不同浓度激素、活性炭对红颜草莓茎尖组培的影响

王玮玮　汪国莲　孙玉东等

摘要： 研究不同浓度6-BA、KT、GA3、活性炭对红颜草莓茎尖组培的影响。结果表明：6-BA主要影响红颜草莓茎尖增殖，KT、GA3、[JP2]活性炭影响其生长；适宜红颜草莓茎尖诱导的培养基配方为[JP3]MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L GA3+ 0.1 mg/L KT+0.2 mg/L IBA+1.0 g/L活性炭，增殖培养基配方为MS+1.0～1.5 mg/L 6-BA+0～0.1 mg/L GA3+0.1 mg/L KT+0.2 mg/L IBA+1.0～1.5 g/L活性炭，可根据瓶苗具体长势进行微调。

关键词： 草莓；激素；活性炭；茎尖；组培

中图分类号： S668.404+.3 文献标志码： A

文章编号：1002-1302（2015）08-0046-03

红颜草莓别称红脸颊、日本99号，是从日本引进的大果型草莓新品种 [1]，也是2012年世界草莓大会推荐的主栽品种。红颜草莓生长势强，果个大，浓香，长圆锥形，糖度高，硬度大，耐贮运。近年来红颜草莓在江苏省淮安地区得到广泛推广，获得众多农户好评，逐渐发展成为当地主栽品种之一。但红颜草莓育苗不易，扩繁系数及移栽成活率普遍不高，茎尖萌发率低且脱毒效果差，污染及玻璃化问题严重，给生产造成了较大损失。本研究分析了不同浓度6-BA、KT、GA3、活性炭对红颜草莓茎尖组培的影响，以期为发展红颜草莓脱毒快繁技术提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 试验材料

选取健壮、无病虫害的脱毒红颜草莓新生匍匐茎作为试验材料。

1.2 培养基

以MS为基本培养基，添加7～8 g/L琼脂、30 g/L蔗糖，同时添加6-BA促进增殖，添加IBA促进生根，添加GA3、KT、活性炭促进生长。

1.3 试验设计

参考国内红颜草莓组培的相关资料 [2]，设计MS+05 mg/L 6-BA+ 0.1 mg/L GA3+0.1 mg/L KT+0.2 mg/L IBA+1.0 g/L活性炭为诱导培养基，在解剖镜下切取不同大小的茎尖进行诱导试验，其大小分别为<0.5、0.5～1.0、1.0、1.5、2.0 mm，分析茎尖大小对其诱导的影响。

[JP3]以MS+0.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L GA3+0.1 mg/L KT+ 0.2 mg/L IBA配方为基础，将活性炭浓度分别调为0、0.5、10、1.5、2.0 g/L，切取相同大小的茎尖进行诱导，分析不同浓度活性炭对其诱导的影响。

以MS+ 0.1 mg/L GA3+0.1 mg/L KT+0.2 mg/L IBA配方为基础，添加相同浓度的活性炭，将6-BA浓度分别调为0.5、0.8、1.0、1.5、2.0 mg/L，分析不同浓度6-BA对其增殖的影响。

以MS+0.2 mg/L IBA配方为基础，添加相同浓度的 6-BA、活性炭，同时调节GA3、KT浓度，使两者浓度保持一致，分别为0、0.05、0.10、0.15、0.20 mg/L，分析不同浓度GA3、KT对其增殖的影响。

以MS+0.2 mg/L IBA配方为基础，添加相同浓度的 6-BA、GA3、KT，将活性炭浓度分别调为0、0.5、1.0、1.5、2.0 g/L， 分析不同浓度活性炭对其增殖的影响。

1.4 试验方法

将1 L诱导培养基分装为30瓶，接种后置于恒温培养箱中培养，培养条件：温度25 ℃、湿度80%、光照度1 800～2 000 lx、每天光照10 h，每隔5 d观察并记录茎尖诱导情况。

