一起规模养猪场圆环病毒病的实验室诊断和防治

刘桂森　桑业华　王相琴　（云南省泸水县动物疫病预防控制中心　673199）马文张（云南省泸水县饲草饲料站）

一起规模养猪场圆环病毒病的实验室诊断和防治

刘桂森桑业华王相琴（云南省泸水县动物疫病预防控制中心673199）
马文张*（云南省泸水县饲草饲料站）

猪圆环病毒病是由圆环病毒2型引起的一种新的传染病，已严重危害养猪业的发展。本次实验室诊断主要是为了确诊是否感染圆环病毒。采集了全场存栏猪的血清772份，进行ELISA抗体检测实验，结果表明，该养猪场圆环病毒的感染率为64.12%，该养殖场圆环病毒流行的原因是引种不慎，将带有圆环病毒的病猪进入该规模养殖场后，没有检验、严格隔离而导致。猪圆环病毒病仅从临床症状和剖检病理变化上是很难做出快速诊断，只有通过采样进行实验室检测，才可以确诊，在引种中严格检验，进行有效隔离，才能减少该病的流行和发生。

猪圆环病毒（PCV）属于圆环病毒科、圆环病毒属，为单股负链环状DNA病毒。该病毒粒子直径为14～25nm，为二十面体对称结构，无囊膜，是兽医学上已知动物病毒中最小的病毒之一，是一种新的猪传染病。根据致病性、抗原性及核苷酸序列，将其分为PCV-1和PCV-2两型。临床上猪感染PCV-1无致病性，但PCV-2是仔猪断奶后多系统衰竭综合征（PMWS）、猪呼吸病综合征（PRDC）、猪皮炎与肾病综合征（PDNS）的重要病原，还可引起多种肠炎病、仔猪先天性震颤（仔猪抖抖病）、母猪繁殖障碍等疾病。已严重危害养猪业的发展，应引起重视。

1　基本情况

2014年5月20日，泸水县上江乡玉淑生猪养殖场到泸水县动物疫病预防控制中心反映，该养殖场从5月14日开始有猪只出现发病症状，到20日死亡母猪3头、仔猪23头。经询问畜主，感染猪主要表现为病猪精神萎靡，食欲减退，被毛粗乱，渐进性消瘦，咳嗽，稀泻，呼吸困难呈腹式，部分母猪出现流产，新出生仔猪有震颤症状。接到报告后，泸水县动物疫预防控制中心到实地进行诊断，体温41.5℃，有的猪腹下、耳尖、四肢末梢等处发红或发紫，经过解剖死亡猪，见肾脏肿大，呈灰白色，腹股沟淋巴结、纵隔淋巴结肿大、发现黄疸症状。初步诊断感染了猪圆环病毒，在开展临床诊断和流行病学调查的基础上，采集了该场所有存栏猪的血清进行实验室ELISA抗体检测检测。

2　采样化验

2.1材料

2.1.1血清样品采集全场存栏猪的血清772份，包括种公猪4头、种母猪55头（含新引入的10头、原场的45头）、双月以下仔猪327头、双月以上育肥猪386头。

2.1.2诊断试剂猪圆环病毒2型ELISA抗体检测试剂盒，生产厂家是武汉科前动物生物制品有限责任公司，批号2014007。

2.1.3器械酶标仪、恒温箱、移液器、无菌操作台

2.2方法

2.2.1操作步骤取抗原包被板，每孔加入稀释好的洗涤液200µ1，静置3分钟倒掉液体，并在吸水纸拍干，共计洗涤2次。再分别将稀释好的待检血清和对照各取100µ1加入到抗原包被板孔中，待检样品做1孔，阴性对照和阳性对照各设2孔。轻轻振匀孔中样品（勿溢出），置37℃温育30min。甩掉板孔中的溶液，每孔加入稀释好的洗涤液200µ1，静置3min倒掉，再在吸水纸上拍干，共计洗涤5次。每孔加羊抗猪酶标二抗100µ1，置37℃温育30min。再洗涤5次，每次都要在干净的吸水纸上拍干。每孔先加底物液A一滴（50µ1）、再加底物液B一滴（50µ1），混匀，室温（18～25℃）避光显色10min。每孔加终止液一滴（50µ1），10min内测定结果（测定前在震荡器上轻轻震动一下）。

