高效液相色谱法测定染发化妆品中2-氨基-3-羟基吡啶

洪丽

（1.福建省产品质量检验研究院；(2.国家加工食品质量监督检验中心， 福建 福州 350002）

高效液相色谱法测定染发化妆品中2-氨基-3-羟基吡啶

洪丽1，2

（1.福建省产品质量检验研究院；(2.国家加工食品质量监督检验中心， 福建 福州 350002）

建立了测定染发剂中2-氨基-3-羟基吡啶的高效液相色谱(HPLC)分析方法。以甲醇为提取剂进行超声提取，中性氧化铝柱净化样品，用XB-C18柱(150 mm×4.6 mm，5μm)分离，以0.02 mol .L-1的乙酸铵和甲醇为流动相进行梯度洗脱。目标分析物在相应的质量浓度范围内线性关系良好，线性相关系数(R2)为0.9994，检出限为1.1 mg .kg-1，回收率为90.2%～98.9%，相对标准偏差为1.4%～3.3%。该方法准确、简便、快速，方法精密度、准确度和回收率均符合染发剂样品测定的要求。

高效液相色谱；染发剂；2-氨基-3-羟基吡啶

我国《化妆品卫生规范》2007版[1]暂时允许使用的染发剂原料为93种，2-氨基-3-羟基吡啶为其中氧化型染发剂中的一种，卫生规范规定了其在染发剂中最大允许使用浓度为0.6%。氧化型染料成分多属于芳香胺类化合物，因其多具致敏性或致癌性，使用会对人体健康造成多种急性或慢性的伤害[2,3]。

目前文献报道的相关染发剂原料的检测方法有气相色谱-质谱（GC-MS）[4]、毛细管电泳-间接化学发光法（CE-CL）[5]、高效液相色谱（HPLC）[6]和超高效液相色谱-质谱（HPLC-MS）[7]等。报道的染发剂中2-氨基-3-羟基吡啶的检测方法有高效液相色谱法[8]和气质联用法[9]。文章在样品提取过程中利用中性氧化铝固相萃取柱去除染发剂中复杂的基质干扰，建立了快速准确的2-氨基-3-羟基吡啶的高效液相色谱检测方法，为染发剂中原料2-氨基-3-羟基吡啶的定量检测提供了一种稳定可靠的方法。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

Waters2998高效液相色谱仪配二极管阵列检测器（美国Waters公司）；Milli-Q超纯水纯化系统（美国Millipore公司）；涡旋混合器（江苏健康医药公司）；分析天平（赛多力科（北京）科学有限公司，感量为0.1 mg）；超声波清洗器(上海生析超声仪器有限公司)。

水为超纯水；乙酸铵(优级纯，上海生工生物工程有限公司)；甲醇（色谱纯，山东禹王实业有限公司化工分公司）中性氧化铝(200～300目，国药集团化学试剂有限公司)。

染发剂标准品：2-氨基-3-羟基吡啶(CAS号：16867-03-1，2-amino-3-hydroxypyridine，AHP) ，纯度≥97%，上海晶纯生化科技股份有限公司。

中性氧化铝固相萃取柱：称取0.6 g中性氧化铝，干法填柱，使用时前用2 mL甲醇活化。

1.2 实验方法

1.2.1 标准溶液配制

AHP单标储备液：准确称取AHP染料对照品，置于50 mL比色管中，用甲醇配成标准储备液，浓度为1 mg .mL-1于4 ℃冰箱储存。使用时，用甲醇稀释。

标准系列溶液：用甲醇配制浓度为0.2、1.0、5.0、20.0、50.0μg .mL-1的标准系列溶液。

1.2.2 流动相的配制

流动相溶液（0.02 mol .L-1乙酸铵）：称取1.54 g乙酸铵，加水至1000 mL，经0.45 μm滤膜过滤，作为流动相备用。

1.2.3 样品预处理

准确称取试样1.0 g（精确至1 mg）于50mL比色管中，加入1g无水硫酸钠，20mL甲醇，旋涡混匀器上涡旋1 min，超声提取10 min，混匀，冷冻高速10000 r .min-1离心5 min。取3 mL上清液过甲醇活化后的中性氧化铝柱，用2 mL甲醇淋洗，抽干，最后用2.5 mL 50% 甲醇洗脱，用甲醇定容至3 mL，过0.2μmPTEF滤膜，仪器进样分析。

