基于愈创木酚荧光减量准确测定过氧化物酶活性的新方法

赵炀等

摘 要 利用H2O2/过氧化物酶（POD）/愈创木酚（GA）反应体系的产物（470 nm）吸光度去定量POD活性是目前常用方法之一，但产物不稳定且对比色皿有吸附现象是该反应的主要缺点之一。为了解决此问题，本研究利用GA的荧光特性建立了一种能准确测定POD活性的方法。用辣根过氧化物酶（HRP）作为测试样品得到了以下优化条件：0.5 mmol/L GA，0.5 mmol/L H2O2，0.05 mol/L PBS缓冲液（pH 6.0），反应温度20℃，样品耗量20 μL；本方法的线性范围为500～60000 U/L（r=0.9993），RSD≤2.4%（n=11），检出限为385 U/L。在优化条件下，用白萝卜提取液作为测试样品，用本方法（（9714±132） U/L）与比色法（（9926±352） U/L）和循环催化流动分析法（（9608±456） U/L）进行了对比，结果表明， 3种方法相互一致性很好。endprint