4种方法检测梅毒螺旋体抗体的结果分析

钱 超 穆 琪 霍俊杰 余建华

4种方法检测梅毒螺旋体抗体的结果分析

钱 超 穆 琪 霍俊杰 余建华

目的 评价酶联免疫吸附试验（TP-ELISA）和化学发光法（TP-CLIA）、梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验（TPPA）和甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）在手术和输血前梅毒螺旋体抗体检测中的应用价值，并分析不同年龄段患者梅毒螺旋体抗体阳性率。方法 用ELISA法检测7656例手术和输血前住院患者血清中的梅毒螺旋体抗体，筛查出的阳性样本再采用CLIA法、TPPA法和TRUST法进行检测；对ELISA法的检测结果（S/CO值）和CLIA的法检测结果（S/CO值）进行相关性分析；对于TPPA确诊试验阳性标本按年龄段分组，分析不同年龄段梅毒螺旋体抗体阳性率有无差异。结果 ELISA法检测出梅毒螺旋体抗体阳性标本173例，总阳性率为2.26%（173/7656）；CLIA法、TPPA法和TRUST法检测梅毒螺旋体抗体阳性符合率分别为100%（173/173）、99.42%（172/173）和29.48%（51/173）。相关性分析显示ELISA法和CLIA检测结果（S/CO值）呈显著正相关（r=0.711,P＜0.001）。梅毒螺旋体抗体阳性率随年龄增长而增高，60岁以上老年人阳性率显著高于其他人群（P＜0.05）。结论 ELISA法和CLIA法是手术和输血前梅毒螺旋体抗体筛查的可靠方法，但须行TPPA确诊试验；TRUST法不适用于梅毒螺旋体抗体的筛查，适宜疗效观察；梅毒螺旋体抗体阳性率随着年龄增长而增高，要慎重对待老年人梅毒试验阳性结果。

梅毒螺旋体；酶联免疫吸附试验；化学发光法；梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验；甲苯胺红不加热血清试验

梅毒是由梅毒螺旋体感染引起的性传播疾病，主要通过性接触和血液传播， 具有高度传染性和很强致病性，可侵犯全身脏器，造成多种器官病变，功能失常。近年来，梅毒发病率有明显上升趋势，防治工作任重道远[1]。梅毒早期临床表现复杂，易被漏诊误诊。因此，实验室检测对于梅毒的诊断治疗具有重要意义。目前，实验室诊断梅毒螺旋体感染的血清学检测方法主要有：酶联免疫吸附试验（ELISA）、化学发光法（CLIA）、明胶颗粒凝集法（TPPA）、甲苯胺红不加热血清试验（TRUST）和快速血浆反应素试验（RPR）。梅毒螺旋体抗体测定CLIA法是国内近年用于临床的梅毒血清学特异性抗体检测方法，敏感性和特异性都很高[2-3]。本文用ELISA法对7656例手术和输血前住院患者血清标本进行梅毒螺旋体抗体检测，阳性标本再采用CLIA法、TPPA法、TRUST法检测，对4种方法的检测结果进行比较和分析。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取解放军454医院2013年7月～2014年2月手术和输血前住院患者血清样本共7656例（不含复查）。男5004例（65.36%），女2652例（34.64%）；59岁以下4676例（61.08%），60岁以上2980例（38.92%）；年龄14～98岁，中位年龄51.8岁。

1.2 仪器与试剂 ADALTIS全自动酶免分析仪（意大利亚特斯公司，型号：NEXGEN Four）；科美全自动化学发光免疫分析仪（北京科美生物技术有限公司，型号：CHEMCLIN 600）；TPPA诊断试剂(日本富士瑞必欧株式会社，批号：VN30419)；ELISA诊断试剂(上海科华生物工程股份有限公司，批号：20130512)；CLIA诊断试剂(北京科美生物技术有限公司，批号：20130408)；TRUST诊断试剂(上海荣盛生物药业有限公司，批号20130522)。

1.3 方法 临床送检的7656份标本及时分离血清后，4℃保存，次日进行ELISA法检测。ELISA法检测出的阳性标本再用CLIA法、TPPA法和TRUST法进行检测。所有操作步骤都严格按照操作说明进行。ELISA法和CLIA法以S/CO值≥1判定为阳性。对阳性标本的ELISA法检测结果（S/CO值）与CLIA法检测的（S/CO值）进行相关性分析。7656例送检标本按年龄分为20岁以下、20～29岁、30～39岁、40～49岁、50～59岁、60～69岁、70～79岁、80岁以上共8组，分别统计TPPA确诊试验阳性率。

