JAM-1在子宫内膜癌组织中的表达及意义

冯燕翀牛战琴.山西医科大学，山西太原03000；2.山西医学科学院山西大医院妇产科，山西太原030032

JAM-1在子宫内膜癌组织中的表达及意义

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1.山西医科大学，山西太原030001；2.山西医学科学院山西大医院妇产科，山西太原030032

目的 探讨JAM-1在不同肌层浸润深度的子宫内膜癌组织中的表达及意义。方法 73例子宫内膜癌患者，其中癌细胞无肌层浸润18例，浅层浸润38例，深层浸润17例，采用免疫组化法检测JAM-1在无、浅、深三组浸润深度的表达情况。结果 JAM-1表达在子宫内膜癌癌细胞、腺细胞的胞膜及胞浆，随肌层浸润程度的增加JAM-1的表达显著减弱，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 子宫内膜癌JAM-1的表达与癌细胞的浸润程度呈反比，提示JAM-1可能与子宫内膜癌的浸润、侵袭相关。

子宫内膜癌；连接黏附分子1；肌层浸润

子宫内膜癌（endometrial carcinoma）是发生于子宫内膜的一组上皮性恶性肿瘤，以腺癌最常见。是女性生殖系统的三大恶性肿瘤之一，占全身恶性肿瘤的7%～8%。近年来其发病率呈上升趋势［1］。子宫内膜癌在后期向肌层、宫颈、阴道侵润，而肌层浸润深度是影响子宫内膜癌的因素之一。连接黏附分子1（junctional adhesion molecule 1，JAM-1）参与构成上皮及内皮间的紧密连接复合物，在肿瘤组织癌巢的形成、血管及淋巴管的新生过程中发挥一定的作用［2］。刘艳翠等［3］研究发现在小鼠胃癌组织中JAM-1表达降低，猜想JAM-1可能通过降低细胞间的黏附促进胃癌的转移、侵袭。然而其在女性生殖系统肿瘤中特别是子宫内膜癌组织中的表达，与肌层侵润深度的关系，是否参与肿瘤的侵袭、扩散目前尚无明确的报道。本文借助免疫组化方法初步检测JAM-1在不同肌层浸润深度的子宫内膜癌组织中表达情况，探讨其在肿瘤发生发展的作用，为疾病的诊断或防治提供新的思路。

1　资料与方法

1.1 一般资料

收集长治和平医院2012年10月～2013年10月经手术治疗的子宫内膜癌患者 73例，平均年龄51岁，术后均经病理组织学检查确诊，术前均未接受激素治疗或放化疗，且全身未合并糖尿病或其他肿瘤。参照国际妇产科联盟（FIGO）制定的子宫内膜癌手术病理分期将标本分为三组：A组18例，肿瘤仅限于子宫内膜无肌层浸润；B组38例，肿瘤浸润深度＜1/2肌层为浅层浸润；C组17例，肿瘤浸润深度＞1/2肌层为深层浸润。A组平均年龄（51.4±10.1）岁，B组（50.7±10.4）岁，C组（49.9±10.7）岁，三组患者在年龄方面无显著统计学差异（P＞0.05）。

表1 JAM-1在不同浸润程度癌组织中的表达［n（%）］

1.2 试剂与设备

兔抗人JAM-1多克隆抗体购自北京博奥森生物技术有限公司，即用型二抗试剂盒、加强型DAB显色试剂盒由福州迈新生物技术有限公司生产，山羊血清封闭液购自武汉博士得生物技术有限公司，PBS缓冲液、枸橼酸盐修复液、显微镜、图像采集及分析仪等由和平医院病理科提供。

1.3 标本处理

手术切除标本固定在足量10%福尔马林固定液，固定时间不小于2h，常规石蜡包埋，垂直子宫内膜连续5μm切片。

1.4 实验方法

实验采用免疫酶法二步法检测JAM-1在不同浸润深度癌组织中的表达，参照试剂盒说明书进行试验，主要操作步骤如下：切片以二甲苯脱蜡，梯级乙醇脱水，滴加3% H2O215min以阻断内源性过氧化氢酶，PBS缓冲液清洗后加入枸橼酸盐溶液中加热1分30秒，室温冷却，滴加山羊血清封闭液室温孵育20min，甩掉封闭液滴加一抗（工作浓度为1∶200）后放入4℃冰箱中过夜。第2日PBS清洗切片后加过氧化物酶标记二抗常温下孵育15min，滴加二氨基联苯胺（DAB）显色，显微镜下观察显色，及时自来水终止。苏木素复染，清水冲洗，连过3次二甲苯，梯度酒精脱水，通风橱中风干，滴加中性树胶，盖上盖破片封片，在高倍显微镜下观察组织染色情况并照相。对照组为PBS缓冲液代替一抗。

