Pharmacy，The First Affiliated Hospital of Henan University of TCM，Zhengzhou450000，China；3School of Pharmacy，Fudan University，Shanghai200032，China）

Objective To establish the TLC of the root of Dactylicapnos scandens.Methods Thin layer expand by CHCl3-CH3OH-NH3· H2O（50:1:0.5）and compare to isocorydine and corydine.Results The TLC of the root of Dactylicapnos scandens showed clear spots and complete separation.Conclusion The method is accurate，reliable and convenient.It can be used to control the quality of Dactylicapnos scandens and its products.

Dactylicapnos scandens；TLC；isocorydine；corydine

10.3969/j.issn.1672-2779.2015.10.071

1672-2779（2015）-10-0138-03

：张文娟本文校对：张瑜

2015-02-27）

上海市中西部科技合作基金（No：64358028）

*通讯作者：jxwang@shmu.edu.cn