检材采集与保存方式对DNA提取效率的影响

邓淑娇，李 萍，黄桂清，杨 电

（1.广州市公安局白云区分局，广州 510420；2.广州市公安局越秀区分局，广州 510080；3.广州市公安局，广州 510030）

·技术与应用·

检材采集与保存方式对DNA提取效率的影响

邓淑娇1，李 萍2，黄桂清1，杨 电3

（1.广州市公安局白云区分局，广州 510420；2.广州市公安局越秀区分局，广州 510080；3.广州市公安局，广州 510030）

目的 研究检材采集与保存方式对DNA提取效率的影响。方法 使用生物检材采集与保存套管棉签、尖头棉签和普通医用棉签采集血样，分别放置于生物检材采集与保存套管或纸质物证袋中保存1 周。剪取全部血样于96孔板中，用磁珠法结合自动化工作站提取DNA，以ABI7500 型荧光定量PCR仪定量。 结果 生物检材采集与保存套管采集保存的血样所提取的DNA浓度平均为（2.54±0.63）ng/μL ，而尖头棉签、普通医用棉签采集并分别用纸袋保存的血样提取的DNA浓度平均为（2.06±0.44）ng/μL和（0.93±0.59） ng/μL。结论 生物检材采集与保存套管较之于尖头棉签或普通医用棉签采集、纸袋保存方式，其获得的DNA浓度显著提高，DNA提取率高。

法医物证学；生物检材采集；生物检材保存；DNA产量

生物检材的采集、保存是法医物证最基础，也是最关键的一环，采集与保存方法不当，会造成检材损耗、污染或腐败，终致检验失败，检材失去价值。本文对集成有浓缩采集和悬空干燥保存功能的生物检材采集与保存套管［1］、尖头棉签、普通医用棉签采集保存血样DNA的提取效率做了比较。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

自制生物检材采集与保存套管（以下简称“套管”），尖头棉签（公安部物证鉴定中心），普通医用棉签（广州市番禺万福卫生用品有限公司），HAMILTON MICROLAB STAR自动化工作站（瑞士澳斯邦公司），7500定量PCR仪（美国AB公司），Quantifiler TM人类DNA定量试剂盒（美国AB公司）。

1.2 实验方法

采集30名志愿者的新鲜抗凝血。每份血样均分别在套管棉签、尖头棉签和普通医用棉签上滴加10μL，套管保存的血样顺序标记为TX1～TX30，纸质物证袋保存的尖头棉签上血样依次标记为DX1～DX30，纸质物证袋保存的普通医用棉签上血样则标记为DD1～DD30。

DNA提取：血样采集并保存1周后，剪取全部血样的每份，置于96孔板中，按文献［2］用磁珠法以HAMILTON MICROLAB STAR自动化工作站提取DNA，样品洗脱体积为50μ L。

DNA定量：按Quantifiler法医人类DNA定量试剂盒手册说明，以7500型荧光定量PCR仪进行定量PCR 反应。

1.3 统计学处理

SPSS16.0软件作单向方差分析数据处理，检验水准α=0.05。

2 结果和讨论

10 μL血样经3种方式获得的平均DNA浓度、标准差、最小DNA浓度、最大DNA浓度等见表1。3种采集保存方法获得的DNA量之间有显著性差异，套管＞尖头棉签采集再纸袋保存＞普通医用棉签采集再纸袋保存。组间多重比较，P套管/尖头棉签=0.009；P套管/医用棉签=0.000；P尖头棉签/医用棉签=0.000。

表 1 10 μ L 血样采用3种采集与保存方法获得的DNA量比较Table 1 Yield of DNA obtained from 10μ L blood samples by three methods of collection and preservation

