异粘蛋白、血管内皮生长因子和CD44V6在粘液表皮样癌组织中的表达及与淋巴结转移关系的临床病理研究

安继荣，李丽君，陈 宏，成建荣，魏文涛

（1.天水市第四人民医院，甘肃 天水 741020；2.甘肃省肿瘤医院，甘肃 兰州 730050）

异粘蛋白、血管内皮生长因子和CD44V6在粘液表皮样癌组织中的表达及与淋巴结转移关系的临床病理研究

安继荣1，李丽君1，陈 宏1，成建荣1，魏文涛2

（1.天水市第四人民医院，甘肃 天水 741020；2.甘肃省肿瘤医院，甘肃 兰州 730050）

目的 探讨异粘蛋白（MTDH）、血管内皮生长因子（VEGF）、CD44V6在粘液表皮样癌组织中的表达水平及临床意义。方法 采用免疫组织化学法检测70例粘液表皮样癌组织和26例癌旁组织中MTDH、VEGF、CD44V6的表达水平。结果 MTDH、VEGF、CD44V6在粘液表皮样癌组织中的阳性表达率分别为88.6%、68.6%、72.9%，在对照组中的阳性表达率为15.4%、7.7%、19.2%，存在显著性差异（P＜0.01）。MTDH阳性表达与组织分化程度、浸润深度、临床分期及是否淋巴结转移无相关性（P＞0.05），CD44V6、VEGF阳性表达与组织分化程度、是否淋巴结转移有相关性（均P＜0.05）。随着临床病理分期的升高，MTDH阳性检出率逐渐上升（IV期除外）；VEGF、CD44V6阳性表达率随着分化程度降低而升高。MTDH、VEGF、CD44V6在组织分化良好组与分化不良组中的阳性表达率分别为87.1%、51.6%、51.6%和89.7%、82.1%、89.7%。淋巴结未转移组MTDH、VEGF、CD44V6阳性表达率分别为82.5%、57.5%、60.0%；淋巴结转移组MTDH、VEGF、CD44V6阳性表达率分别为96.7%、83.3%、90.0%。结论 MTDH、VEGF、CD44V6参与了粘液表皮样癌的发生发展过程，检测其表达水平有助于判断肿瘤是否转移及预后。

异粘蛋白；血管内皮生长因子；CD44V6；粘液表皮样癌；淋巴结转移

肿瘤的转移及局部广泛浸润是一个涉及多基因、多信号通路、多种调节机制的复杂过程，是细胞中基因改变不断累积的结果［1］。涎腺粘液表皮样癌为涎腺最常见的恶性肿瘤［2］，是由柱状、透明和嗜酸性粒细胞样特点的粘液细胞、中间细胞、表皮样细胞构成的上皮恶性肿瘤［3］。笔者选择与肿瘤发生及转移密切相关的异粘蛋白（MTDH）、血管内皮生长因子（VEGF）、CD44V6进行研究，探讨其在粘液表皮样癌组织中的表达及其与淋巴结转移的关系，为临床判断预后及早期发现转移提供依据。

1 资料与方法

1.1 一般资料

研究组为天水市第四人民医院肿瘤外科及口腔科2009年1月至2014年1月住院病人的手术标本（70例），术前均未做化疗、放疗，男性48例，女性22例，年龄38～74岁，平均53.4岁。其中，原发腮腺粘液表皮样癌25例，颌下腺粘液表皮样癌30例，腭腺粘液表皮样癌9例，小涎腺粘液表皮样癌6例，30例区域淋巴结转移，所有病例均经病理检查明确诊断。对照组为粘液表皮样癌病人的正常涎腺组织（26例）。

1.2 实验方法

研究中使用的鼠抗人MTDH多克隆抗体及SP试剂盒购于福州迈新生物技术有限公司。鼠抗人CD44V6多克隆抗体、鼠抗人VEGF多克隆抗体及SABC试剂盒购于北京中杉金桥生物技术有限公司。将实验标本制成4 um厚的切片两张，贴于经多聚赖氨酸处理过的玻片上，58℃烘烤24 h，一张行HE染色复查诊断，另一张行免疫组织化学法处理。染色方法严格按照SABC试剂盒说明书步骤进行DAB显色，苏木素复染，中性树胶封固，以PBS代替一抗作为阴性对照，用已知阳性切片作为阳性对照。

1.3 结果判断

MTDH着色部位为细胞膜或细胞质，以细胞膜或细胞质呈棕黄色染色为阳性；在高倍镜下随机观察10个视野，每个视野下计数1 000个细胞，阳性细胞数占全部肿瘤细胞数的75%以上为表达强阳性（+++），51%～74%为表达阳性（++），25%～50%为表达弱阳性（+），＜25%为表达阴性（-），见图1。CD44V6阳性表达主要位于细胞膜，呈棕黄色颗粒（见图2）。以细胞质中出现棕黄色颗粒为VEGF阳性表达，随机选取5个高倍视野计算阳性细胞的百分比，无阳性细胞计0分，≤25%计1分，26%～50% 计2分，51%～75%计3分，＞75%计4分；着色强度依多数阳性细胞染色情况判断，无着色计0分，淡黄色计1分，棕黄色计2分，棕褐色计3分。将阳性细胞百分比计分与着色强度计分相加，0～2分为阴性（-），≥3分为阳性（+），见图3。采用χ2检验进行统计学处理，P＜0.05差异有显著性。

图1 MTDH在粘液表皮样癌中的表达

图2 CD44V6在粘液表皮样癌中的表达

2 结果

2.1 MTDH、VEGF、CD44V6在研究组与对照组中的表达

研究组MTDH、VEGF、CD44V6阳性表达率分别为88.6%、68.6%、72.9%，对照组为15.4%、7.7%、19.2%，两者比较有显著性差异（P＜0.01），见表1。

