三阴性乳腺癌中CK5/6和PTEN的表达及其临床病理意义

蒋 冰，黄 波，蔡存伟，刘 骞，王 正

(辽宁省肿瘤医院 病理科，辽宁 沈阳 110042)

论 著

三阴性乳腺癌中CK5/6和PTEN的表达及其临床病理意义

蒋 冰，黄 波，蔡存伟，刘 骞，王 正

(辽宁省肿瘤医院 病理科，辽宁 沈阳 110042)

目的 探讨三阴性乳腺癌组织中CK5/6和PTEN的表达及其临床病理意义。方法 通过免疫组化方法检测68例三阴性乳腺癌组织和22例正常乳腺组织CK5/6和PTEN的表达，分析两者的表达水平与临床病理特征及预后的关系。结果 CK5/6在三阴性乳腺癌组织阳性率为52.9%(36/68)，明显高于正常乳腺组织9.1%(2/22)(P<0.05)。PTEN在三阴性乳腺癌组织阳性率为55.9%(38/68)，明显低于正常乳腺组织90.9%(20/22)(P<0.05)。CK5/6和PTEN表达在肿瘤直径<5cm和≥5cm间，淋巴结转移数目<5个和≥5个间及是否远处转移间比较，差异均有显著性意义(P<0.05)。三阴性乳腺癌CK5/6阳性组及PTEN阴性组患者的生存时间显著短于CK5/6阴性组及PTEN阳性组(P<0.05)。结论 三阴性乳腺癌CK5/6表达和PTEN表达缺失与肿瘤大小、淋巴结转移数目及远处转移有关，CK5/6表达和PTEN表达缺失提示患者预后不良。

三阴性乳腺癌；CK5/6；PTEN；预后

三阴性乳腺癌(triple-negative breast cancer，TNBC) 指雌激素受体(estrogen receptor, ER) 、孕激素受体(progesterone receptor, PR) 和HER2 /neu 均无表达的乳腺癌, 被认为是一种独立的临床病理类型, 以发病年龄低、细胞分化差、肿瘤侵袭能力强、预后较差、缺乏有效靶向治疗为主要特征，70%～80%的三阴性乳腺癌是基底细胞亚型[1-2]。研究提示，一些分子标记物的异常表达可能是三阴性乳腺癌易复发的重要原因[1-3]。基底细胞样乳腺癌通常表达基底细胞角蛋白(basaloid cytokeratins)，包括CK5/6，CK14及CK17[4]。CK5/6是识别基底细胞样乳腺癌最重要的分子标记物，并且可能是三阴性乳腺癌预后相关因素[5]。PTEN是近年来发现的抑癌基因，具有双特异性磷酸酶活性，广泛作用于细胞信号通路中的信号分子，通过诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡抑制肿瘤发生发展、浸润和转移[6]。本研究通过免疫组化技术联合检测三阴性乳腺癌中CK5/6和PTEN的表达，分析二者与临床病理特征及预后的关系。

1 材料和方法

1.1 标本及来源

收集辽宁省肿瘤医院2006—2012年三阴性乳腺癌手术标本68例及正常乳腺组织22例，患者均为女性，年龄23～79岁(中位年龄48岁)，有ER、PR及HER2 /neu的检测结果，均有完整的临床资料及术后随访记录，总生存时间(overall survival，OS)的计算是从手术日期随访至2015年5月31日，或由于复发、转移而死亡的日期为止。术前均未接受放疗及化疗。所有标本均经10%中性福尔马林固定，石蜡包埋。

1.2 免疫组织化学染色

取所需病例存档石蜡块，由病理学专家根据HE切片形态学观察，确定具有代表性的病变部位(避开出血、坏死及纤维化区)，制成4μm连续切片。按EnVision法及抗体说明操作(一抗CK5/6：D5/16 B4, Dako；PTEN：6H2.1，Dako)。