随着DNA检验灵敏度的提高，DNA含量少于100 pg的LCN样品也能够有效分型，甚至单个细胞也可成功检出［3］。目前制约DNA检验成功率的瓶颈主要在生物检材的发现、提取和保存等环节。通常，生物检材采集、保存的标准做法是：对血液、唾液等湿润生物斑迹检材常用棉签、滤纸或纱布等直接采集，而后于阴凉处晾干并置于透气纸袋内保存；对干燥血迹、唾液斑等斑迹或接触类检材用生理盐水、蒸馏水等润湿的棉签、纱布擦拭提取，而后于阴凉处晾干并置于透气纸袋内保存。如果检材提取后尚未晾干直接放入纸袋中，容易引起部分检材因粘附纸袋内壁而损失，微量检材则会因此而失去检验价值，量较多的检材却会因渗透到纸袋外而造成污染。本实验结果证明，普通医用棉签采集、纸袋保存的血样所提取的DNA量最低，与套管采集保存方式相比平均损失高达63%。这是因为普通医用棉签棉头大，会造成检材分散，而且其与包装袋的接触面积也大，故因粘附而造成的损失最大。尖头棉签的优点是可浓缩集中检材，与包装袋的接触面积相对较小，故因粘附而造成的损失也较小，但与套管采集保存方式相比，其提取DNA的量平均损失也达到了19%。套管法采用尖头棉签浓缩采集和悬空干燥保存方式，既避免了检材因粘附而造成损失，使DNA提取率明显提高，杜绝了污染，又因套管内置的干燥剂可吸收检材中的水分，使检材保持干燥，防止霉变，保证了DNA质量。因此，套管法，DNA提取率高，是法医生物检材采集与保存的更好选择。

［1］ 杨电， 冯小兵， 李萍. 生物检材采集与保存套管结合直接扩增检案1例［J］. 刑事技术， 2014（3）： 57-58.

［2］ 杨电， 刘宏， 刘超， 等. 国产磁珠结合自动化工作站批量提取生物检材DNA的应用［J］. 中国法医学杂志， 2009， 24 （6）：404-406.

［3］ Forster L， Thomson J， Kutranov S. Direct comparison of post-28-cycle PCR purifi cation and modifi ed capillary electrophoresis methods with the 34-cycle “low copy number” （LCN）method for analysis of trace forensic DNA samples［J］. Forensic Sci Int Genet， 2008， 2（4）：318-328.

Effect of Sample Collection and Preservation on DNA Yield

DENG Shujiao1， LI Ping2， HUANG Guiqing1， YANG Dian3
（1. Baiyun Branch of Guangzhou Public Security Bureau， Guangzhou 510420， China； 2. Yuexiu Branch of Guangzhou Public Security Bureau， Guangzhou 510080， China； 3. Guangzhou Public Security Bureau， Guangzhou 510030， China）

Objective To explore the effect of sample collection and preservation on DNA yield. Methods The fresh antifreezing blood from 30 volunteers was respectively dropped onto a swab from the casing for collection and preservation of biological sample， and the ones of both the cuspidal and the common medical. Each of the blood specimens was separately preserved in the casing or paper bags for a week. Every piece of DNA from the blood specimens was extracted by magnetic beads method in combination of automation workstation and was quantifi ed by ABI 7500 Real Time System. Results The average DNA concentration was （2.54±0.63） ng/μL for the blood specimens collected and preserved with the casings，（2.06±0.44） ng/μL and （0.93±0.59） ng/μL for those blood specimens which were collected with cuspidal swabs and common medical ones and followed to preserve in paper bags. The DNA yield was obviously higher using the casings than that of either the cuspidal swabs or the common medical ones to collect and then preserve in paper bags. Conclusions This test suggests that it is better to choose the casings for collection and preservation of biological sample than the cuspidal and the common medical swab.

forensic biological evidence； biological sample collection； biological sample preservation； DNA yield

DF795.2

B

1008-3650（2015）03-0242-02

2014-08-03

格式： 邓淑娇， 李萍， 黄桂清， 等. 检材采集与保存方式对DNA提取效率的影响 ［J］. 刑事技术， 2015，40（3）：242-243.

邓淑娇（1978—），女，主检法医师，硕士，研究方向为法医物证。 E-mail： 2008shujiao@163.com

10.16467/j.1008-3650.2015.03.018