微生物学

微生物学

FM4-64和Hoechst染料在活细菌胞膜和拟核标记定位中的条件优化与应用

王净，韩延平，杨瑞馥，等

目的：为了观察细菌细胞膜和拟核的形态结构，准确对亚细胞进行定位。方法：本文利用FM4-64和Hoechst两种染料，分别采用不同浓度和不同时间对大肠杆菌活细胞进行染色和荧光共聚焦显微成像，并对7种细菌的活细胞（金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌、鼠疫耶尔森菌、军团菌、霍乱弧菌和炭疽芽孢杆菌）进行染色观察。结果：相同观察条件下，不同染料浓度和不同的染色时间影响了细胞膜、拟核的荧光强度；确定了FM4-64染色通用条件（浓度20 μg/mL染色1 min）和Hoechst的最佳条件（浓度20 μg/mL染色20 min）。上述条件下，Hoechst对8种细菌染色效果均较理想，然而FM4-64对细菌染色效果不同，革兰氏阴性菌（大肠杆菌、肺炎克雷伯菌、鼠疫耶尔森菌、霍乱弧菌、铜绿假单胞菌和军团菌）表现较好的细胞膜轮廓，革兰氏阳性菌（炭疽芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌）效果较差。结论：FM4-64和Hoechst两种染料共染8种细菌，对细胞膜和拟核的染色观察，可为原核细胞结构染色提供借鉴，并为大分子的亚细胞定位研究奠定基础。

两种染料FM4-64和Hoechst；活细菌；细胞膜；拟核；标记定位

来源出版物：微生物学报，2015，55（8）： 1068-1073联系邮箱：韩延平，yanpinghan@gmail.com