1.3 结果判定

选择肿瘤细胞阳性染色集中区域，每张切片计数500个癌细胞，由两名病理医师双盲观测。CK5/6胞浆表达视为阳性表达，PTEN胞核或胞浆表达视为阳性表达。结果评定采用Allred score 积分[7]，指肿瘤细胞阳性细胞百分比计分(阴性计为0，<1%计为1，1%～10%计为2，10%～1/3计为3，1/3～2/3 计为4，>2/3计为5)与染色强度计分(无染色计为0，弱阳性计为1，中等强度计为2，强阳性计为3)之和。Allred Score积分≤4为阴性，>4为阳性。

1.4 统计学方法

采用SPSS13.0统计软件，CK5/6和PTEN表达与三阴性乳腺癌临床病理特征(年龄、肿瘤大小、脉管浸润、淋巴结转移数目及远处转移)的关系(单因素分析)采用χ2检验及精确概率Fisher检验。生存分析采用Kaplan-Meier 曲线(Log Rank 检验)。多因素分析用Cox回归模型。P<0.05表示有统计学意义。

2 结 果

2.1 CK5/6和PTEN在三阴性乳腺癌组织及正常乳腺组织中的表达

CK5/6表达定位于胞浆，呈棕黄色颗粒状，在三阴性乳腺癌组织中阳性率为52.9%(36/68)，正常乳腺组织腺体腔缘侧上皮仅2例表达CK5/6，阳性率为9.1%(2/22)，二者比较差异有显著性意义(P<0.05)，CK5/6的表达情况见图1。PTEN表达定位于胞核或胞浆，呈棕黄色颗粒状，在三阴性乳腺癌组织中阳性率为55.9%(38/68)，在正常乳腺组织中阳性率为90.9%(20/22)，二者比较差异有显著性意义(P<0.05)，PTEN的表达情况见图2。

2.2 CK5/6和PTEN表达与三阴性乳腺癌临床病理特征的关系

CK5/6和PTEN表达在肿瘤直径<5cm和≥5cm间，淋巴结转移数目<5个和≥5个间及是否远处转移间比较，差异均有显著性意义(P<0.05)。见表1。

图1 CK5/6在三阴性乳腺癌组织及正常乳腺组织中的表达

图2 PTEN在三阴性乳腺癌组织及正常乳腺组织中的表达 (×400)

表1 CK5/6和PTEN表达与三阴性乳腺癌患者临床病理特征的关系

2.3 CK5/6和PTEN表达与预后的关系

68例三阴性乳腺癌病例均具有完整随访资料。生存时间1～96个月，平均生存时间(71.6±3.5)个月，中位生存时间62个月。

Cox回归多因素分析显示，肿瘤直径≥5cm、淋巴结转移数目≥5个、有远处转移、CK5/6表达阳性和PTEN表达缺失均为影响三阴性乳腺癌预后的危险因素。见表2。Kaplan-Meier 法(Log Rank 检验) 显示CK5/6表达阳性组平均生存时间(62.8±4.6)个月，中位生存时间65个月；CK5/6表达阴性组平均生存时间(80.3±4.4)个月，中位生存时间85个月。PTEN表达阳性组平均生存时间(74.4±5.0)个月，中位生存时间80个月；PTEN表达阴性组平均生存时间(52.9±5.9)个月，中位生存时间48个月。统计分析表明，CK5/6表达阳性组预后明显差于阴性组(P<0.05)；PTEN表达阴性组预后明显差于阳性组(P<0.05)。见图3。

表2 三阴性乳腺癌总生存的多因素分析

图3 CK5/6和PTEN表达与预后的关系

3 讨 论

有研究表明，10%～15%的乳腺癌患者2年之内会发生远处转移[8]，三阴性乳腺癌的远处转移能力相对更强[9]。一些常规的影响肿瘤患者预后的临床病理特征如组织学分级等，对三阴性乳腺癌的预后判定缺乏统计学意义[10]。70%～80%的三阴性乳腺癌是基底细胞亚型[1-2]，Korsching 等[11]利用免疫组化技术检测21例基底细胞样乳腺癌，发现其均表达CK5/6及EGFR。在不同的研究中，由于采用不同的免疫组化评分系统，CK5/6阳性表达率在24%～72%之间[12]。 本研究中CK5/6阳性表达率为52.9%，与之前研究结果一致。多个研究表明，CK5/6阳性表达提示乳腺癌患者预后不良，它和其他临床病理特征如肿瘤大小、组织学分级、淋巴结转移等一样，可作为影响乳腺癌预后的独立因素[10，13-14]。本研究中，三阴性乳腺癌CK5/6表达阳性组预后明显差于阴性组(P<0.05)，并且可以作为影响三阴性乳腺癌预后的危险因素(P<0.05)。

