结直肠癌组织中Nob1基因的表达及临床意义

马小杰　韩振国*

（1 山西医科大学研究生学院 普通外科，山西 太原 030000；2 山西医科大学附属山西大医院 普通外科，山西 太原 030000）

结直肠癌组织中Nob1基因的表达及临床意义

马小杰1韩振国2*

（1 山西医科大学研究生学院 普通外科，山西 太原 030000；2 山西医科大学附属山西大医院 普通外科，山西 太原 030000）

目的 研究Nob1的表达与结直肠癌的相关性，从临床分期、分化程度等角度分析结直肠癌中Nob1的表达情况。方法 运用免疫组织化学染色方法观察和分析60例结直肠癌组织Nob1的表达情况与临床病理特征的关系。结果 按结直肠癌的Duck分期，各分期的阳性率分别为75.0%，72.7%，70.6%，77.8%，χ2值为0.178，P值为0.981，即与Duck分期无统计学意义；按结直肠癌分化程度分组，高、中、低阳性率分别为41.7%，76.7%，88.9%，χ2值为7.756，P值为0.021，即与分化程度有统计学意义。结论 Nob1蛋白的表达水平在结直肠癌组织中上调，与癌组织细胞的分化程度有关。

Nob1基因；结直肠癌；免疫组化

结直肠癌是一种消化系统中较为常见的恶性肿瘤，从病因分析可知半数以上来自腺瘤癌变。随着分子生物学技术的发展，同时存在的分子事件基因表达被大家逐渐认识，直肠癌的发生发展是一个步骤、多阶段、多基因参与的遗传型疾病。近年来的研究表明，肿瘤的发生与发展不仅决定于肿瘤细胞的增殖，而且与肿瘤细胞的凋亡密切相关［1-3］。

Nob1基因是最近新发现的一个基因，其主要编码的是一个多功能的蛋白质，参与并调节核糖体40 S小亚基组装、26 S蛋白酶体合成与装配以及细胞周期的调节。因此，若Nob1的表达发生变化则会通过影响核糖体和蛋白酶体在细胞中的作用而影响蛋白质的合成与降解，从而引起肿瘤的发生、发展以及转移［4-5］。因此本次研究应用免疫组化技术检测结直肠正常组织与癌组织中Nob1基因的表达情况，从而探讨结直肠癌组织中Nob1的表达临床意义。

1　资料与方法

1.1病例资料：收集山西大医院2012年7月至2013年9月结直肠癌手术切除并资料完整60例病理诊断为结直肠癌的石蜡包埋标本，并确认术前未经放化疗治疗。其中男34例，女26例，平均年龄63岁（43～78岁），肿瘤部位：结肠29例，直肠31例。Duck分期：A期12例，B期22例，C期17例，D期9例。大肠腺癌分化程度（WHO）：高分化12例，中分化30例，低分化18例。

1.2实验主要试剂：免疫组化染色显色试剂（北京中杉金桥）。

1.3方法免疫组织化学染色（SP法）：一抗1∶200稀释，磷酸盐缓冲液（PBS）代替一抗做阴性对照。结果判定：以组织细胞内出现棕黄色颗粒作为阳性。每张切片在显微镜（×400）下取五个不同的区域，每个区域选取约200个细胞，根据每个视野中的阳性细胞所占比例与其显色强度两指标的乘积作为该视野的得分。评分标准为：阳性细胞比例：＜25%（0分），25%～50%（1分），51%～75%（2分），＞75%（3分）；显色强度：未着色（0分）、浅黄色（1分）、棕黄色（2分）、棕褐色（3分）。每张切片随即取5个视野。分为0～2分（-），3～5分（+），6-8分（++），＞8分（+++）。分析Nob1与癌组织病理特征相关性。