1.5 结果判定

JAM-1表达阳性颗粒为棕黄色或黄褐色，表达部位为细胞膜或细胞浆。在400倍显微镜下观察根据染色深浅及阳性细胞百分率综合评价评分：基本不着色为0分，黄色为1分，棕黄色为2分，黄褐色为3分；选取一个高倍镜视野，每个视野计数100个细胞，计算阳性细胞率，阳性率＜10%计0分，10%～40%计1分，40%～70%计2分，≥70%计3分。以上两评分相加，总分0～1分为阴性（-），2分为弱阳性（+），3～4分为中等阳性（++），5～6分为强阳性（+++）。综合阳性率以+～+++作为阳性计算。

1.6 统计学处理

采用SPSS19.0统计软件，率的比较用x2检验或四格表的Fisher确切概率法，检验水准是α=0.05，P＜0.05时有统计学差异。

2　结果

免疫组化结果显示JAM-1主要表达在子宫内膜癌组织中增生的腺上皮细胞、癌细胞的胞膜上和（或）胞浆中。当肿瘤局限于子宫内膜时，JAM-1阳性率为 83.33%；JAM-1 在浅层浸润子宫内膜癌组织中的表达阳性率为 60.52%，与无肌层浸润组比较，其阳性率显著降低（P＜0.05），并且随着子宫内膜癌肌层浸润程度的增高，其表达显著降低，统计学分析显示，无肌层浸润、浅肌层浸润分别与深肌层浸润比较，具有统计学差异（P＜0.05）。见表1，图 1。

无浸润组织

图1 JAM-1蛋白在子宫内膜癌组织中的表达（免疫组化染色，×400：JAM-1阳性表达主要定位于癌细胞、腺细胞的胞膜、胞浆中，在无浸润组织中癌细胞异型性轻，JAM-1强阳性表达；浅层浸润组癌细胞异性型较强，JAM-1呈阳性表达；深层浸润组癌细胞异型性明显，核大、不规则，JAM-1弱阳性表达）

3　讨论

紧密连接在维持正常上皮、内皮稳态发挥重要作用，是各种良恶性肿瘤增殖、转移、侵袭的屏障结构，紧密连接结构的紊乱对癌细胞的营养、增殖、迁移、浸润等方面造成一定的影响［4］。紧密连接是由occludin、claudins、JAMS、zos等蛋白构成的复杂结构［5］。JAMS是细胞间紧密连接黏附分子，属于免疫球蛋白超家族类，包含JAM-1、JAM-2、JAM-3三个成员。JAM-1是新近发现的跨膜蛋白，已有研究证实JAM-1最先出现在细胞间接触位点并能召集其他紧密连接蛋白从而启动紧密连接的形成［6-8］，这种特性赋予其能够介导同型细胞间的黏附［9］。

肿瘤浸润、侵袭过程非常复杂：首先，肿瘤细胞从原发病灶脱落后黏附到细胞外基质上，基质被降解后肿瘤开始浸润、侵袭。癌细胞之间的黏附分子丢失后将启动肿瘤的浸润、侵袭，这是肿瘤浸润的首要步骤。当细胞间连接被破坏时，细胞间的黏附就会松散，致使癌细胞脱离癌巢，为癌细胞的游走、转移提供了先决条件。研究认为紧密连接结构的破坏是导致癌症早期侵袭能力增强和细胞间粘附能力减弱，增强了肿瘤细胞的迁移、扩散能力的重要原因［10］。

肿瘤组织侵袭、浸润的过程中癌细胞发生迁移是必不可少的条件。JAM-1因其能影响细胞的迁移而广泛的应用于肿瘤侵袭、浸润机制的研究［11-12］。有学者［13-14］在研究肺的鳞状细胞癌、乳腺癌时发现，与正常肺上皮、乳腺组织相比肺的鳞状上皮细胞癌、乳腺癌等癌细胞JAM-1表达明显降低，JAM-1的表达与癌组织的侵袭程度呈负相关，说明JAM-1表达的下调能够促进肺癌、乳腺癌的侵袭。我们猜想JAM-1在子宫内膜癌的进展中是否有同样的变化，是否促进癌细胞的浸润。

