地锦草颗粒对鸡耐药性大肠杆菌病的临床效果观察

高迎春　魏秀丽　陆庆泉　张传津　（山东省兽药质量检验所　山东 济南　250022）何新丽　（山东华尔康兽药有限公司　山东 济南）

地锦草颗粒对鸡耐药性大肠杆菌病的临床效果观察

高迎春魏秀丽陆庆泉张传津（山东省兽药质量检验所山东 济南250022）
何新丽（山东华尔康兽药有限公司山东 济南）

摘要本试验对地锦草颗粒及其他有关药物治疗大肠杆菌病进行观察，结果表明，地锦草颗粒与硫酸新霉素联合应用效果最好。

关键词地锦草枯粒耐药性大肠杆菌临床效果

鸡大肠杆菌垂直传播和水平传播可引起不同品种和不同日龄的鸡感染发病，发病率30%～60%，幼鸡病死率60%～100%，耐药率30%～80%，其造成的经济损失巨大，严重阻碍了养鸡业的发展［1-3］。

目前临床上防治鸡大肠杆菌病的主要药物是新霉素、氧氟沙星、阿莫西林、庆大霉素、卡那霉素等抗菌药。由于抗菌药的滥用，大肠杆菌的耐药性迅速形成、传播和扩散，不仅使药物剂量加大，疗程延长，抗菌药疗效减弱甚至无效；鸡源大肠杆菌多重耐药性严重，耐药性成为了严重困扰动物健康的问题，同时由于动物源性食品的兽药残留超标及耐药性传递，对人类健康和公共卫生也产生了严重的风险。因此本试验采用新研发的无耐药性、无药物残留、毒副作用小的天然药物耐药抑制剂-地锦草颗粒，治疗耐药性大肠杆菌，从根本上消除了大肠杆菌耐药抑制，提高了药物疗效，取得了良好的效果［4-6］。

1　材料与方法

1.1试验药品

1.1.1试验药物地锦草颗粒（批号20121201），山东华尔康兽药有限公司生产，经山东省兽药质量检验所检验合格。

1.1.2对照药物（1）硫酸新霉素可溶性粉（批号201210 26），含量5%，山东华尔康兽药有限公司生产；（2）阿莫西林可溶性粉（批号13022631），含量5%，潍坊华辰兽药有限公司生产；（3）盐酸恩诺沙星可溶性粉（批号2013011 2-1），含量2.5%，盐酸多西环素可溶性粉（批号20130201-4），含量5%，济南联达兽药有限公司生产；（4）硫酸新霉素标准品（批号30801），含量90.0%，Germany公司生产。

1.2试验动物

某养殖场所饲养的AA品种肉鸡35000只，20日龄，体重720g左右，发病3d，发病数为15000多只，死亡1000多只。

1.3试剂

甲醇、七氟丁酸、磷酸二氢钾、三氯乙酸、甲酸、冰乙酸、氢氧化钠、浓盐酸。

1.4药敏纸片、培养基、菌株

药敏纸片：阿莫西林、多西环素、新霉素、恩诺沙星；普通营养琼脂、MH培养基、麦康凯培养基、伊红美蓝琼脂，革兰氏染色液；ATCC 25922大肠杆菌，均购自杭州天和试剂有限公司。

1.5仪器与设备

Waters液相色谱仪串联质谱仪、BP211D型电子天平、MP200B型电子天平、水浴恒温振荡器、离心机、氮吹仪、显微镜、游标卡尺、恒温培养箱、移液器。

1.2方法

1.2.1观察临床症状和剖检变化

1.2.3试验室检查无菌采取肝脏、腹水和心脏血液接种于普通营养琼脂、麦康凯培养基、伊红美蓝琼脂培养基上，37℃培养20h，观察培养物颜色、形态，并将培养物涂片，进行革兰氏染色，镜检。大肠杆菌血清型诊断：将抗原抗体在玻璃板上做凝集反应，0.5min内有凝集者为“阳性”反应，同时以抗原与0.5%石炭酸生理盐水做对照。

1.2.2药敏试验药敏试验根据美国临床标准委员会（NCCLS）推荐的K-B琼脂法进行，每次药敏试验必须用ATCC 25922大肠杆菌做质控。

1.2.3试验分组试验动物及其处理：初步确诊后将发病鸡14000只分5组，饮水量0.2L/只。治疗方案：I组硫酸新霉素可溶性粉用量150mg/L；II组盐酸恩诺沙星可溶性粉用量200mg/L；III组地锦草颗粒+硫酸新霉素可溶性粉用量2g/L+50mg/L；IV组地锦草颗粒+盐酸恩诺沙星可溶性粉用量2g/L+50mg/L；V组地锦草颗粒用量为2g/L，连续用药5d。