1.5 统计学方法 全部数据采用SPSS15.0统计软件包处理。计数资料用例数（n）表示，计数资料组间率（%）的比较采用χ2检验，ELISA法和CLIA法检测结果相关性采用Pearson 直线相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 7656例手术和输血前患者ELISA方法检测出阳性标本173例，总阳性率为2.26%（173/7656）。173例ELISA阳性标本其他3种检测方法结果见表1。

表1 173例ELISA阳性标本其他3种检测方法结果

2.2 ELISA法和CLIA法检测结果相关性分析 检测结果显示173例样本ELISA法测得的S/CO值=（13.02±7.14），CLIA法测得的S/CO值=（19.02±14.36），相关性分析显示二者呈显著正相关（r=0.711,P＜0.001）。

2.3 各年龄段梅毒螺旋体抗体阳性率 TPPA确诊试验阳性率统计结果显示：60岁及以上老年人梅毒螺旋体抗体阳性率为3.76%（112/2980）,60岁以下人群的阳性率1.28%（60/4676），二者差异有统计学意义（χ2=50.777，P＜0.05）。随着年龄的增长，梅毒螺旋体抗体阳性率呈逐渐增高趋势。见表2。

表2 各年龄段TPPA确诊梅毒螺旋体抗体阳性率

3 讨论

梅毒是人体感染苍白密螺旋体后引起的全身性疾病，主要通过性传播、母婴垂直传播和血液传播。住院期间手术和输血患者可通过手术器械和输血传播，为确保安全输血，减少不必要的医疗纠纷，梅毒螺旋体抗体检测已成为手术和输血前的常规感染指标检测项目之一[4]。

梅毒螺旋体侵入机体后可产生抗梅毒螺旋体抗原的特异性抗体和抗类脂抗原的非特异性抗体。目前，国内检测梅毒螺旋体抗体主要方法有ELISA法、CLIA法和TPPA法，其中TPPA法主要用于筛检阳性标本的确诊试验。EIISA法是利用基因重组梅毒螺旋体的特异性抗原TP17和TP47包被微孔板，采用双抗原夹心法检测梅毒螺旋体特异性IgM和IgG抗体。此方法可以用全自动酶免仪进行批量检测，是筛查和检测梅毒螺旋体抗体的一种良好方法。CLIA法作为国内新开发的梅毒螺旋体特异性抗体检测方法，使用多种梅毒螺旋体特异性抗原制备固相抗原，辣根过氧化物酶标记的相同蛋白作为标记抗原，与样本中的梅毒螺旋体抗体形成双抗原夹心。经洗涤后加入发光底物液，测定其发光强度，根据S/CO值判断样品中是否含有梅毒螺旋体特异性抗体[5]。该法灵敏度和特异性都很高，无携带污染现象，可在全自动化学发光仪上检测，自动化程度高，值得在临床推广。TPPA法是将梅毒Nichols株的精制菌体成分包被在人工载体明胶颗粒上，对梅毒特异性抗体检测具有高度特异性和敏感性，是目前公认的梅毒确诊试验，但结果须人工判读，不适宜进行大样本量检测，限制了其在批量标本筛查中的应用。检测非特异性类脂抗体的方法主要有TRUST法和RPR法。TRUST法用类脂质抗原制成，所测为抗类脂抗体，操作简便、费用低廉，肉眼判读。因TRUST法为非特异性梅毒螺旋体抗原抗体反应，存在一定假阳性和假阴性，许多学者认为TRUST已不再适合梅毒筛查试验。但TRUST试验滴度与病程有关，当感染者在接受治疗后或疾病处于非活动期期间是，TRUST滴度下降，而梅毒复发时则会转阳，滴度升高。因此TRUST试验在观察病程和疗效方面有重要价值[6-7]。

本实验检测结果显示，应用ELISA法检测出的梅毒螺旋体抗体总阳性率为2.26%，CLIA法和ELISA法的阳性符合率达100%。TPPA确诊试验发现1例为假阳性，假阳性率0.58%。相关性分析显示CLIA法和ELISA法的检测结果呈高度正相关。值得注意的是TRUST试验符合率仅为29.5%，和CLIA法和ELISA法检出的阳性率存在明显差异，这和文献报道较为一致[8]。分析原因，TRUST法为非特异血清学试验，在早期和晚期梅毒及梅毒治疗后患者可呈阴性反应。而ELISA法和CLIA法对各期梅毒均有较高的敏感性和特异性。且梅毒螺旋体抗体即使经过抗梅毒治疗后，仍可呈持续阳性，甚至终身存在。

