猴耳环水提物对哮喘模型豚鼠外周血细胞的影响

谭滴清等

摘要：为了研究猴耳环水提物对卵清蛋白（OVA）所致的哮喘模型豚鼠外周血细胞的影响，将50只豚鼠随机分为阴性对照组、阳性对照组、猴耳环水提物高、中、低剂量组，每组10只。试验第一天给阴性对照组和阳性对照组、猴耳环水提物高、中、低剂量组分别腹腔注射生理盐水和10%OVA致敏，第14天和第15天用OVA雾化激发诱发哮喘模型。试验结束后心脏采血，生化分析仪检测观察各组豚鼠外周血细胞数量的变化。结果表明，阳性组嗜碱性粒细胞数及中性粒细胞数均低于阴性组，差异显著（P<0.05），其余各组与阴性组比较均差异不显著；各组的淋巴细胞数和单核细胞数分别与阴性组比差异不显著（P>0.05）。适量的猴耳环水提物对白细胞总数含量变化有积极的作用。

关键词：猴耳环水提物；外周血细胞；影响

中图分类号：R285.5 文献标识码：A 文章编号：1007-273X（2015）08-0010-02

猴耳环水提物为棕黑色膏状体，在广东民间较为常用，其抗菌、抗炎作用在临床用药实践中已得到证实，但目前研究对其作用机理尚未明确。据于猴耳环的众多功效，本研究拟通过建立哮喘豚鼠模型，观察猴耳环水提物对OVA致哮喘模型豚鼠外周血细胞的影响。

1 材料与方法

1.1 试验动物

普通级豚鼠50只，雄性，体重250～350 g，由广州中医药大学实验动物中心提供；生产许可证编号：SCXK（粤）2008-0020；使用许可证号：SYXK（粤）2008-0001。

1.2 药品与试剂

中药猴耳环水提物（批号：130903，含没食子酸5.1%），由广州莱泰制药有限公司提供；地塞米松（批号：41211251），由天津金耀集团湖北天药药业股份有限公司生产；卵清蛋白，由美国Sigma公司生产；生化试剂盒，由上海科华生物工程股份有限公司提供。

1.3 仪器与设备

梅特勒AL204电子分析天平；台式高速冷冻离心机（型号：MulitifugellR）；日立7060全自动血生化分析仪。

1.4 试验设计

将50只雄性豚鼠依体重按随机表分成5组：阴性对照组，阳性对照组、猴耳环水提物高剂量组、猴耳环水提物中剂量组、猴耳环水提物低剂量组，每组10只。试验第一天用10%卵清蛋白生理盐水溶液腹腔注射，每只1 mL。OVA致敏的第14天将致敏豚鼠放置于密闭塑料箱内，用雾化器喷入0.05%OVA，40 s/（次·只），连续4次；第15天，喷入1%OVA溶液超声雾化激发2次，第一次2 min/（次·只），4 h后5 min/（次·只）。各组分别于致敏后第七天给药。阴性对照组给予生理盐水；阳性对照组给予地塞米松，剂量为0.1 mg/100 g；猴耳环水提物高剂量组采用原液的1/2浓度给药，剂量为1 ml/kg；猴耳环水提物中剂量组采用原液的1/4浓度给药，剂量为1 ml/kg；猴耳环水提物低剂量组采用原液的1/8浓度给药，剂量为1 ml/kg；连续给药7 d。试验结束后，心脏采血，3 000 r/min离心10 min，分离血清，采用全自动生化分析仪进行检测。

1.5 数据处理

数据采用SPSS19.9软件分析，用平均数±标准差来表示。

2 结果与分析

豚鼠受OVA致敏激发后，并给予猴耳环水提物和地塞米松治疗，于停药后24h检查外周血细胞数量，其结果见表1。由表1可知，阳性对照组和猴环耳水提物中剂量组红细胞数低于阴性组，差异显著（P<0.05）；猴环耳水提物高剂量组和低剂量组的红细胞数低于阴性对照组，差异不显著（P>0.05）；猴环耳水提物中剂量组血红蛋白数与阴性对照组比较，差异显著（P<0.05），其余各组与阴性对照差异不显著；各组豚鼠血小板计数与阴性比较均差异不显著；阳性对照组和猴耳环水提物中剂量组白细胞计数低于阴性对照组，差异显著P<0.05）；猴耳环水提物高剂量组嗜酸性粒细胞数低于阴性对照组，差异显著（P<0.05）；阳性对照组嗜碱性粒细胞数低于阴性对照组，差异显著（P<0.05），其余各组与阴性对照组相比差异不显著；阳性对照组中性粒细胞数低于阴性组，差异显著（P<0.05），其余各组与阴性对照组比，差异不显著；各组豚鼠淋巴细胞数和单核细胞数分别与阴性对照组比较均差异不显著（P>0.05）。

