穆凤扬,穆凤文, 穆凤鸣,陈志会,马宪东(亳州市永刚饮片厂有限公司,安徽 亳州 236800)
苦参杀蚊虫活性研究
穆凤扬,穆凤文, 穆凤鸣,陈志会,马宪东
(亳州市永刚饮片厂有限公司,安徽 亳州 236800)
摘 要:以苦参、苦楝、曼陀罗和白头翁为原料,研究了苦参及其组方不同提取物对按蚊幼虫和成虫的毒杀作用,发现苦参组方的乙醇提取物对成蚊的毒杀作用较好,本实验对应研发绿色家居杀虫剂具有一定的价值前景。
关键词:苦参;蚊虫;孑孓;活性
苦参(Sophora ftavescens Afit.)为豆科槐属植物。多生在山坡、沙地、草坡、灌木林中及田野附近,全国各地均有分布。苦参作为医药使用,据文字记载已有二千多年的历史。药理实验表明,苦参对痢疾杆菌、大肠杆菌、变形杆菌、金黄色葡萄球菌和乙型链球菌有明显抑制作用[1];苦参能抑制或杀灭蓝氏贾第鞭毛虫和阿米巴原虫,在体外其醇浸膏有抗滴虫作用[2]。苦参碱在治疗慢性肝炎和肝纤维化等方面已得到广泛的应用。
为进一步开发利用苦参植物资源,研制开发新型植物源性杀蚊虫药品,本研究以蚊虫为试验对象,对苦参及其组方的不同溶剂提取物杀蚊虫活性[3,4]进行测定,现报道如下。
1.1 材料
试验选择蚊虫幼虫孑孓和成虫为研究对象,试验材料为苦参根、苦楝、白头翁和曼陀罗:中药材采购与亳州中药材交易市场,经亳州职业技术学院刘耀武副教授鉴定,60℃烘干,粉碎过30目筛,低温条件下保存备用。
1.2 试验方法
(1)药材提取。称取上述苦参两份,每份10 g,分别用100 mL蒸馏水和100 mL乙醇室温提取24 h,除去药渣得上清液,备用;苦楝、白头翁和曼陀罗各10 g,分别用100 mL 蒸馏水和100 mL乙醇室温提取24 h,除去药渣得上清液,备用。
(2)供试蚊虫。选取按蚊幼虫孑孓(2日龄,体长2-3 mm)21组,每组10只放置于20 mL培养液中备用;选取按蚊成虫10组,每组10只放置于封闭的三角烧瓶中,备用。
(3)室内毒力测定。每种供试提取物设4~5 个剂量,每次处理按蚊成、幼虫各10 只,4 次重复,试验均以对应浓度的乙醇溶液为对照。以孑孓在施药后的死亡时间为参数,测定提取物对按蚊幼虫孑孓的毒力;以按蚊成虫在不同浓度乙醇提取夜中的游泳时间为参数,测定提取物对按蚊成虫的毒力。
(4)结果计算。总死亡时间表示在试验过程中实验组试按蚊的死亡情况,它反映了含苦参样品对按蚊总的毒杀情况,但它不能排除试验过程中的误差,即在试验过程中由于其他因素引起按蚊的死亡情况,采用校正死亡时间表示的试验结果可以排除由于其它因素造成的试验误差,校正死亡时间按下公式计算。
校正死亡时间 = 实验组死亡时间/(1-1/对照组死亡时间)
2.1 苦参毒杀孑孓效果测定结果
取4组含10只孑孓的20 mL培养液,分别加入苦参水提物2 mL、4 mL、10 mL和20 mL,第五组用滤网取10只孑孓放置于20 mL水提物中。观察孑孓在含苦参提取物中的游泳时间,以每组孑孓死亡5只(死亡率=50%)的时间为参数记为死亡时间,时间单位为分钟,以孑孓在水中的生存时间为空白组,空白组死亡时间为无限大。由此看出,苦参水提物对孑孓具有较强的毒杀活性,且水提物浓度越大,其对孑孓的毒杀作用越强,在未经稀释的水提物中孑孓死亡时间为5.0 min,苦参水提物对孑孓的毒力如下。
第一组:体积比浓度10:1 10只 死亡时间41分钟 校正死亡时间41分钟
第二组:体积比浓度5:1 10只 死亡时间34分钟 校正死亡时间34分钟
第三组:体积比浓度2:1 10只 死亡时间28分钟 校正死亡时间28分钟
第四组:体积比浓度1:1 10只 死亡时间9分钟 校正死亡时间9分钟
第五组:体积比浓度0:1 10只 死亡时间5分钟 校正死亡时间5分钟