1.4统计学处理：采用SPSS16.0软件对结果进行统计学分析。免疫组织化学染色（SP法）采用χ2检验，P＜0.05，差异有统计学意义。

2　结 果

随机抽取手术切除60例结直肠癌组织切片，并对其进行免疫组化检验。检测结果为：11例（+++），19例（++），14例（+），16例（-），阳性表达率为73.3%。Duck分期：A期阳性9例，阳性率为75.0%；B期16例，阳性率为72.7%；C期12例，阳性率为70.6%；D期7例，阳性率为77.8%，P＞0.05，无统计学差异。结直肠腺癌分化程度（WHO）：高分化5例，阳性率为41.7%；中分化23例，阳性率为76.7%，低分化16例，阳性率为88.9%。应用χ2检验分析Nob1在结直肠癌表达情况与临床病理特征的关系，结果为：Nob1蛋白的表达水平与结直肠癌的Duck分期无明显统计学意义，与分化程度有统计学意义（表1）。

表1　Nob1在结直肠癌表达情况与临床病理特征

3　讨 论

Nob1基因编码的是一个多功能的蛋白质，该蛋白的N端含有一个PIN结构域，C端含有一个ZNRD1结构域。Nob1通过泛素-蛋白酶体途径（ubiquity-proteasome pathway，UPP）参与细胞调节，而UPP是细胞内蛋白质降解一条重要途径，由泛素Ub、泛素活化酶E1、泛素结合酶E2s、泛素-蛋白链接酶E3s、26S蛋白酶体和泛素解离酶等组成。Nob1蛋白通过促进26S蛋白酶体成熟，可以高效的选择性的降解细胞内某些具有生物活性的蛋白分子，特别是一些短寿的参与调节细胞周期的蛋白分子，以及已经发现的癌基因和抑癌基因所表达的产物等，因而可以起到控制细胞的生长及凋亡、抑制肿瘤细胞生长、扩散的作用，所以Nob1基因在癌组织发生发展过程中扮演重要角色。此外，Nob1还可以通过促进核糖体18S rRNA成熟而影响蛋白质的合成，以及可能通过ZNRD1结构域而参与调节细胞周期［6］。

目前已发现的核内原癌基因有c-myc、p53、E1A等，这些基因所表达的蛋白分子已经被证明是通过泛素化途径降解的。基于Nob1在泛素依赖的蛋白水解过程中的重要作用，可以预测Nob1可能参与某些原癌蛋白的降解，并与肿瘤的发生具有一定关系。根据最新国外研究结果显示：如果运用RNA干扰技术在HEY和SKOV3使卵巢癌组织细胞上的Nob1基因有效沉默，则能降低卵巢癌组织细胞的增殖能力，并使癌细胞阻滞在G1期。因此，Nob1可能是一个原癌基因，其表达的上调可能促进了卵巢癌等肿瘤的恶性增殖［7-9］。

本研究应用免疫组织化学染色检测60例Nob1在结直肠癌表达情况与临床病理特征的关系时同时发现，在癌组织阳性率很高且与结直肠癌组织的分化程度呈正相关，提示Nob1随着结直肠癌组织的生长而表达也在增强。因此，Nob1在结直肠癌的发生发展过程中可能是一个重要的基因，有望成为结直肠癌的新肿瘤标志物，但关于其具体的机制需要进一步的研究。

［1］ Monticone M，Biollo E，Fabiano A，et al.z- Leuciny l Leuciny-l Norleucinal Induces Apoptosis of Human Glioblastom a Tumor-In it liating C ells by Proteasome Inhibition and Mitotic Arrest Response［J］.Mol Cancer Res，2009，7（11）：1822-1834.

［2］ 刘寒梢，马越云，肖华胜.血清微小RNA（miR-129-3p、miR-767-3p和miR-877*）在结直肠癌诊断中的价值［J］.肿瘤，2012，32（1）：42-44.

［3］ 裴振，霍小蕾，李代强，等.Nob1基因及其与肿瘤的研究进展［J］.齐齐哈尔医学院学报，2011，32（22）：3688-3689.

［4］ Lin S，Meng W，Zhang W.Expression of the NOB1 gene and its clinical significance in papillary thyroid carcinoma ofintermational medical research［J］.J Int Med Res，2013，41（3）：568-572.

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［6］ 林杨，崔满华，滕红，等.应用RNA干扰沉默NOB1基因对卵巢癌HEY细胞增殖和周期的影响［J］.中国妇幼保健，2010，25（8）：1077-1079.

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［8］ 贺孝文.NOB1基因研究与发展［J］.中华临床医师杂志，2011，5（8）：2360-2362.

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R735.3

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1671-8194（2015）10-0160-02

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