桑蚕雌蛾10 ℃冷藏适宜时间的筛选

胡仕叶+韩世玉+杨胜特+张安臣+王太兴+王贤玉+黄礼平

摘 要：为了筛选出桑蚕雌蛾在10 ℃温度条件下的适宜冷藏时间，以贵蚕1号、两广二号、洞庭×碧波等原蚕雌雄蛾为试验材料，进行不同时间冷藏后的交配产卵试验，调查桑蚕雌蛾的耐冷藏性和冷藏后的交配产卵效果。结果表明，在温度10 ℃和相对湿度75%条件下冷藏，桑蚕雌蛾的耐冷藏性因品种不同有差异，从交配能力看，参试的6个原蚕品种的交配能力排序为：826>827>洞庭>湘·7>芙·9>碧波。产卵效果因品种和时间不同也有差异，在10 ℃温度、相对湿度75%条件下，中系原蚕雌蛾827、芙·9、洞庭的适宜冷藏时间为24 h；日系原蚕雌蛾826、湘·7的适宜冷藏时间为24～96 h，碧波原蚕雌蛾的适宜冷藏时间为24～48 h。

关键词：桑蚕雌蛾；10 ℃冷藏；产卵量；良卵率；不良卵率

中图分类号：S881.2 文献标识码：A DOI 编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2015.08.006

在原蚕基地繁育一代杂交种过程中，常因原蚕饲养户的饲育环境、饲养技术、桑叶质量的不同，而导致原蚕发育经过受到影响，时常发生对交品种上蔟结茧时间与发蛾调节预定日差不相吻合的问题[1]，从而造成制种过程中雌雄对交不平衡的现象时有发生，给蚕种繁育生产带来了不同程度的损失。因此，为了解决这一实际问题，蚕种生产中常采用冷藏雌、雄蛾的方式来进行弥补，以达到减少蚕种损失的目的。在没有冷藏设施的繁种基地，发生类似对交不平衡问题后，通常采用不捉不动的方法静置雌蛾等待次日交配，但如遇到自然温度较高（20 ℃以上）的季节，雌蛾一般会在未交排尿后自行产卵，造成蚕卵损失，减少制种量。近年来，桑蚕雌雄蛾的冷藏技术在蚕种繁育生产中越来越受到关注[2-9]，逐渐成为桑蚕良种繁育技术体系中的重要研究课题之一。为了系统掌握桑蚕雌蛾的冷藏温度标准和适宜冷藏时间，笔者已进行了5 ℃[10]和7.5 ℃[11]冷藏雌蛾试验，本文旨在研究筛选出10 ℃温度条件下桑蚕雌蛾的适宜冷藏时间，以期为蚕种繁育生产提供参考。

1 材料和方法

1.1 试验材料

在贵州省蚕业研究所蚕种专用冷库，采用贵蚕1号[12-13]原蚕827、826，两广二号[14-15]原蚕芙·9、湘·7，洞庭×碧波[16-17]原蚕洞庭、碧波的雌蛾进行冷藏试验。

1.2 试验设计

在10 ℃温度和相对湿度75%条件下设置冷藏时间24，48，72，96 h，以不冷藏为对照（0 h），各品种各冷藏时间分别冷藏雌蛾300头；冷藏后，827、826、芙·9、湘·7、洞庭、碧波等6个品种的原蚕雌蛾分别按贵蚕1号、两广二号、洞庭×碧波的固定对交组合进行交配。

1.3 试验方法

将各原蚕品种同日羽化雌蛾待正常展翅后放入恒温10 ℃，相对湿度75%的冷库中冷藏。雌蛾冷藏前后均在中间温度16～18 ℃过渡15 min[5]左右（对照除外），按试验设计各品种原蚕雌蛾在冷库冷藏达到规定时间后，与指定对交组合新鲜雄蛾交配，交配环境温度24～25 ℃，相对湿度70%～80%，交配时各处理设3个重复，1个重复100蛾，交配时间均为4 h，交配期间指定专人进行巡散对工作，对不交配蛾和散对及时拾除并计数，计算冷藏后的交配能力，散对雌蛾不参加产卵试验，待交配时间达4 h后，将未散对雌蛾拆对产卵（产卵环境温度25～26 ℃，相对湿度75%左右），每个重复选用56蛾进行产卵试验，采取单蛾圈方式制种，投蛾20 h后袋蛾收种，按照桑蚕一代杂交种繁育技术规程[18]将蚕种保护呈固有色后[19]，调查各重复小区的单蛾产卵数、良卵数、良卵率、不良卵数、不良卵率等。数据采用Excel2003软件和DPS数据处理系统进行统计分析。根据各品种雌蛾在10 ℃冷藏后的耐冷藏性、交配能力、单蛾产卵量、单蛾良卵数、良卵率、不良卵率等综合指标，筛选出各个品种原蚕雌蛾的适宜冷藏时间。