试验组取4组含10只孑孓的20mL培养液,分别加入苦参乙醇提物2mL、4mL、10mL和20mL,第五组用滤网取10只孑孓放置于20mL水提物中。观察孑孓在含苦参提取物中的游泳时间,以孑孓死亡50%的时间为参数记为死亡时间,时间单位为分钟;对照组分别以对应浓度的乙醇溶液做空白试验,观察孑孓的死亡时间。不同浓度的乙醇对孑孓有一定的毒杀作用,不同浓度苦参乙醇提取物对孑孓的毒杀作用强于相应的苦参水提物对孑孓的毒杀作用,在未经稀释的乙醇提取物中孑孓死亡时间为3.0 min。
2.2 苦参组方毒杀孑孓效果测定结果
试验组取4组含10只孑孓的20 mL培养液,分别加入苦楝乙醇提物2mL、4mL、10mL和20mL,第五组用滤网取10只孑孓放置于20mL水提物中。观察孑孓在含苦楝提取物中的游泳时间,以孑孓死亡50%的时间为参数记为死亡时间,时间单位为分钟;对照组分别以对应浓度的乙醇做空白试验,观察孑孓的死亡时间。
取苦参、苦楝、曼陀罗和白头翁乙醇提取液各25 mL,混合均匀,备用;试验组取4组含10只孑孓的20mL培养液,分别加入上述提取液化合物2mL、4 mL、10 mL和20 mL,第五组用滤网取10只孑孓放置于20 mL提取液化合物中。观察孑孓在含提取物中的游泳时间,以孑孓死亡50%的时间为参数记为死亡时间,时间单位为分钟;对照组分别以对应浓度的乙醇做空白试验,观察孑孓的死亡时间。
苦参、苦楝、曼陀罗和白头翁乙醇提取液组方对孑孓的毒杀作用明显强于苦参或苦楝乙醇提取液对孑孓的毒杀作用,在较低的乙醇浓度和提取物浓度下,孑孓的死亡时间明显缩短,组方提取物稀释一倍,孑孓的死亡时间为5.0 min,在未经稀释的乙醇提取物中孑孓死亡时间为2.0 min,苦楝水提物对孑孓的毒力见表1。
表1 苦参、苦楝、曼陀罗和白头翁乙醇提取.液对幼虫的毒杀
对于虫龄(体长)不同的孑孓个体来说,其个体间的抗药性和耐药性具有一定的差异,虫龄较大的孑孓死亡时间偏长,虫龄较小的孑孓死亡时间偏短(没有考虑孑孓性别的影响)。
2.3 苦参组方毒杀按蚊成虫效果测定结果
试验组取4组含10只按蚊成虫,分别加入苦参乙醇提取物2 mL、4 mL、10 mL和20 mL,第五组按蚊成虫放置于20 mL乙醇提取物中。观察按蚊成虫在含苦参提取物中的游泳时间,以按蚊成虫死亡50%的时间为参数记为死亡时间,时间单位为分钟;对照组分别以对应浓度的乙醇做空白试验,观察孑孓的死亡时间(表2)。
表2 苦参乙醇提取液对按蚊成虫的毒杀
苦参、苦楝、曼陀罗和白头翁提取液各一份混合均匀后,通过该混合液对按蚊成虫的毒杀作用研究,结果发现苦参组方乙醇提取液稀释到含乙醇25%时(提取物的浓度同时降低)对按蚊成虫起到速杀作用。
植物中含有对有害生物具有很高活性的物质,其作用方式和作用机制亦不同于一般的化学合成农药,而且对环境安全。本研究表明,苦参组方具有较强的毒杀按蚊幼虫和成虫,可以克服化学杀虫剂气味浓重和不适的缺陷;对进一步开发无公害,家居型杀虫剂具有较强的指导价值。
参考文献:
[1]赵玉英,张如意.苦参化学成分研究概况[J].天然产物研究与开发,1991,3(03):93.
[2]牛奎之.苦参的药理和临床应用[J].中国中西医结合杂志,1995,15(11):698.
[3]李贵明,周琳.苦参•印楝素微乳剂最佳配比与杀虫效果研究[J].江苏农业科学,2011,6,203.
[4]郑方强,刘忠德,裴翠花.苦参总生物碱提取工艺优化及杀蚜虫活性研究[J].2008,1,43.
项目基金:2013安徽省质量工程项目—省级药学特色专业(2013jxtd067);2014安徽省质量工程项目-药品质量检测技术省级特色专业(2014tszy055)。
作者简介:穆凤扬(1986-),男,回族,安徽亳州人,工程师,研究方向:中药质量管理与控制。