3 讨论

血细胞是存在于血液中的细胞，含红细胞、白细胞、血小板等，通过观察统计各血细胞的数量变化可以在一定程度上反应药物的毒副作用及对身体的影响[1]。外周血炎症免疫细胞在哮喘发生发展中起着重要的作用，白细胞具有免疫防御功能，它是通过吞噬有害物质以及淋巴细胞产生抗体来调节机体，其中嗜碱性粒细胞和嗜酸性粒细胞是哮喘变应性炎症中释放炎症的效应细胞；嗜酸性粒细胞在哮喘病理生理学上作为原发效应细胞，与中性粒细胞一样可进行呼吸暴发产生活性氧代谢产物，后者能损伤气管上皮细胞膜，引起上皮脱落，黏膜水肿，还可诱导肥大细胞脱颗粒，炎性介质释放[2]。单核细胞在哮喘炎症中起主要早期效应细胞作用，具有递呈抗炎信息和促进分泌多种细胞因子和炎性介质前体；中性粒细胞在哮喘的发生与发展过程中呈增加趋势，有研究表明其可提示变应性炎症与多形核白细胞有关系；血小板表面具有的亲和力的IgE受体亦可能是哮喘的效应细胞之一[3]。

以嗜酸性粒细胞浸润为主的慢性气道炎症性疾病哮喘可导致微血管渗漏增加，血蛋白渗出增多。本试验结果显示，阳性对照组与猴耳环水提物中剂量组红细胞数较阴性对照组有所减少，猴耳环水提物中剂量组血红蛋白低于阴性对照组血红蛋白数，说明阳性对照组、猴耳环水提物中剂量组对微血管渗漏的修复作用不显著，而猴耳环水提物高剂量组与阳性对照组嗜酸性粒细胞含量均显示显著低于低剂量组，表示糖皮质激素和猴耳环水提物高剂量组可能有抑制嗜酸性粒细胞的趋化，这与文献[4]报道的一致，从而减少血液炎症细胞。阳性对照组和猴耳环水提物中剂量组白细胞计数低于阴性对照组，表示猴耳环中剂量和地塞米松具有减少白细胞总数的作用，即可减少哮喘免疫炎性细胞的数量；阳性对照组嗜碱性粒细胞数和中性粒细胞数均低于阴性对照组，说明地塞米松在治疗哮喘中可通过抑制嗜碱性粒细胞和中性粒细胞的增多起作用。而目前治疗哮喘最有效的抗炎药物糖皮质激素的主要作用机制是阻止炎症细胞，特别是嗜酸性粒细胞的趋化和激活、抑制细胞因子的生成、干扰花生四烯酸代谢，抑制白三烯和前列腺素的合成和释放降低气管高反应性，减轻微血管的渗漏，减轻气管水肿，使呼吸道通畅，修复气管炎性损伤的上皮的作用。但长期或大量使用可能引起一系列的副作用[5]。基于低毒副作用的中药猴耳环众多功效，本试验探讨哮喘豚鼠外周血细胞结果显示；猴耳环水提物可能含有某种免疫活性物质，具有降血清嗜酸性粒细胞的作用，也显示猴耳环水提物对哮喘的作用机制不同于糖皮质激素对哮喘的作用机制。

参考文献：

[1] 张 徐.固本平喘汤治疗支气管哮喘44例[J].河南中医，2004，24（11）：51.

[2] 中华医学会呼吸病学分会哮喘学组.支气管哮喘防治指南（支气管哮喘的定义、诊断、治疗和管理方案）[J].神州医学，2012，25（3）：171.

[3] 蔡柏蔷，李龙云.协和呼吸病学[M].北京：中国协和医科大学出版社，2011.

[4] BENTLEY A M，HAMID Q，ROBINSON D S，et al.Prednisolone treatment in asthma：reduction in the numbers of eosinophils，T cells，tryptase-only positive mast cells，and modulation of IL-4，IL-5，and interferon-gamma cytokine gene expression within the bronchial mucosa[J].AM J Respir Crit Care Med，1996，153：551-556.

[5] 郭耀威，李沛波.猴耳环提取物抗炎作用的实验研究[J].中国医药杂志，2007（12）：23-24.