2 结果与分析

2.1 10 ℃冷藏对桑蚕雌蛾交配性能的影响

从表1可以看出，桑蚕雌蛾在10 ℃条件下进行冷藏，其交配性能因蚕品种、品系不同而有差异。

参试的6个原蚕品种雌蛾中，贵蚕1号原蚕827、826在冷藏时间达72 h后，交配能力依然很强，不交配蛾比例仅在0.3%以内；含多化性血统的两广二号原蚕芙·9、湘·7在冷藏72 h后，不交配蛾比例在1.3%以内，交配能力仍然较强；从洞庭×碧波2原蚕的交配性能看，洞庭原蚕在冷藏72 h内，交配能力依然很强，不交配蛾比例在0.3%以内，碧波原蚕冷藏时间超过48 h后，交配能力有所下降，不交配蛾比例达3.3%左右，冷藏时间达96 h后不交配蛾比例超过8.7%。从交配能力看，在10 ℃温度条件下冷藏桑蚕雌蛾，参试的6个原蚕品种的交配能力排序为：826>827>洞庭>湘·7>芙·9>碧波。冷藏时间在72 h内，交配3 h后，826、827等原蚕基本没有散对发生，而芙·9、洞庭、湘·7、碧波等原蚕的散对率分别达到2.0%，2.0%，6.0%和8.0%。

2.2 10 ℃冷藏不同时间对桑蚕雌蛾耐冷藏性的影响

从表2可以看出，在10 ℃温度及75%相对湿度条件下冷藏桑蚕雌蛾，桑蚕雌蛾的耐冷藏性与原蚕品种有关，各品种间存在明显的差异，其中827品种雌蛾冷藏48 h后，未交配自行产卵的雌蛾比例达到2.0%，冷藏72 h和96 h后，未交自产卵雌蛾比例分别达到15.0%和25.0%；芙·9和洞庭原蚕雌蛾冷藏24 h后，未交自产卵的雌蛾比例分别达到3.0%和2.0%，冷藏48 h后，自产卵的雌蛾比例均达到了5.0%，由此可以判断，中系原蚕雌蛾在10 ℃温度条件下进行冷藏，冷藏时间在24 h内较为合适，超过48 h后，蚕卵的损失量将会大大提高。而826、湘·7、碧波等品种的原蚕雌蛾在冷藏72 h后均没有未交自产卵蛾发生，冷藏时间达96 h后，自产卵的雌蛾比例也在3.0%以内，说明日系原蚕雌蛾在10 ℃温度和75%相对湿度条件下较耐冷藏。

2.3 10 ℃冷藏对桑蚕雌蛾单蛾产卵数、良卵数和不良卵数的影响

（1）原蚕827。从表3可以看出，827原蚕单蛾产卵数、单蛾良卵数均以冷藏24 h为最高，分别是611.5粒和605.2粒，以冷藏96 h最低，分别为554.6粒和547.1粒，通过方差分析和F测验，F单蛾产卵数=100.87>F0.01（4，10）=5.99，F单蛾良卵数=85.75>F0.01（4，10）=5.99，采用Duncan，s新复极差法进行多重比较，24 h、0 h与48 h、72 h、96 h之间，48 h、72 h与96 h之间存在极显著差异；48 h与72 h之间存在显著差异；0 h与24 h之间差异不显著。