2.2.2结果判定在酶标仪上测各孔OD630nm值，用620～650纳米波长测定结果均有效，试验成立的条件是阳性对照孔平均OD630nm值≥0.7，阴性对照孔平均OD630nm值必须＜0.3。样品OD630nm值＞0.42，判为阳性；样品OD630nm值介于0.38到0.42之间，判为可疑；样品OD630nm值＜0.38，判为阴性。

3　结果与分析

通过实验室化验，该养殖场猪圆环病毒感染情况见附表。

附表　圆环病毒ELISA抗体检测结果　　　　　　（%）

通过对772份血清样品进行实验室ELISA抗体检测可发现，该养猪场圆环病毒的感染率为64.12%，感染数最高的是种母猪，其中新引入种母猪检测阳性率是100%，原存栏种母猪检测阳性率是77.78%，其次是双月以下仔猪，检测阳性率是81.35%，最低是双月以上育肥猪，检测阳性率是47.12%，种公猪没有被感染。

可以确定此次该规模养殖场圆环病毒流行的原因是引种不慎所致。该养殖场于5月10日引进了种母猪10头，引种中没有进行严格检验，引入后没有进行隔离观察就混群饲养，经过检测引入的母猪带毒率为100%，带有圆环病毒的病猪进入该规模养殖场后，导致母猪舍内种母猪和双月仔猪大量发病和死亡，育肥猪舍感染的原因是由于带病仔猪转入育肥阶段时传入。而种公猪没有被感染的原因是饲养区相对独立，引入母猪之后也没有进行配种，并有隔离设施，每天严格执行消毒制度。

4　防治措施

4.1紧急预防

用浙江诺培威生物技术有限公司生产的猪圆环病毒2型灭活疫苗（ZJ/C株）进行紧急预防，肌肉注射大猪2ml、小猪1ml。注射方法是首先对ELISA抗体检测阴性的猪只，然后是检测阳性的猪只。

4.2治疗

哺乳仔猪注射长效土霉素或者头孢噻呋，同时用阿莫西林（500mg/L）饮水；种母猪和断奶育肥猪用阿莫西林、氨基比林、黄芹多糖分别肌肉注射，1次/d，连用5d，目的是减少并发感染，同时在饲料中添加土霉素（1000g/50kg）、在饮水中添加葡萄糖粉（500g/50kg），加强营养。通过以上措施7d后大多数病猪有好转，但仍有部分猪食欲下降。

4.3消毒

在猪场内全面消毒，严格执行消毒程序，切断传播途径，杀死病原体。猪舍过道和场区用2%～3%火碱消毒，舍内用百毒杀消毒，1次/d。

4.4防控措施

（1）对所有检测出阳性的猪只进行隔离，加强饲养管理，保证猪舍的通风，淘汰感染的种母猪。（2）在疫病发生期间，禁止配种，以免公猪感染。

5　小结

（1）猪圆环病毒病是一种新的传染病，仅从临床症状和剖检病理变化上是很难做出快速诊断，通过采样进行实验室检测，可以确诊是否感染了猪圆环病毒，查清流行情况和感染数量，是规模养殖场下一步疫病预防和治疗重要指导依据。（2）规模养殖场要预防圆环病毒的传入必须坚持自繁自养，外购猪要严格检疫，隔离观察，确认无病后方可入群。严格实行“全进全出”制度，制定合理的免疫程序，搞好定期消毒工作。（3）猪圆环病毒2型感染在本场出现了三种临床表现，即仔猪断奶后多系统衰竭综合征、皮炎和肾病综合征、猪间质性肺炎。由此可见，该病毒不仅损害免疫器官，还损害肺脏、肾脏、心脏等，使多器官功能衰竭。（4）由于该病毒损害免疫器官，使机体的抗病力下降，产生免疫抑制，所以易继发猪附红细胞体病、猪放线菌性肺炎、猪支原体性肺炎、猪链球菌病等，要确诊该病上必须采集样品做实验室检测，在预防与治疗上应配合用抗继发病药。

中图分类号：S858.28

文献标识码：B

文章编号：1007-1733（2015）04-0029-02

收稿日期：（2015-01-22）

*通讯作者