适宜香蕉不定芽叠氮化钠诱变的磷酸盐缓冲液配制

李洪波++吕顺++刘文清++刘建平++何建齐++韩秀香

摘要 研究了不同pH值和浓度的磷酸盐缓冲液对香蕉不定芽生长的影响，结果表明：0.043 mol/L、pH值3.07的磷酸盐缓冲液是叠氮化钠诱变香蕉不定芽的适宜缓冲液。

关键词 磷酸盐缓冲液；香蕉；不定芽；叠氮化钠

中图分类号 S668.1 文献标识码 A 文章编号 1007-5739（2015）12-0081-02

自从Spence在1965年首先发现叠氮化钠（NaN3）对大麦的诱变作用以来，国内外许多研究者对NaN3在农作物上的诱变作用进行了广泛研究[1-3]，证明NaN3是一种有效的化学诱变剂。根据有关资料[1-6]，应用NaN3进行化学诱变时，一般将NaN3溶解于pH值3.0的磷酸缓冲液进行处理，但未查到有关pH值3.0的磷酸缓冲液的配制方法。本试验研究了适宜香蕉不定芽NaN3诱变的pH值3.0的磷酸缓冲液配制方法，以为NaN3诱变剂在香蕉不定芽上的应用提供技术参考。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验材料为香蕉品种巴西蕉，来源于东莞市香蕉蔬菜研究所建立的香蕉种质资源圃。从资源圃中挖取性状优良、长势健壮的香蕉吸芽苗，切取生长点消毒后建立外植体。将外植体接种于诱导培养基诱导不定芽的分化，分化的不定芽转移到增殖培养基进行扩繁，经3～4代继代增殖培养后获得大量不定芽，选择大小一致的不定芽进行试验。

1.2 试验方法

1.2.1 pH值3.0的磷酸盐缓冲液配制方法。参照0.1 mol/L磷酸盐缓冲液（pH值2.0）配制方法（http：//wenku.baidu.com/view/），取甲液（磷酸16.6 mL，加水至1 000 mL，摇匀）60 mL、乙液（磷酸氢二钠71.6 g，加水使溶解成1 000 mL）30～80 mL混匀，用美国生产的IQ150便携式pH计测定不同体积比的混合液的pH值。

1.2.2 适宜香蕉不定芽诱变的磷酸盐缓冲液浓度筛选方法。按1.2.1可得到pH值为3.0的磷酸盐缓冲液，但该浓度的磷酸盐缓冲液是否会对香蕉苗的生长造成影响，需进一步探究。以蒸馏水为对照，用蒸馏水将0.172 mol/L、pH值3.0的磷酸盐缓冲液稀释至0.172、0.086、0.043、0.022 mol/L 4种不同浓度，在105 ℃下高温灭菌30 min备用，并用IQ150便携式pH计测定pH值。

选择生长基本一致、健壮的巴西蕉第3～4代不定芽，将其放入灭菌后的磷酸盐缓冲液和蒸馏水中浸泡3 h，用无菌水清洗3遍，接到固体培养基上进行培养。3次重复，每重复接种12瓶，每瓶接种4个芽，培养20 d后，调查接种株数、死亡株数、分化株数、有效芽数、芽高等指标。

1.3 数据处理与统计

接种株数指接种于培养基上的不定芽总数；死亡株数指接种于培养基上死亡的不定芽总数；分化株数指接种于培养基上分化有不定芽的不定芽总数；有效芽数指培养基上有效的不定芽总数；芽高指瓶内不定芽的平均株高。调查数据使用SPSS进行统计和方差分析。各指标计算公式如下：

致死率（%）=死亡株数/接种株数×100

分化率（%）=分化株数/接种株数×100

增殖系数=有效芽数/接种株数

2 结果与分析

2.1 pH值3.0的磷酸盐缓冲液配制

从表1可以看出，当甲液体积为60 mL，乙液体积也为60 mL时，两者的混合液pH值为2.96，接近3.0。因此，甲液∶乙液=1∶1，摇匀，可得到pH值接近3.0的磷酸盐缓冲液。

2.2 不同浓度磷酸盐缓冲液对香蕉生长的影响

从表2和图1～5可以看出，当用蒸馏水作对照时，溶液pH值为5.50，不定芽致死率为0，植株分化率、增殖系数和芽高较高，不定芽无褐化现象，长势强健。随着磷酸盐缓冲液浓度的增加，pH值降低，不定芽的致死率明显提高，分化率、增殖系数和芽高明显降低，长势变弱。其中，0.086 mol/L处理和0.172 mol/L处理致死率、分化率、增殖系数与蒸馏水处理差异显著，明显抑制香蕉不定芽的生长；0.043 mol/L处理、0.022 mol/L处理与蒸馏水处理的致死率、分化率、增殖系数、芽高差异不显著，对香蕉不定芽的正常生长没有明显影响。0.043 mol/L处理磷酸盐缓冲液处理pH值（3.07）接近3.0，且该浓度对香蕉不定芽的正常生长没有影响。因此，叠氮化钠诱变香蕉不定芽采用0.043 mol/L，pH值3.07磷酸盐缓冲液比较适宜。

3 结论

NaN3是一种点突变剂，其与DNA的作用方式是碱基替换，使DNA单链断裂。NaN3在pH值为3.0时，NaN3溶液中主要产生HN3分子，其呈中性，易透过细胞膜进入细胞内，以碱基替换方式影响DNA的正常合成，从而导致点突变的产生[7]。因此，在应用NaN3进行化学诱变时需要提供pH值为3.0的酸性环境，诱变效果最好。本试验系统研究了不同pH值和浓度磷酸盐缓冲液对香蕉组培苗的影响，筛选出0.043 mol/L、pH值3.07的磷酸盐缓冲液是叠氮化钠诱变香蕉不定芽的适宜缓冲液。其配制方法如下：①甲液。取磷酸4.2 mL，加水至1 000 mL，摇匀。②乙液。取磷酸氢二钠17.9 g，加水溶解成1 000 mL，摇匀。取甲液1 000 mL与乙液1 000 mL混合，即甲液∶乙液=1∶1混合均匀，可得pH值为3.07的磷酸盐缓冲液。

4 参考文献

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