不受精卵数以0 h最低（2.0粒），96 h最高（5.6粒），死卵数以96 h最低（1.9粒），0 h最高（4.5粒），其中F不受精卵数=1.84

（2）原蚕826。826原蚕单蛾产卵数以冷藏24 h最高，为527.4粒，以0 h处理区最低，为522.7粒，单蛾良卵数以冷藏48 h最高，为520.1粒，以0 h处理区最低，为510.6粒，不受精卵数以冷藏24 h最低，为2.0粒，以冷藏72 h最高，为3.2粒，通过方差分析和F测验，F单蛾产卵数=0.60<1，F单蛾良卵数=3.28F0.01（4，10）=5.99，进行多重比较，0 h与48 h、96 h之间差异极显著，0 h与24 h、72 h之间，24 h、72 h与96 h之间差异显著，其余各处理间差异不显著（表3）。所以，从产卵成绩看，在10 ℃温度条件下，826原蚕雌蛾的冷藏时间在96 h范围内均可选用。

（3）原蚕芙·9。从表3看出，芙·9原蚕单蛾产卵数以冷藏24 h最高（459.3粒），冷藏72 h最低（408.3粒），经F测验，F单蛾产卵数=39.50>F0.01（4，10）=5.99，多重比较发现，24 h与48 h、72 h、96 h之间，0 h、48 h与72 h、96 h之间，存在极显著差异，24 h与0 h之间存在显著差异，其它各处理间差异不显著；单蛾良卵数以冷藏24 h最高，为456.9粒，冷藏96 h最低，为403.7粒，F单蛾良卵数=47.83>F0.01（4，10）=5.99，24 h与0 h、48 h、72 h、96 h之间，0 h、48 h与72 h、96 h之间，存在极显著差异，其它各处理间差异不显著。不受精卵数各处理间差异不显著；死卵数以0 h最高（10.0粒），72 h最低（1.0粒），F死卵数=49.84>F0.01（4，10）=5.99，其中0 h与24 h、48 h、72 h、96 h之间差异极显著，其它各处理间差异不显著。从芙·9原蚕的产卵综合成绩看，该品种雌蛾在10 ℃温度条件下冷藏时间在24 h以内适用。

（4）原蚕湘·7。从表3可以看出，湘·7原蚕雌蛾的单蛾产卵数和单蛾良卵数均以96 h处理区最高，分别为496.7粒和491.3粒，0 h处理区最低，分别为476.3粒和470.8粒，2项指标均是96 h、72 h与0 h之间存在极显著差异，48 h、24 h与0 h之间存在显著差异，其余各处理间差异不显著；该品种不受精卵数各处理间均不存在显著差异；死卵数以0 h处理区最高（3.6粒），以24 h、48 h、72 h处理区最低，均为1.7粒，其中0 h与24 h、48 h、72 h之间存在极显著差异，其它各处理间不存在显著差异。所以，从湘·7原蚕的产卵综合成绩看，该品种雌蛾在10 ℃温度条件下的适宜冷藏时间为96 h以内。

（5）原蚕洞庭。从表3看出，洞庭原蚕的单蛾产卵数和单蛾良卵数均以24 h处理区最高，分别为497.0粒和488.1粒，以96 h处理区最低，分别是437.3粒和425.3粒，通过方差分析和F测验，F单蛾产卵数=109.22>F0.01（4，10）=5.99，F单蛾良卵数=109.65>F0.01（4，10）=5.99，经多重比较，0 h、24 h与48 h、72 h、96 h之间，48 h与72 h、96 h之间，72 h与96 h之间存在显著以上差异，0 h与24 h之间差异不显著。不受精卵数以冷藏72 h最高（9.9粒），0 h最低（1.6粒），F不受精卵数=10.69>F0.01（4，10）=5.99，进行多重比较，72 h与48 h、24 h、0 h之间，96 h与0 h之间存在极显著差异，96 h与24 h之间存在显著差异，其它各处理间差异不显著；死卵数以冷藏24 h最高（5.3粒），0 h最低（2.9粒），但各处理之间没有显著差异。因此，从洞庭原蚕的产卵综合成绩看，该品种雌蛾在10 ℃温度条件下冷藏时间在24 h以内适用。