表1 两组MTDH、VEGF、CD44V6表达情况比较［n（%）］

2.2 MTDH、VEGF、CD44V6在粘液表皮样癌组织中的表达与临床病理特征的关系

MTDH表达与组织分化程度、癌浸润深度、临床分期、淋巴结转移无相关性（P＞0.05），CD44V6、VEGF阳性表达与组织分化程度、淋巴结转移有相关性（P＜0.05或P＜0.01）。随着临床分期的增高，癌组织中MTDH阳性检出率有逐渐增高趋势（IV期除外）；随着组织分化程度降低，CD44V6、VEGF阳性表达率升高，且淋巴结转移组阳性表达率明显高于淋巴结未转移组（见表2）。

表2 MTDH、VEGF、CD44V6在粘液表皮样癌组织中的表达与临床病理特征的关系［n（%）］

3 讨论

异粘蛋白（Metadherin，MTDH）又名星形胶质细胞升高基因1（astocyted eievated gene 1，AEG-1），有文献报道MTDH既是一种致癌基因，又是血管形成的诱导因子［4］。国内外有关研究表明，MTDH与多种恶性肿瘤的发生、发展及转移有关。本研究提示，粘液表皮样癌组织中MTDH阳性表达率为88.6%（62/70），对照组为15.4%（4/26），两者比较有显著性差异（P＜0.01）。说明MTDH对粘液表皮样癌有高度特异性，可能成为较好的粘液表皮样癌早期诊断的分子生物学标志物。本研究提示，MTDH在组织分化良好组与分化不良组的阳性表达率分别为87.1%（27/31）、89.7%（35/39），在淋巴结未转移组中的阳性表达率为82.5% （33/40），在淋巴结转移组中的阳性表达率为96.7%（29/30）。说明MTDH活性表达与病理组织学分级、浸润深度、临床分期及是否淋巴结转移无显著相关性。因此，用MTDH活性水平衡量肿瘤恶性程度并由此判断预后还需进一步研究。

图3 VEGF在粘液表皮样癌中的表达

血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是一种分子量为34 kD～45 kD的高度糖基化碱性蛋白，由分子量为17 kD～22 kD的同源双聚体构成。肿瘤血管生成过程受多种血管生成因子调控，已知有数十种，包括成纤维细胞生长因子家族、血管内皮生长因子家族及其受体［5］。VEGF过度表达与肿瘤生长、侵袭、转移及淋巴结转移有着密切关系。VEGF同时又是肿瘤血管生成最重要的调节因子［6］，国内外研究发现，在许多恶性肿瘤中都有VEGF过度表达。研究组VEGF阳性表达率为68.6%（48/70），对照组为7.7%（2/26），两者比较有显著性差异（P＜0.01）。VEGF在组织分化良好组与分化不良组的阳性表达率分别为51.6%（16/31）、82.1%（32/39），在淋巴结未转移组中的阳性表达率为57.5%（23/40），在淋巴结转移组中的阳性表达率为83.3%（25/30），差异均有显著性。提示随着临床分期的进展，VEGF的阳性表达率不断上升，且与组织分化程度、是否淋巴结转移密切相关，表明VEGF具有促进粘液表皮样癌转移及浸润性生长的作用，对判断肿瘤良恶性与预后有帮助。

CD44指白细胞分化抗原分化簇第44号，是一个典型的单拷贝基因多种表型的细胞表面跨膜蛋白多糖分子，位于人类CD44基因的11号染色体短臂上（11p13）。CD44V6是第一个被发现与肿瘤转移有关的CD44黏附分子，在多种肿瘤中表达，能显著增强肿瘤细胞的侵袭、转移能力［7］。研究组中CD44V6的阳性表达率为72.9%（51/70），对照组为19.2%（5/26），二者比较有显著性差异（P＜0.01）。CD44V6在分化良好组与分化不良组中的阳性表达率分别为51.6%（16/31）和89.7%（35/39），在淋巴结未转移组中的阳性表达率为60.0%（24/40），在淋巴结转移组中的阳性表达率为90.0%（27/30）。CD44V6阳性表达率分化不良组明显高于分化良好组，淋巴结转移组明显高于非淋巴结转移组，且有显著性差异，表明CD44V6与粘液表皮样癌的分化程度及是否淋巴结转移有密切关系，今后有可能把它作为判断预后的指标之一。

综上所述，MTDH、VEGF、CD44V6可能成为粘液表皮样癌临床诊断、判断预后及疗效的敏感指标，联合检测对判断疗效有重要意义，但还需要进一步大量病例分析证实。

［1］胡福军，凌志强，方铣化，等.食管癌淋巴结转移相关基因筛选研究［J］.中华肿瘤防治杂志，2008，15（4）：273-274.

［2］李树玲.头颈肿瘤学［M］.天津：天津科学技术文献出版社，1993.

［3］刘红刚.头颈部肿瘤病理学和遗传学［M］.北京：人民卫生出版社，2006.

［4］张艳艳，李红雨.MTDH和VEGF在上皮性卵巢癌中的表达及临床意义［J］.临床肿瘤学杂志，2014，19（1）：18-21.

［5］耿海云，陈映霞.VEGF VEGFR信号通路抑制剂疗效预测的研究进展［J］.临床肿瘤学杂志，2013，18（9）：842-843.

［6］刘泽民，王龙强.乳腺癌组织中VEGF-D的表达与临床意义关系的Meta分析［J］.中国现代普通外科进展，2013，16（8）：624-625.

［7］周荣平.黏附分子CD44的表达与大肠癌生物学特性间的关系［J］.现代肿瘤医学杂志，2011，19（3）：492-493.

R730.261

A

1671-1246（2015）11-0154-03