抑癌基因PTEN编码由403个氨基酸组成的PTEN蛋白，分子量约为47 kD，具有双特异性磷酸酶活性, 由氨基末端蛋白酪氨酸磷酸酶催化结构域(PTP)和羧基末端的C2结构域组成，氨基末端有双特异磷酸酶催化区的核心基序，能对酪氨酸和丝氨酸/苏氨酸残基脱磷酸化，广泛作用于细胞中的信号分子, 在多种肿瘤中表达缺失或减少，其在肿瘤发生过程中持续丧失功能被认为是细胞恶变的重要分子事件之一[15]。PTEN是PI3K信号通路的重要调节因子，PTEN功能失调被认为在激活PI3K /Akt及

mTOR途径过程中起到关键作用[16]。由于内分泌治疗及抗HER-2靶向治疗对三阴性乳腺癌无效，由PTEN功能失调激活的信号通路被认为是治疗三阴性乳腺癌的潜在靶点，相应的临床药物研究成为该领域热点。本研究中，三阴性乳腺癌PTEN表达阴性组预后明显差于阳性组(P<0.05)，并且可以作为影响三阴性乳腺癌预后的危险因素(P<0.05)。恶性肿瘤的发生要经过一系列基因表达变化和多因素的共同作用。本研究结果显示，CK5/6表达和PTEN表达缺失与三阴性乳腺癌的发生发展密切相关。在临床病理活检中联合检测CK5/6和PTEN蛋白表达，能够更好地了解三阴性乳腺癌的发生发展及生物学行为， 增加判断预后的准确性，同时也为进一步揭示三阴性乳腺癌发病机制、实现靶向治疗提供可能。

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Clinical significance of CK5/6 and PTEN expression in human triple-negative breast cancer

JIANG Bing, HUANG Bo, CAI Cun-wei, LIU Qian, WANG Zheng

(DepartmentofPathology,LiaoningCancerHospital&Institute,Shenyang110042,China)

Objective To investigate the expression of CK5/6 and PTEN in human triple-negative breast cancer and its clinical significance. Methods The expressions of CK5/6 and PTEN in 68 cases of triple-negative breast cancer (TNBC) and 22 cases of normal breast tissue were detected by immunohistochemistry. Results The positive frequency of CK5/6 (52.9%, 36/68) was significantly higher in TNBC than that (9.1%, 2/22) in normal breast tissue (P<0.05). The positive frequency of PTEN (55.9%, 38/68) was significantly lower in TNBC than that (90.9%, 20/22) in normal breast tissue (P<0.05). In tumor size, number of metastatic lymph nodes and distant metastasis, TNBC with CK5/6 positive and PTEN-loss have significantly worse performance (P<0.05). The overall survival was significantly shorter in TNBC cases with CK5/6 positive and PTEN-loss. Conclusion TNBC with CK5/6 positive and PTEN-loss could be related with lymph node metastasis and distant metastasis and the worse prognosis.

triple-negative breast cancer; CK5/6; PTEN; prognosis

10.11724/jdmu.2015.06.03

辽宁省自然科学基金项目(20102122)

蒋 冰(1980-), 女，辽宁沈阳人，主治医师。E-mail： jiang_yunjia@163.com

黄 波，教授。E-mail：huangbo197033@163.com

R737.9

A

1671-7295(2015)06-0529-04

蒋冰，黄波，蔡存伟，等. 三阴性乳腺癌中CK5/6和PTEN的表达及其临床病理意义[J].大连医科大学学报，2015,37(6)：529-532,536.

2015-07-10；

2015-11-16)