（6）原蚕碧波。从表3可以看出，碧波原蚕单蛾产卵数以冷藏24 h最高（536.5粒），冷藏72 h最低（484.4粒），单蛾良卵数以冷藏24 h最高（528.2粒），96 h最低（471.0粒），通过方差分析和F测验，F单蛾产卵数=42.00>F0.01（4，10）=5.99，F单蛾良卵数=57.38>F0.01（4，10）=5.99，经多重比较，2项指标均为24 h与0 h、48 h、72 h、96 h之间，0 h、48 h与72 h、96 h之间存在显著以上差异，其余各处理间差异不显著。不受精卵数、死卵数均是96 h最高，分别为6.3粒和8.1粒，但不受精卵数、死卵数2项指标各处理之间不存在显著差异。因此，从碧波原蚕的产卵成绩看，该品种雌蛾在10 ℃温度条件下的适用冷藏时间在48 h以内。

2.4 10 ℃冷藏对桑蚕雌蛾产卵质量的影响

（1）对良卵率的影响。从图1可以看出，各品种原蚕雌蛾经10 ℃不同时间冷藏后，良卵率有一定差异。贵蚕1号原蚕827良卵率以24 h处理区最高（98.97%），96 h处理区最低（98.65%），在96 h范围内，各冷藏时间的良卵率没有明显差异；826原蚕雌蛾冷藏96 h良卵率最高（98.88%），冷藏0 h最低（97.68%），在96 h范围内，良卵率随冷藏时间的延长呈逐渐增加趋势。两广二号原蚕芙·9良卵率最高为72 h处理区（99.54%），最低为0 h处理区（97.48%），结果表明，在96 h范围内，芙·9原蚕经冷藏处理后的良卵率均达到99.0%左右，明显高于不冷藏处理区；湘·7原蚕雌蛾经冷藏后的良卵率均约高于不冷藏处理区（0 h），最高为48 h（99.32%），最低为0 h（98.85%），说明在96 h范围内，10 ℃冷藏对湘·7品种的良卵率没有不良影响。洞庭原蚕的良卵率以不冷藏处理区（0 h）最高，为99.08%，72 h处理区最低，为96.91%，在96 h范围内，该品种良卵率随冷藏时间的延长呈逐渐下降趋势；碧波原蚕良卵率在冷藏72 h内，差异不明显，达到96 h后，良卵率明显降低。

（2）对不受精卵率的影响。从图2可以看出，在10 ℃温度条件下冷藏桑蚕雌蛾，其产卵不受精卵率因品种不同而有差异。冷藏时间在96 h范围内，贵蚕1号827原蚕的不受精卵率随冷藏时间的延长呈逐渐增加趋势，最低为0 h（0.33%），最高为96 h（1.01%）；826原蚕的不受精卵率各处理区差异不明显，以冷藏24 h最低（0.38%），72 h最高（0.61%）。两广二号芙·9原蚕的不受精卵率与冷藏时间没有明显的相关性，0～72 h均在0.30%以内，超过96 h后有所上升；湘·7原蚕的不受精卵率各处理之间差异不明显，最低为48 h（0.33%），最高为72 h（0.57%）。洞庭原蚕的不受精卵率随冷藏时间的延长呈逐渐增加趋势，最低为0 h（0.33%），最高为72 h（2.20%），与冷藏时间有明显的相关性；碧波原蚕的不受精卵率与冷藏时间没有明显的相关性，最低为24 h（0.65%），最高为96 h（1.30%）。

（3）对死卵率的影响。从图3可以看出，在10 ℃温度条件下、96 h范围内冷藏桑蚕雌蛾，贵蚕1号827原蚕的死卵率随冷藏时间的延长呈逐渐下降趋势，最高为0 h（0.73%），最低为96 h（0.34%），但相关性不明显；826原蚕的死卵率与冷藏时间有明显的相关性，冷藏时间越长，死卵率逐渐降低，最高为0 h（1.82%），最低为96 h（0.59%）。两广二号芙·9原蚕的死卵率0 h处理区（2.25%）明显高于各冷藏区（24～96 h）；湘·7原蚕各处理区的差异不明显，但各冷藏区（24～96 h）均低于不冷藏区（0 h）。这说明10 ℃温度冷藏桑蚕雌蛾，对827、826、芙·9、湘·7等品种（品系）的死卵率无不良影响。洞庭原蚕和碧波原蚕雌蛾经10 ℃温度冷藏后，死卵率均有所上升，但与冷藏时间长短没有明显的相关性。