1.2.4 色谱参考条件

色谱柱：XB-C18柱，150 mm×4.6 mm（内径），5μm。流动相：A相(甲醇)+B相(0.02mol .L-1乙酸铵)，洗脱梯度程序：0 ~ 6 min，2% A；6.1 ~ 10 min，2%～60% A； 10.1～12 min，2% A。流速：1.0 mL .min-1。柱温：35 ℃。进样量：10 μL。检测器：二极管阵列检测器。检测波长：314 nm。

2 结果与讨论

2.1 色谱条件优化

2.1.1 色谱条件的选择

图1 不同流动相和色谱柱对目标染料的分离效果比较

实验使用甲醇+0.02 mol .L-1乙酸铵和甲醇+0.02 mol .L-1乙酸铵(含0.2%甲酸)2种流动相体系，比较了RP Amide C16 (250 mm×4.6 mm，5 μm)和XB-C18 (150 mm×4.6 mm，5 μm)色谱柱对目标染料的分离效果及峰形。使用甲醇+0.02 mol .L-1乙酸铵流动相时，XB-C18和RP Amide C16 色谱柱分离效果分别如图1中a1和a2所示；使用甲醇+0.02 mol .L-1乙酸铵(含0.02%甲酸)流动相时，XB-C18和RP Amide C16色谱柱分离效果分别如图1中a3和a4所示。由图可以看出，使用甲醇+0.02 mol .L-1乙酸铵作为流动相时，XB-C18和RP Amide C16 色谱柱对目标染料分离效果均令人满意，由于XB-C18为常用色谱柱，因此本实验选用此柱为分离色谱柱，流动相选用甲醇+0.02 mol .L-1乙酸铵。

2.1.2 检测波长选择

用二极管阵列检测器在200～700 nm波长范围内，对目标染料进行吸收光谱扫描，扫描光谱图如图2所示。由图可知，目标染料的最佳检测波长可设定为314 nm。

图2 目标染料扫描光谱图

2.2 样品处理方法优化

2.2.1 固相萃取条件优化

利用加标样品，选择了中性氧化铝柱和聚酰铵柱对目标分析物进行净化处理。回收率结果表明，样品经中性氧化铝柱净化后，回收率大于90%，而聚酰铵柱对目标分析物不保留，因此实验选用中性氧化铝柱作为预处理小柱，中性氧化铝净化样品效果如图3所示。

使用中性氧化铝柱时，用甲醇溶液作为洗脱液，对目标分析物的洗脱回收率结果如图4所示，当甲醇溶液中水含量大于30%即甲醇溶液中甲醇含量小于70%时，回收率基本稳定且接近100%，因此实验使用50%甲醇作为洗脱液。

图3 样品未净化前(a1)，净化后(a2)及样品加标净化后(a3)

图4 甲醇溶液对固相萃取回收率的影响

2.3 方法学实验

2.3.1 方法的线性范围、检出限及定量下限

AHP染料的线性方程、线性范围、相关系数、检出限(信噪比S/N=3)及定量下限(S/N=10)见表1。结果表明，AHP染料在相应的质量浓度范围内，线性关系良好，R≥0.998符合标准定量要求。

表1 线性范围、线性相关系数、检出限与定量限

表2 样品(染发膏)加标回收率 (n=6)

2.3.2 方法回收率和精密度

以空白染发膏样品作为空白基质样品，进行加标回收实验。分别加入如表2所示的3个水平的质量浓度，每个水平平行测定6次，AHP染料的平均加标回收率为90.2%～96.9%，相对标准偏差(RSD)为1.4%～3.3%，表明，该方法具有良好的精密度和准确度。

3 结论

染发化妆品中组分较多，对目标分析物会存在背景干扰，利用中性氧化铝固相萃取柱能有效去除样品中的杂质，净化样品，实现对染发剂中2-氨基-3-羟基吡啶染料的准确定量分析。文章建立了染发剂中2-氨基-3-羟基吡啶染料的高效液相色谱分析测定方法，该方法具有操作简便、快速、灵敏度高和重现性好等特点。

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O657.7

A

1007-550X（2015）05-0031-04

10.3969/j.issn.1007-550X.2015.05.001

2015-04-19

洪丽，女，福建福州人，助理工程师，主要从事食品及相关产品质量分析研究。