我们通过免疫组化方法研究JAM-1在不同肌层浸润深度的子宫内膜癌组织中的表达，发现当肿瘤局限于子宫内膜时JAM-1在癌细胞、腺细胞的胞膜、胞浆高表达，特别是细胞连接处。当肿瘤浸润到肌层时，JAM-1表达减弱，特别是浸润到深肌层时偶尔才见到JAM-1阳性颗粒。根据染色深浅及阳性细胞率综合评价利用x2检验进行统计分析，得出三组JAM-1的表达具有统计学差异。本研究与Naik［14］、赵晶等［15］关于乳腺癌及宫颈癌的研究结果较一致，子宫内膜癌癌细胞的JAM-1表达随着癌细胞侵袭肌层越深，表达逐渐减弱，提示JAM-1与子宫内膜癌癌细胞的侵袭能力呈负相关，推测JAM-1的表达下调有可能促进子宫内膜癌癌细胞的侵袭。大量研究发现JAM-1在保持上皮、内皮间紧密连接结构的完整发挥一定的作用，Gumbiner等［16］认为细胞之间紧密连接结构的不完整是癌细胞转移、侵袭的主要因素之一。Gutwein等［17］通过siRNA技术干扰JAM-1的表达，表达量显著降低，诱导肾细胞癌发生转移，同时推断JAM-1的表达下调先于肾细胞癌的侵袭、转移。以上这些研究和本研究从不同角度一致说明了黏附分子JAM-A是构成细胞间紧密连接的重要成分，下调JAM-A的表达，影响紧密连接结构的形成，屏障能力减弱，通透性提高，增加了癌细胞的侵袭能力。本文观察到子宫内膜癌癌细胞肌层侵袭越深JAM-A的表达就越弱，猜想JAM-1在子宫内膜癌侵袭过程中发挥一定的作用。

有趣的是在研究JAM-1与不同组织来源的肿瘤侵袭之间的关系时发现，上调JAM-1的表达可以促进某些肿瘤的侵袭、浸润。如研究胰岛细胞肿瘤时观察到JAM-1缺陷型小鼠的癌细胞的增殖和转移能力下降幅度显著［18］。McSherry［19］在研究乳腺癌时得出与Naik相反的观点，前者在长期跟踪随访两个乳腺癌浸润癌过程中观察乳腺癌存活率较高的患者中JAM-1表达较低，推断JAM-1表达上调可以促进癌变组织周围血管、淋巴管的生成，为癌细胞的血性转移、淋巴转移提供条件。目前关于JAM-1高表达促进肿瘤进展分子机制研究多数认为JAM-1通过调节GTP Rap1酶的活性增强β1-integrin的表达能力，进而引起上皮细胞形态发生变化，导致细胞极性消失和细胞骨架结构紊乱［20-21］。然而JAM-1低表达如何促进肿瘤的浸润、侵袭的分子机制研究尚少，本实验发现JAM-1的表达水平与子宫内膜癌肌层浸润深度成反比，为以后研究JAM-1表达下调怎样促进肿瘤的进展奠定基础。同时本文只研究了JAM-1与肌层浸润深度的关系，下一步会研究JAM-1与不同病理类型、分化程度以及雌激素之间的关系。

［1］ 乐杰，谢幸.妇产科学［M］.第7版，北京：人民卫生出版社，2008：272.

［2］ Leslie VP.JAM-1 regulation of endothelial cell migration:Implications for angiogenesis［J］.Arterioscler Thromb Vasc Biol，2003，23：2119.

［3］ 刘艳翠.小鼠胃癌组织JAM-1的表达与癌转移的关系［J］.牡丹江医学院学报，2012，33（1）：33-35.

［4］ Matter K，Balda MS.Functional of tight junction［J］. Methods，2003，30：228-234.

［5］ Carola Förster.Tight junctions and the modulation of barrier function in disease［J］.Histochem Cell Biol，2008，130：55-70.

［6］ Itoh M，Sasaki H，Furuse M，et al.Junctional adhesion molecule（JAM） binds to PAR-3: a possible mechanism for the recruitment of PAR-3 to tight junctions［J］.J Cell Biol，2001，154：491-497.