3 讨 论

在10 ℃温度和75%的相对湿度条件下冷藏，桑蚕雌蛾的交配性能、耐冷藏性、产卵效果因品种（品系）和冷藏时间不同存在差异。

（1）桑蚕雌蛾的交配性能有差异，从交配能力看，参试的6个原蚕品种的排序为826>827>洞庭>湘·7>芙·9>碧波。冷藏时间在72 h内，交配3 h后，826、827等原蚕基本没有散对发生，而芙·9、洞庭、湘·7、碧波等原蚕的散对率分别达到2.0%，2.0%，6.0%和8.0%。

（2）桑蚕雌蛾的耐冷藏性与原蚕品系有关，827、芙·9、洞庭原蚕雌蛾在冷藏24 h后，未交自产卵雌蛾比例分别达到1.0%，3.0%和2.0%；而826、湘·7、碧波等品种的原蚕雌蛾在冷藏72 h后均没有未交自产卵蛾发生，冷藏时间达96 h后，自产卵的雌蛾比例也在0.3%～3.0%之间。这说明在10 ℃温度和75%相对湿度条件下，中系原蚕雌蛾只适宜较短时间冷藏，而日系原蚕雌蛾可进行较长时间冷藏。

（3）产卵效果因品种和时间不同存在差异。贵蚕1号827原蚕的单蛾产卵数、单蛾良卵数和良卵率均是冷藏24 h达到最好水平；826原蚕各冷藏处理间的单蛾产卵数差异不显著、单蛾良卵数差异不显著、不受精卵数差异不显著，且良卵率以96 h处理区最高，对照区（0 h）最低。两广二号芙·9原蚕的单蛾产卵数、单蛾良卵数均是冷藏24 h达到最好水平，且与其它各处理间均达到显著以上差异，良卵率各冷藏处理区均达到99.0%左右，明显高于对照（0 h）；湘·7原蚕的单蛾产卵数和单蛾良卵数各冷藏处理区（24～96 h）均显著高于对照（0 h），以冷藏96 h最高，良卵率各冷藏区均约高于对照（0 h），最高为48 h（99.32%），在96 h范围内，10 ℃冷藏对湘·7品种的良卵率没有不良影响。洞庭原蚕的单蛾产卵数和单蛾良卵数均以24 h处理区最高，且极显著高于48～96 h处理区，良卵率是对照区最高（99.08%），72 h处理区最低（96.91%），在96 h范围内，该品种良卵率随冷藏时间的延长呈逐渐下降趋势；碧波原蚕的单蛾产卵数和单蛾良卵数以24 h处理区最高，均极显著高于其它各处理，但48 h冷藏区与对照区（0 h）差异不显著，不受精卵数和死卵数各处理间差异不显著，良卵率在冷藏72 h内，差异不明显，达到96 h后，良卵率明显降低。

（4）各品种原蚕雌蛾经10 ℃冷藏后，在出库感温过程中，多数会自行产卵。因此，在雌蛾出库前要准备好对交雄蛾，雌蛾经18 ℃中间温度15 min左右应及时投雄蛾交配。

（5）试验表明，10 ℃是冷藏日系桑蚕雌蛾的可用温度标准。例如，湘·7原蚕雌蛾经10 ℃温度冷藏一定时间后，存在蚕卵产出量增加的趋势，说明湘·7原蚕雌蛾用10 ℃温度冷藏，对提高蚕卵的产出率有促进作用。10 ℃冷藏桑蚕雌蛾，对于中系品种应慎重选用，冷藏时间以不超过24 h为宜。

4 结 论

根据各品种原蚕雌蛾在10 ℃冷藏后的耐冷藏性、交配能力、单蛾产卵量、单蛾良卵数、良卵率、不良卵率等综合指标看，在10 ℃温度、相对湿度75%条件下，中系原蚕雌蛾827、芙·9、洞庭的适宜冷藏时间为24 h；日系原蚕雌蛾826、湘·7的适宜冷藏时间为24～96 h，碧波原蚕雌蛾的适宜冷藏时间为24～48 h。

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