蝴蝶兰的组织培养研究

张海波 等

【摘 要】自古以来，人们都有发现美、欣赏美的艺术追求。花卉等具有“美”的特质的植物理所当然的成为了养殖、欣赏的对象。在几十年以前，我国人民尚徘徊在生存的边缘，无暇追求美丽事物，随着我国社会经济的发展，人们生活水平的也逐渐提升，人们越来越重视生活中的美。花卉作为人们欣赏美的载体，不论是各类庆典、宴会，还是环境绿化建设等都是不可或缺的。蝴蝶兰的花形奇特，类似蝴蝶，色彩艳丽鲜明，花期持久，是最适合作为观赏植物的花种之一。

【关键词】蝴蝶兰 组织培养 培育材料 培育方法 激素配方

蝴蝶兰具有极高的观赏价值和经济价值，是当今国际上商业价值最大的热带兰花之一。但因为蝴蝶兰属于单茎性气生兰，其再生能力不强，因此要进行分株繁殖显得异常困难。蝴蝶兰的种子十分细小，在一般的自然条件下很难发芽，这也导致其增殖系数极低。虽然其有较高的观赏价值，但是因为不易养殖，所以在市场上的蝴蝶兰显得极为珍贵。为了提高蝴蝶兰的繁殖力，相关的专家人员利用组织培养法进行蝴蝶兰的快速繁殖，并取得了成功。蝴蝶兰的组织培养程序为：选取外植体——诱导形成不定芽——增殖不定芽——分化小植株——生根壮苗培养——温室移栽。这整个程序都是根据蝴蝶兰的生长习性而设计的，对蝴蝶兰的培育有着显著效果，解决了以前在蝴蝶兰工厂化快速繁殖中遇到的技术问题，增加了蝴蝶兰的成活率。本文就蝴蝶兰的组培方案进行了分析，首先阐述了蝴蝶兰组织培育中必须要准备的材料，然后阐述了蝴蝶兰组织培育的方法。期望通过本文的分析，能够让读者对蝴蝶兰的组培方案有更加深刻的认识。

1 蝴蝶兰组织培育中必须要准备的材料

在蝴蝶兰组织培育中可以作为外植体的有蝴蝶兰的嫩茎、花梗、叶片、茎段、茎尖等。必须要确保所取外植体的原蝴蝶兰没有虫害、没有病害，生长状态要极好。本文所选蝴蝶兰是白瓣红唇蝴蝶兰。若取花梗作为材料，则要剪去上端无须的花梗，剪成长度为五至十厘米的小段。若取叶片为材料，则要先取花梗进行诱导，当获得蝴蝶兰无菌苗后，待其成长为2叶苗时，再取其叶片或是茎尖作为培育材料。

2 蝴蝶兰组织培育的方法

2.1 不同外植体的消毒

不同外植体的消毒可分为三个步骤，下面就对这三个步骤进行仔细分析。

（1）第一步：在取得蝴蝶兰的培育材料以后，需要先对其进行清理，去除多余的部分，将主要的部分清洗干净。然后将材料剪成适当大小，以能放入灭菌容器中的大小为宜。将剪好的培育材料放在水龙头下冲洗，冲洗的时间要根据材料的清洁程度而定，可能是几分钟，也可能是几小时。在污染严重的情况下，流水清洗是最有效的清洁方式。在清洗的过程中，可以适当加入少量的洗衣粉，洗衣粉能够很容易的去除附着在材料上的污物，尤其是脂质性的污物。再用自来水将洗衣粉水清洗干净。为了使清洗的效果更好，还可以适当的加入表面活性物质——“吐温”。

