不同产地通关藤药材有机酸HPLC－ELSD 指纹图谱

□张阿琴 刘世平 李迩娜

通关藤又名通光散、乌骨藤、双合藤、奶浆藤等，以萝藦科牛奶菜属通关藤的干燥藤茎入药。全年可采，刮去外层栓皮，切片晒干。始载于《滇南本草》，收载于《中华本草》、《中药大辞典》及2010 版《中国药典》。具有清热解毒，止咳平喘，治肺炎，支气管炎，支气管哮喘，咽喉炎，扁桃体炎，膀胱炎，疗疮肿毒等多种疗效。

虽然国内已经有一些文献资料是关于通关藤药材及制剂指纹图谱研究的，但却局限于在单一产地的通关藤药材化学成分的研究。因药材产地、药用部位、药材真伪等因素影响，尚无较完整的通关藤药材质量评价依据，因此，本试验进一步采用HPLC 法联合ELSD 检测器对11 个不同产地通关藤药材质量进行系统的比较研究，建立了通关藤的有机酸指纹图谱，对于确保该药材的质量稳定十分重要。

一、仪器

Agilent 1200 Series 高效液相色谱仪:包括二元梯度泵(G1312A)、在线真空脱气机(G1322A)、自动进样器(G1329A)、柱温箱(G1316A)、HP Chem Station 化学工作站;Alltech ELSD 2000ES 蒸发光散射检测器;Mettler Toledo电子天平(XS105DU)。

二、材料

共11 个样品，其中大理市宾川县、云南省丽江市、云南省楚雄自治州、贵州省安顺市为购买的样品，其余采自产地(南京中医药大学谷巍教授鉴定为正品)。

乙腈(色谱纯);水(乐百氏纯净水);甲酸(色谱纯);甲醇(分析纯)。

三、方法

(一)色谱条件。Agilent ZORBAX SB－ C18 柱(4.6 ×250mm，5μm);流动相为A 与B 的混合溶液，A－0.05%磷酸溶液，B－0.05%磷酸乙腈溶液，按表1 进行梯度洗脱。

表1

平衡时间10min;流速1mL·min－1;检测波长300nm;进样量20μL;柱温25℃。

(二)溶液配制。

1.对照品溶液的配制。精密称取绿原酸对照品适量，用50% 甲醇溶解，制成20μg/ml 的溶液，得对照品溶液。

2.供试品溶液的配制。取适量药材，粉碎后过四号筛，取粉末2.5g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加水25ml，密塞，称定重量，浸泡放置24 小时，置水浴中加热回流2 小时，放冷，再称定重量，用水补足减失的重量，摇匀，离心，取上清液，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，取续滤液，得供试品溶液。

(三)精密度试验。分别吸取供试品溶液(2 号)20μL，注入液相色谱仪，连续测定6 次，考察图谱上色谱峰保留时间是否一致，以峰面积计算，RSD 为1.20%，说明精密度较好，所测得的指纹图谱与共有模式图谱相似度分别为0.9998、0.9993、0.9995、0.9995、0.9997、0.9998，符合指纹图谱要求。

(四)稳定性试验。分别吸取(三)项下供试品溶液20μL 在0，2，4，8，16，24 h 进样，考察稳定性，RSD 为2.16%，说明样品溶液24h 内稳定性良好，指纹图谱与共有模式图谱相似度分别为0.9991、0.9993、0.9995、0.9987、0.9983、0.9975，符合指纹图谱要求。

(五)重复性试验。分别取(三)项下供试品溶液20μL，连续测定6 次，考察重复性，RSD 为1.28%，说明重复性较好。指纹图谱与共有模式图谱相似度分别为0.9987、0.9983、0.9985、0.9997、0.9992、0.9993，符合指纹图谱要求。

(六)通关藤有机酸HPLC—ELSD 指纹图谱的生成及分析。依据11 个不同来源的通关藤药材的检测结果，利用药典委员会颁布的“中药色谱指纹图谱相似度评价软件”，自动产生通关藤药材指纹图谱的对照模式(图1)，该图谱中共有13 个色谱峰，通过对照保留时间，指认了7 号峰为绿原酸。

测定各产地通关藤药材样品的指纹图谱(图1)，通过“中药色谱指纹图谱相似度评价系统2004 A 版”软件对从各产地药材指纹图谱进行处理，所得结果见表1，其中1～7 号样品相似品较高(≥0.8)，8～11 号样品的相似度较低(＜0.8)，体现出产地对药材质量的影响。

图1 11 批不同产地通关藤药材指纹图谱

A.共有模式;B.通关藤药材A 中:7(s)号峰为绿原酸

表2 不同产地通关藤有机酸类成分指纹图谱相似度

四、讨论

本试验首次对不同产地通关藤药材有机酸HPLC－ELSD 指纹图谱进行了比较和分析，11 批不同产地的药材中，云南金平、云南思茅相似度较高(＞0.9)，云南宾州、云南楚雄、云南丽江、云南临沧、云南六库的药材相似度较高(＞0.8)，云南昭通、广西那坡、广西三江及贵州安顺地区的样品相似度较低(＜0.8);药材产地的不同，会导致温度、日照、雨水等条件的不同，这些在中药材生长过程中会起到非常重要的作用，必然会影响到药材质量。

本试验进行通关藤有机酸HPLC－ ELSD 指纹图谱的测定和分析，13 个成分峰的强度、分离度均比较好。本方法前处理简单，准确可靠，重现性和稳定性好，可作为通关藤药材的鉴别项之一，为选购原药材及指导该药材的GAP 种植提供依据。

［1］赵陆华，相秉仁，陆红柳.乌骨藤药材HPLC 指纹图谱研究［J］.中成药，2008

［2］刘峰群，曹红，靳守东.通关藤注射液酚酸类成分指纹图的HPLC 测定［J］.中成药，2003

［3］谢培山.中药色谱指纹图谱［M］.北京:人民卫生出版社，2005