［7］ Mandell KJ，Parkos CA.The JAM family of proteins［J］.Adv Drug Deliv Rev，2005，57：857-867.

［8］ Hamasaki Y，Itoh M，Sasaki H，et al.Multi-PDZ domain protein 1（MUPP1） is concentrated at tight junctions through its possible interaction with claudin-1 and junctional adhesion molecule［J］.J Biol Chem，2002，277：455-461.

［9］ Bazzoni G，Martinez-Estrada OM，Mueller F，et al.Homophilic interaction of junctional adhesion molecule［J］.J Bid Chem，2000，275：30970-30976.

［10］ Ehler E，Horowits R，Zuppinger C，et al.Alterations at the intercalated disk associated with the absence of muscle LIM Protein［J］.J Cell Biol，2001，153：763-772.

［11］ Zuo H，Gandhi M，Edreira MM，et al.Downregulation of Rap1GAP through epigenetic silencing and loss of heterozygosity promotes invasion and progression of thyroid tumors［J］.Cancer Res，2010，70（4）：1389-1397.

［12］ Murakami M，Giampietro C，Giannotta M，et al.Abrogation of junctional adhesion molecule-A expression induces cell apoptosis and reduces breast cancer progression［J］.PLoS One，2011，6（6）：e21-24.

［13］ Paschoud S，Bongiovanni M，Pache JC，et al.Claudin-1 and Claudin-5 expression patterns differentiate lung squamous cell carcinomas from adenocarcinomas［J］. Modern Pathology，2007，20（9）：947-954.

［14］ Naik MU，Naik TU，Suckow AT，et al.Attenuation of junctional adhesion molecule-A is a contributing factor for breast cancer cell invasion［J］.Cancer Res，2008，68（7）：2194-2203.

［15］ 赵晶.粘附分子JAM-A与人宫颈癌的侵袭性［J］.解剖科学进展，2010，16（3）：210-213.

［16］ Gumbiner BM.Regulation of cadherin adhesive activity［J］. J Cell Biol，2000，148（3）：399-404.

［17］ Gutwein P，Schramme A，Voss B，et al.Downregulation of junctional adhesion molecule-A is involved in the progression of clear cell renal cell carcinoma［J］. Biochemical and Biophysical Research，2009，380（2）：387-391.

［18］ Murakami M，Francavilla C，Torselli I，et al.Inactivation of junctional adhesion molecule-A enhances antitumoral immune response by promoting dendritic cell and T lymphocyte infiltration［J］.Cancer Res，2010，70（5）：1759-1765.

［19］ McSherry EA，McGee SF，Jirstrom K，et al.JAM-A expression positively correlates with poor prognosis in breast cancer patients［J］.Int J Cancer，2009，125（6）：1343-1351.

［20］ Nava P，Capaldo CT，Koch S，et al.JAM-A regulates epithelial proliferation through Akt/β-catenin signalling［J］.EMBO Rep，2011，12（4）：314-320.

［21］ Severson EA，Parkos C.Structural determinants of junctional adhesion molecule A（JAM-A） function and mechanisms of intracellular signaling［J］.Curr Opin Cell Biol，2009，21（5）：701-707.

Expression and significance of JAM-1 in tissues of endometrial carcinoma

FENG Yanchong1NIU Zhanqin2
1.Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China；2.Department of Gynecology and Obstetrics， Shanxi Dayi Hospital，Shanxi Academy of Medical Sciences，Taiyuan 030032，China

Objective To investigate the expression and significance of JAM-1 in the endometrial carcinoma tissues with different myometrial invasion depth. Methods Seventy-three patients with endometrial carcinoma were selected， of which 18 patients were without myometrial invasion， 28 patients had superficial invasion and 17 patients had deep invasion. The immunohistochemistry was used to detect the expression situation of JAM-1 in the three groups with no superficial and deep invasion. Results JAM-1 expressed in the cancer cells of endometrial carcinoma and cell membrane and cytoplasm of glandular cells. As the depth of myometrial invasion increased， the expression of JAM-1 weakened significantly， with statistically significant differences（P＜ 0.05）. Conclusion In endometrial carcinoma， the expression of JAM-1 and invasion depth of cancer cells are negatively correlated， suggesting that JAM-1 may be associated with the invasion of endometrial carcinoma.

Endometrial carcinoma；Junctional adhesion molecule 1；Myometrial invasion

R737.33

A

2095-0616（2014）06-17-04

2014-01-20）