1.2.4残留检测休药期后5d，随机抽取Ⅲ组地锦草颗粒+新霉素可溶性粉治愈组，鸡5只，采取肌肉组织匀浆后，分别检测肌肉组织中硫酸新霉素的残留量，检测依据为GB/T 21323-2007 动物组织中氨基糖苷类药物残留量的测定高效液相色谱-串联质谱法。

2　结果

2.1临床症状和剖检

病鸡表现为离群呆立、羽毛松乱、食欲减退，部分鸡排黄白色稀便。剖检主要表现为心包积液，心包膜混浊、增厚、不透明，严重的有纤维素渗出；肝脏有不同程度的肿胀，表面有不同程度的纤维素性渗出物，甚至整个肝脏为一层纤维素性薄膜所包裹；腹腔有不同程度的腹水，混有纤维素性渗出物。怀疑是大肠杆菌病。

2.2镜检结果

经分离培养实验，不同培养基上，单个菌落颜色和形态略有差异，细菌分离培养的结果见表1。显微镜观察染色结果：菌体呈现红色，两端钝圆，长度约1.5～3.0μm的短杆菌，多数单个存在，偶见有2～3个菌体连在一起。经血清学实验，0.5min内有凝集，为“阳性”反应，确定病原菌为大肠杆菌。

表1　不同培养基上的菌落形态

根据发病情况，结合主要表现、剖检变化，初步诊断为鸡大肠杆菌病，再经过实验室检查确诊该病为鸡大肠杆菌病。

2.3药敏试验结果

只有当质控菌株的抑菌圈直径在允许范围内测试菌株的结果才可以报告。用游标卡尺记录药敏圈直径，对照药敏试验判断标准，得出结果。试验结果见表2。

表2　抗菌药对大肠杆菌药敏试验结果

判定标准：抑菌圈直径（¢）≥20mm者为高度敏感以“+++”表示。抑菌圈直径（¢）16≤（¢）≤20mm为中度敏感以“++”表示。圈直径（¢）10≤（¢）≤16mm为低度敏感以“+”表示。抑菌圈直径（¢）≤10者为耐药以“-”表示。

由表2看出：大肠杆菌对阿莫西林、多西环素为耐药，对新霉素中敏，对恩诺沙星低敏。

2.4临床治疗结果

临床试验结果表明地锦草颗粒分别与硫酸新霉素可溶性粉、盐酸恩诺沙星可溶性粉联合用药，治愈率分别提高了26%、30%，有效率也有所提高。

表3　地锦草颗粒等药物对鸡大肠杆菌病的临床疗效　（只、%）

2.5残留检测结果

依据为GB/T 21323-2007动物组织中氨基糖苷类药物残留量的测定高效液相色谱-串联质谱法进行测定，Ⅲ组地锦草颗粒2g/L +硫酸新霉素可溶性粉50mg/L联合用药组，5只鸡均未检出新霉素。

3　小结

地锦草颗粒与硫酸新霉素可溶性粉联合应用降低到50mg/L不仅比单用硫酸新霉素效果好，关键是未检出新霉素残留量，证明地锦草颗粒具有明显的消除耐药抑制作用。地锦草与硫酸新霉素可溶性粉联合应用，减少了硫酸新霉素的用量，能消除耐药抑制作用，恢复药物敏感性，成本低，疗效好，降低食品中的药物残留，减少耐药性对人类带来的风险，在规模化养殖场的应用前景非常广阔。

参考文献

［1］ 赵秀英， 姚四新， 王宪文. 鸡源大肠杆菌的耐药性监测与分析［J］，河南科技学院学报. 2008（3）: 54-56.

［2］ 秦从文， 马学祥. 鸡大肠杆菌病及常见混合感染的防治初探［J］， 湖北畜牧兽医. 2011（11）: 23-24.

［3］ 范允新， 郑伟， 冯宜水. 鸡大肠杆菌病的诊断与防治［J］， 中国畜禽种业. 2010（6）: 146-147.

［4］ 高迎春， 张传津， 都业良. 地锦草颗粒对鸡人工感染大肠杆菌病的临床疗效试验［J］， 中兽医医药杂志. 2012（2）: 52-55.

［5］ 张传津， 杨修镇， 高迎春. 地锦草颗粒的急性亚急性毒性试验［J］， 山东农业科学. 2014， 46（6）: 128-130.

［6］ 张传津， 杨修镇， 张琦等. 地锦草颗粒对鸡的安全性试验［J］， 畜牧兽医杂志. 2012（5）: 1-2.

中图分类号：S853.76

文献标识码：A

文章编号：1007-1733（2015）04-0009-02

收稿日期：（2015-01-23）