本文研究发现60岁及以上老年人梅毒螺旋体抗体阳性率3.76%,远高于60岁以下人群的1.28%，且年龄越大，阳性率越高。无疑，梅毒血清学试验阳性的老年人中，有一些人确实曾经或正患梅毒，但相当一部分阳性者则没有梅毒诊断的任何依据。文献报道，与人类共生的螺旋体有很多，包括口腔螺旋体、皮肤相关的螺旋体、肠道螺旋体等，这些螺旋体可能不治病，也可能参与齿龈类、牙周病、腹泻等的发病。它们在人体中可诱导产生抗属、群或科特异性抗原交叉反应抗体，可与试剂盒中的梅毒螺旋体特异性抗原反应，从而造成假阳性[9]。因此，梅毒血清学试验不能作为感染梅毒螺旋体的绝对依据，检测结果应结合临床综合判断分析[10]。

综上所述，ELISA法合CLIA法都可成为梅毒抗体筛查的可靠方法，但须行TPPA确诊试验。而TRUST是非特异性试验，适宜用于疗效观察。老年人的梅毒螺旋体抗体阳性率增高，由于方法学的局限，可能存在一定的假阳性，应结合临床综合判断分析。

参考文献

[1] Tucker JD,Cohen MS.China’s syphilis epidemic∶epidemiology,proximate determinants of spread,and control response[J].Curr Opin Infect Dis,2011,24(1)∶50-55.

[2] 房华,吴燕芬,汪瑞忠，等.全自动化学发光免疫分析仪在梅毒螺旋体抗体检测中的临床应用[J].中国皮肤性病学杂志,2010，24(7)：671-672.

[3] 杨永泉，石玉玲，徐少珊，等.化学发光法在梅毒实验诊断中的应用价值[J].生物技术通讯，2012,23（2）∶258-259.

[4] 张德艺.患者输血前感染性指标检测结果及意义[J].河北医药，2014,36（9）∶1387-1388.

[5] 蒋郁青，谢志贤，方雯丹，等.国产试剂化学发光法检测梅毒螺旋体抗体的临床评价[J].中华试验和临床病毒学杂志，2013，27(4)：307-309.

[6] 徐龙珍，毕永春.不同梅毒血清学检测方法的联合应用评价[J].现代检验医学杂志，2009，24(3)∶111-112.

[7] 李楚潮.ELISA，RPR、Trust、TPPA四种方法检测梅毒螺旋体抗体的结果分析[J].当代医学，2010，16(20)∶9-10.

[8] 羊建，唐明霞.不同梅毒螺旋体抗体检测方法的临床应用评价[J].国际检验医学杂志，2011,32（14）：1579-1580.

[9] 徐传和，李琳，郑连荣，等.老年人梅毒抗体检测假阳性率偏高的临床分析[J].中国老年学杂志，2012,32（7）∶1495-1497.

[10] 朱守兰，邢丽华，杜华杰，等.老年患者梅毒螺旋体抗体阳性临床分析[J].武警医学，2011,22（9）：786-787.

Objective To analyze the clinical performance of sysphilis antibody detection by the enzyme-linked immunosorbent assay (TPELISA),chemiluminescent assay（CLIA）, Treponema pallidum gelatin particle agglutination test (TPPA) and toluidine red unheated serum test（TRUST） in the patient before blood transfusion and operation in hospital, and further to analyze the difference of sysphilis antibody positive rates in different age groups. Methods TP-ELISA were applied to detect TP antibody in 7656 patients before blood transfusion and operation in hospital, the positive samples were further detected by CLIA, TPPA and TRUST. And correlation analysis was performed between the results(S/CO) detected by ELISA and the results(S/CO) detected by TP-CLIA. The positive sample confirmed by TPPA were divided in different age groups, and the positive rates of different age groups were analyzed. Results 173 positive samples were screened out by TP-ELISA, the total positive rates was 2.26%（173/7656）.With the methods of CLIA, TPPA and TRUST, The positive coincidence rates were 100%（173/173）, 99.42%（172/173）and 29.48%（51/173）,respectively. There was a significant correlation between the S/CO value of TP-ELISA and that of TP-CLIA（r=0.711,P＜0.01）.The positive rate of sysphilis antibody increased with the growth of age, and the positive rate of elder people over 60 years was significantly higher than that of the other people（P＜0.05）. Conclusion TP-ELISA and TP-CLIA could be a good screening test for TP antibody detection, but TPPA confirmation test must be performed. TRUST might be not suitable for screening sysphilis antibody, but it could be beneficial for judging therapeutic effect. The positive rates of sysphilis antibody increased with the growth of age, and it is important to handle the positive results of sysphilis antibody in elder patients carefully.

Treponema pallidum; Enzyme-linked immunosorbent assay; Chemiluminescence; Treponema pallidum gelatin particle agglutination test; Toluidine red unheated serum test

doi∶10.3969/j.issn.1009-4393.2015.13.002

江苏 210002 解放军454医院检验科 （钱超 穆琪 霍俊杰余建华）