将1 L增殖培养基分装为25瓶，接种后置于培养室中进行光培养，培养条件：温度25～27 ℃、湿度80%、光照度 2 000～3 000 lx、每天光照16 h，每隔5 d观察并记录增殖情况。

本试验具有连续性、相关性，根据上一组试验结果，合理调节浓度，进行下一组试验。

2 结果与分析

2.1 茎尖诱导试验

红颜草莓茎尖接入诱导培养基后，置于恒温培养箱中培养。第2天有明显褐变发生，3～5 d后生长点适应了培养环境，表现出生命迹象，同时形成愈伤组织；7～10 d后开始萌动，生出嫩叶，此时可转至培养室中培养；20 d后长成幼株，伴有新芽生出；40 d后形成完整植株，株高2 cm左右，可转至增殖培养基中。

2.1.1 茎尖大小对红颜草莓诱导的影响

由表1可见，红颜草莓茎尖诱导时，茎尖大小对诱导的影响占主导地位，激素及活性炭的作用相对较小。茎尖小于0.5 mm时，成苗率较低且瓶苗长势弱，组培难度极大，难以满足规模化生产的需求；茎尖为1.0 mm时，褐变程度一般，具备萌发的生命力，能够形成适宜的愈伤并增殖；茎尖为1.5～2.0 mm时，茎尖生命力强，但增殖能力降低、污染率上升，对扩繁不利。

2.1.2 活性炭浓度对红颜草莓诱导的影响

由表2可见，红颜草莓茎尖诱导时，随着活性炭浓度增大，有利于减轻红颜草莓褐变程度，提高生长点生命力，促进愈伤形成，对成苗率有较大影响。活性炭浓度为0～0.5 g/L时，减轻生长点褐变作用不明显；活性炭浓度为1.0 g/L时，生长点褐变程度一般，相对容易成活，幼苗长势健壮，增殖系数较大；活性炭浓度为1.5～2.0 g/L时，对减轻生长点褐变和促进生长点生命力作用没有显著提升。

[FK（W8][HT6H][STHZ][JZ]表2 活性炭浓度对红颜草莓诱导的影响

[HJ*5][BG（！][BHDFG3，WK8，WK6*2。8W]活性炭浓度（g/L） 接种数（个） 褐变 生命力 成活率（%） 污染率（%） 成苗率（%） 增殖系数 株高（cm）

2.2 增殖试验

红颜草莓茎尖诱导成苗后，将幼苗转至增殖培养基中，置于培养室中培养。3～5 d后幼苗适应了新的培养环境，经过8～10 d的营养储备，开始表现出明显的生长，形成愈伤，生出新叶、新芽、新根；15 d后进入快速增殖期；40～50 d后，瓶苗增殖放缓、长势衰退，须转至新的培养基中培养。

2.2.1 6-BA浓度对红颜草莓增殖的影响

由表3可见，6-BA 浓度主要是对红颜草莓增殖产生影响，并延长其增殖周期。当6-BA浓度在1.0 mg/L以下时，瓶苗单株长势较壮、增殖缓慢；当6-BA浓度为1.0～1.5 mg/L时，愈伤形成相对整齐、大小合适，瓶苗健壮、无玻璃化，增殖系数较高；当6-BA浓度为2.0 mg/L时，愈伤组织偏大，叶片较小、叶柄细长，瓶苗有玻璃化倾向。

2.2.2 GA3、KT浓度对红颜草莓增殖的影响

的促进作用不明显；当GA3、KT浓度为0.10 mg/L时，瓶苗长势较为健壮、旺盛，生长期较长，红颜草莓增殖系数、株高有明显提升，参考相关资料选择KT浓度为0.1 mg/L，GA3浓度为0～0.1 mg/L较适宜；当GA3、KT浓度为0.15 mg/L及以上时，瓶苗长势较快，但叶片瘦弱、叶柄较长，有徒长倾向，部分瓶苗在缺乏营养时出现开花现象，可能是GA3浓度过高所致。