（2）第二步：培育材料的表面浸润灭菌。首先要准备好灭菌的器械，比如玻璃棒、烧杯、无菌水、70%酒精、消毒液等等。先在烧杯中倒入消毒溶液，并加几滴消毒助剂Tween-80，在消毒的过程中要不断的用玻璃棒进行轻轻搅动，这样有助于消毒液与培育材料的充分接触，能够驱除气泡，使消毒更为彻底。在设计的消毒时间结束之前的一到两分钟，就可以将消毒液慢慢倾入另一个烧杯，切记不要将材料也倒入另一个烧杯。在消毒液倒完以后，立即注入无菌水进行涮洗，涮洗结束以后，再用自来水冲洗30～60min。接着在超净工作台上，将已经切割好的材料用准备好的酒精清洗半分钟时间，再用无菌水进行冲洗，完成以后，如果所取材料是叶片，则将其放入0.1%HgCI溶液中浸泡八到十二分钟左右的时间，再用无菌水冲洗五到八次；如果所取材料是花梗，则将其放入0.1%HgCI溶液中浸泡十到二十分钟，再使用无菌水冲洗三到五次。

（3）第三步：使用无菌水涮洗。无菌水涮洗的主要目的是免除消毒剂对材料细胞的副作用，在使用无菌水涮洗的过程中，必须要坚持涮洗五到十次，每次清洗都要确保持续时间在30s以上。其中必须要注意的几点：1）在酒精中浸泡的时间要短，避免因浸泡过久导致材料失绿；2）对于老熟材料，比如种子等，要在酒精中浸泡久一点；3）升汞的渗透力较弱，可以多浸泡一些时间；4）在消毒液中加入浓度在0.08%～012%之间的Tween-20或是Tween-80，能够降低植物材料表面的张力，使消毒效果更加明显。

2.2 培养基激素配方

初代培养的目的是为了诱导类不定芽（PLB）或丛生芽，基本培养基为2/3MS培养基。在培养基中均要加入蔗糖、琼脂、碳粉等，蔗糖的加入量为20mg.L-1，琼脂的加入量为5mg.L-1，碳粉的加入量为AC1.0mg.L-1。接种之后，将其放入暗培养室25～30小时，再改为光照培养，此时温度应该控制在23～25℃之间，日光灯照明的强度为2000 Lux，光照时间设定为10h/d。其具体配方如下表1所示。一般情况下，30小时以后，就会分化出新芽。在30小时以后，再开始统计，选择出分化最好的培养基。

2.3 不定芽增殖

将花梗初代培养萌发的不定芽切下，转接到增殖培养基上，如表2所示。每隔40～50天就继代增殖一次，次数不宜超过15次。随着继代增殖次数的增加，6-BA的浓度也随着降低。在接种的过程中，要确保材料不受到伤害。培养室的温度要控制在24～28℃之间，光照强度要控制在1900～210 0 Lux之间，光照时间以10h/d最合适。培养基的附加材料与基本培养基一致。

2.4 生根

在生根培养期间，其温度要控制在24～28℃，光照强度要设置在4000～ 10000Lux，时间要设置为12h/d。若是直接利用太阳散射光也可以。当芽生长到有两三片叶子，叶长有一到两厘米时，此时可将芽单个分开，按大小分级接种到生根培养基中。

2.5 炼苗移栽

当苗长至2～3cm，有1～3根条根和3～4片叶子时，便可进行炼苗。先取掉瓶盖，将其置于常温室内的散射光下，炼苗六天左右，然后再取出试管苗，将其附着的琼脂清洗干净，放入1000倍的多菌灵溶液中浸泡20s，再取出晾干，接着将其栽到不同的基质中。基质可以使用水苔、树皮块以及水苔和蕨根按1：1配合这三种。在移栽以前，必须要对基质进行消毒处理。具体的管理方法宜采用温室内小拱棚的方式。首先是环境设计，必须要将拱棚内的温度控制在18～28℃之间，棚内必须要有太阳散射光，光照强度为5000～8000Lux。其次是管理方面，移栽以后，每天都要对其进行喷雾浇水两次左右，前两周时间，要将湿度控制在80%～90%之间，后面几周要将湿度保持在70%～80%。瓶苗质量的要求必须做到：根系粗壮、品种纯正、无污染、不徒长、变异率小于5%。见表3。

表3 瓶苗质量分级

3 结语

总而言之，蝴蝶兰组织培育方式是当前最为有效的培育方式，虽然其中还有很多方面需要完善，但是只要通过试验和努力，必定会将该方法打造得更加完美和可行。

参考文献：

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作者简介：张海波（1980—），男，内蒙古赤峰人，工程师，主要从事三峡珍稀濒危野生植物繁育与保护方面的研究工作。