车前草水煎液对超氧自由基清除作用

卢福山， 马贵栋*

（青海大学农牧学院，西宁810016）

车前草又名车前、车轮菜、猪耳草、钱串草等,为车前科植物车前(Plantago asiatica1)或平车前(PlantagodepressWilld1)的干燥全草[1]，青海省地区所生长的车前草多为平车前，其生长条件要求低，繁殖强、分布广，田间地头、路边洼地随处可见。因含多糖类、黄酮类、环烯醚萜类、苯乙醇苷类及甾体类、挥发油、有机酸类、苯乙基咖啡酰糖酯类等多种活性物质[2-3]，故具有许多药理作用。王勇等[4]发现车前子提取液能有效抑制晶体上皮细胞（LEC）凋亡,防止白内障的发生。黄秀榕等[5]利用车前草或车前籽提取液给小鼠灌胃,能明显延长小鼠游泳、常压缺氧及亚硝酸钠中毒性组织缺氧存活时间,明显增加SOD的活性,减少过氧化脂质（LPO)的生成,延缓衰老。王素敏等[7]认为车前子对机体自由基的防御机能可产生一定的影响,对动脉粥样硬化和冠心病有一定的防治作用。本研究运用超声辅助研究车前草和草籽水煎液对超氧自由基清除作用，为车前草资源的开发利用提供基本依据。

1 材料与方法

1.1 样品来源及采集 车前草样品采集于青海大学校园林地及校区周边地区，采集时间为2013年9月份，采集时用剪刀剪取地上部分和车前草草穗。

1.2 样品的预处理

1.2.1 将车前草茎叶和草籽先用自来水洗净，再用蒸馏水冲洗三遍，烘干，粉碎后，60目筛过筛，备用。

1.2.2 水煎液的制备：称取车前草和草籽粉末各200 g,加蒸馏水浸泡60min后,头煎30min,二煎30min,合并两次煎液后，过滤并浓缩后，定容至250mL,得到车前草水煎液（水煎液Ⅰ）和草籽水煎液（水煎液Ⅱ）。

1.3 水煎液清除自由基实验中样品的处理及测定

1.3.1 O2-·自由基生成及清除率的测定方法 邻苯三酚能在弱碱条件下发生自氧化反应产生O2-·，O2-·清除剂能使邻苯三酚自氧化产物在λ=420mm处吸收峰受抑制[10]。用紫外-可见光分光光度计进行监测,可间接测得O2-·的生成及O2-·的清除率。取4.5 mL pH8.2的50mmol/L Tris-HCl缓冲液,4.2mL蒸馏水,混匀后在25℃水浴保温20min，取出后立即加入在25℃预热的0.2mmol/L邻苯三酚0.3mL，总体积9.0mL。测反应启动后第10s的A420值(以pH8.2 Tris-HCl缓冲液作参比)得空白管光吸收值(即A空)。待测量所取试剂与上述一样,只是在加入邻苯三酚前分别加一定量水煎液Ⅰ和Ⅱ,蒸馏水减少相应体积，测反应启动后第10s时的A420值(用同浓度水煎液作为参比)即为待测管光吸收值(即A样)。O2-·清除率S%=(A空-A样)÷A空×100%

1.3.2·OH自由基生成及清除率的测定方法

H2O2与Fe2+作用可通过Fenton反应产生·OH，邻二氮菲一Fe2+水溶液被·OH氧化为邻二氮菲—Fe3+后,其波长在510mn最大吸收峰消失[11],当体系中加入·OH清除剂后,此氧化过程受到抑制，A510将会增大。反应体系及步骤:取0.75 mmol/L邻二氮菲,pH 7.40的150mmol/LPBS,0.75 mmol/L FeSO4,每加一管立即混匀,最后加0.01%的过氧化氢(A损)，以双蒸水代替H2O2(A未损)，置37℃保温度60min,分别测510nm处的吸光度，得A损与A未损。依上方法，依次加入邻二氮菲0.75 mmol/L,FeSO4 0.75 mmol/L,pH7.4 PBS 150mmol/L,H2O20.01%，再加入水煎液1.00mL，以同浓度水煎液作为参比测A510（即A样）。

·OH清除率S%=(A样-A损)÷(A未损-A损)×100%

2 结果

2.1 车前草水煎液I和II对O2-·自由基清除作用水煎液I和II对O2-·自由基清除作用见表1。

2.2水煎液I和II对·OH自由基清除作用 水煎液I和II对·OH自由基清除作用见表2。

表1 车前草水煎液I 和II 对O2-·自由基清除作用

表2 水煎液I 和II 对·OH 自由基清除作用

3 讨论

许多研究表明,衰老与自由基损伤细胞有密切关系,抗氧化剂能有效捕获自由基，所以具有抗衰老作用[12]。由实验结果可见，车前草水煎液Ⅰ和水煎液Ⅱ对邻苯三酚自氧化反应体系产生氧阴离子自由基(O2-·）、邻二氮菲H2O2/Fe2+体系产生羟自由基(·OH)均有一定的清除作用，且效果明显（P<0.05），表明车前草叶和草籽中均含一定的抗氧化物质。同时，还发现车前草水煎液I和水煎液II尽管对自由基均有清除作用，但两种水煎液清除O2-·自由基的效果却存在显著性差异（P<0.05），而对清除·OH自由基的效果无显著差异（P>0.05），说明车前草不同部位的组织中所含清除自由基成分不一样，因而其药用价值也有所不同。

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