2.2.3 活性炭浓度对红颜草莓增殖的影响

由表5可见，在红颜草莓增殖过程中，活性炭具有促进生长、提升瓶苗品质的作用 [3]。当活性炭浓度为0～0.5 g/L 时，其对红颜草莓增殖的作用不明显；当活性炭浓度为1.0～1.5 g/L时，瓶苗的适应期、储备期明显缩短，有利于形成壮苗，增殖期延长，增殖系数有所增加；当活性炭浓度为2.0 g/L时，活性炭产生一定的吸附作用，对红颜草莓增殖产生抑制。

3 结论与讨论

理论上说，当红颜草莓茎尖为0.2～0.3 mm时，生产出的红颜草莓组培苗具有较好的脱毒效果，但实际生产中却较难实现，难以规模化生产。其原因主要有：（1）生长点幼嫩、细微，在解剖镜下切取时间较长导致活性丧失，具有较高的死亡率；同时难以准确切取，无法保证每个茎尖都达到脱毒水平；（2）操作过程中，乙醇灯高温、送风等环境因素，以及刀片、镊子造成的损伤和污染等情况，直接导致其死亡率大幅增加；（3）培养环境、培养基配方也是决定最终成苗率的关键。本研究表明，切取1 mm左右的茎尖较为实际、合理，能够在短时间内建立红颜草莓的组培快繁体系，规模化生产红颜组培苗。在提升种苗品质方面，可以通过以下方法达到脱毒效果：（1）引进红颜脱毒瓶苗进行扩繁；（2）引进脱毒种苗进行隔离栽培，培养匍匐茎并建立组培体系；（3）采用高温处理结合茎尖诱导的方式，直接脱去大部分病毒 [4]。

红颜草莓茎尖组培过程中，激素、活性炭对其影响较大，适宜的激素、活性炭浓度是高效生产组培苗的关键。本研究表明：红颜草莓茎尖诱导期间，培养基配方MS+0.5 mg/L 6-BA+ 0.1 mg/L GA3+0.1 mg/L KT+0.2 mg/L IBA+ 1 g/L 活性炭，能够有效减轻褐变，显著提升生长点的生命力，促进萌发，使幼苗健壮；增殖扩繁期间，配方MS+1.0～15 mg/L 6-BA+0～0.1 mg/L GA3+0.1 mg/L KT+0.2 mg/L IBA+1.0～1.5 g/L活性炭，能够有效缩短瓶苗的适应期、储备期，促进瓶苗生长增殖，瓶苗品质较高，增殖后期能生出完整的根系，边继代边生根，省时省工 [5]。

实际生产中，对每批种苗应根据生长情况，在合理范围内微调激素与活性炭的用量。红颜草莓诱导时难以形成丛生芽，初代增殖低，但继代1～2次后增殖系数会显著增加，达到3～5倍以上。理论上，以1 000株作为基数，增殖系数3倍，成活率90%，1年6～8个增殖周期，可生产红颜组培苗50万株左右，可解决生产红颜草莓脱毒种苗扩繁上的难题，能够创造较大的经济效益和社会效益。

参考文献： [HJ1.8mm]

[1] 陈怀勐，高 丽，路 河，等. 红颜草莓茎尖组培脱毒苗技术研究[J]. 北京农业，2011（1）：3-4.

[2]司长征，蔡联军，李国强. 红颜草莓组培脱毒壮苗快繁技术与应用[J]. 中国果菜，2013（4）：6-9.

[3]郭 靖，顾 虹，窦祖霞. 草莓组培苗生根培养技术研究[J]. 现代农业科技，2012（20）：88.

[4]李志强，王 晶，丁国亮，等. 草莓热处理结合茎尖脱毒技术研究[J]. 北方园艺，2012（5）：125-127.

[5]黄日静. 红颜草莓脱毒苗繁育技术规程[J]. 北方果树，2013（1）：20-21.