奥硝唑氯化钠注射液的含量测定方法研究

杨蓉，蔡状

1哈尔滨誉衡药业股份有限公司；2北京科信必成医药科技发展有限公司哈尔滨分公司

奥硝唑氯化钠注射液的含量测定方法研究

杨蓉1，蔡状2

1哈尔滨誉衡药业股份有限公司；2北京科信必成医药科技发展有限公司哈尔滨分公司

目的：建立奥硝唑氯化钠注射液中奥硝唑的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法，以318 nm为检测波长，以甲醇-水（20：80）为流动相，柱温为30℃，流速为1ml/min。结果：奥硝唑在20～280μg/ml的范围内线性关系良好，平均回收率为99.97%，样品溶液在24h内稳定，且空白辅料不干扰本品的含量测定。结论：本法操作快速、准确，可作为该制剂的含量测定方法。

奥硝唑；HPLC；含量测定

1 仪器与试药

Agilent 1200；AB135-S梅特勒-托利多电子天平。奥硝唑对照品（中国食品药品检定研究院）；奥硝唑氯化钠注射液（自制，批号：141201、141202、141203）；甲醇（色谱纯）；超纯水。

2 方法及结果

2.1 色谱条件色谱柱：艾杰尔Venusil MP C18（250mm× 4.6mm，5μm）；流动相甲醇-水（20：80）；检测波长为318 nm；流速1 ml/min；柱温30℃；进样量20 μL。

2.2 样品溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备取奥硝唑对照品适量，精密称定，加流动性溶解并定量稀释制成每1ml中含0.1mg的溶液。

2.2.2 供试品溶液的制备精密量取本品1ml（约相当于奥硝唑5mg），置50ml量瓶中，加流动相稀释至刻度，作为供试品溶液。

2.2.3 空白辅料溶液的制备按处方比例取不含奥硝唑的其他成分，照“2.2.2”项下方法制成空白溶液。

2.3 含量测定波长选择试验精密称取奥硝唑对照品适量，用流动相溶解并稀释制成约20μg/ml的溶液。取20μL注入液相色谱仪，在200～400nm波长范围内对其进行紫外扫描。结果奥硝唑在318nm处有最大吸收，确定测定波长为318nm。

2.4 专属性试验精密量取对照品溶液、供试品溶液和空白辅料溶液各20μL注入液相色谱仪，照含量测定方法测定，结果表明空白辅料中在与奥硝唑对照品保留时间相应的位置无色谱峰，不干扰主峰的测定，方法专属性良好。

2.5 耐用性试验在“2.1”项下的色谱条件基础上，柱温改变（± 5℃）、流速相对值变化±20%、流动性pH变化±0.2、检测波长改变± 2nm、改变不同批号的艾杰尔Venusil MP C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱。结果表明，测量条件微小变动时，试验结果符合要求，各条件下的含量数据的相对标准偏差为0.98%，不大于2.0%。

2.6 方法精密度试验取样品按“2.2.2”项下方法平行制备6份供试品溶液，照含量测定方法测定，试验结果表明平均含量为100.27%，RSD%为0.71%，方法精密度良好。

2.7 系统适用性重复性精密量取对照品溶液20μL，连续进样6次，记录色谱图。结果峰面积平均值为223096，RSD%为0.59%，仪器重复性良好。

2.8 定量限取“2.2.1”项下的对照品溶液适量，逐步稀释至信噪比约为10：1，取稀释的溶液注入液相色谱仪，记录色谱图，通过游标卡尺测量可知此时峰高为5.36nm，基线噪音为0.46nm，经计算信噪比为11.66，定量限为0.0426mg/ml。

2.9 线性试验精密称取奥硝唑对照品100mg，置100ml量瓶中，加流动性溶解，稀释至刻度，得1mg/ml溶液，分别量取上述溶液适量，得每ml含奥硝唑20、60、100、160、240、280μg的流动相溶液。取20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，结果线性方程为A= 548617C-1077.3，γ=0.9999，其响应因子的RSD为0.54%，符合线性要求。Y轴截距为1077.3远小于100%响应值的2%（4367.39）。

2.10 准确度试验设计3个不同浓度（即80%、100%、120%），每个浓度制备3份供试品溶液，按含量测定方法进行测定。对照品溶液配制：精密称取奥硝唑对照品100mg，置100ml量瓶中，加流动性溶解，稀释至刻度，得1mg/ml溶液。供试品溶液配制：取50ml量瓶9个，分别加入约相当于奥硝唑5mg时的空白辅料量，分别标号1,2,3,4,5,6,7,8,9。其中1,2,3号量瓶加入奥硝唑对照品约4mg，4,5,6号量瓶加入奥硝唑对照品约5mg，7,8,9号量瓶加入奥硝唑对照品约6mg。精密量取上述各供试品20μL注入液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计算奥硝唑的回收率、平均回收率及相对标准偏差。结果含量测定方法准确度回收率为99.97%，RSD为0.71%。方法准确可行。

2.11 样品溶液稳定性试验取“2.2.2”项下供试品溶液，分别于0、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24h进样，记录色谱图，按外标法以峰面积计算奥硝唑含量，计算相对标准偏差。结果供试品在24h放置过程中，奥硝唑平均含量为99.15%，含量的RSD为1.02%，因此供试品溶液在24h内稳定性良好。

2.12 三批样品含量测定三批样品含量结果分别为99.98%、100.02%和100.24%，符合质量标准规定要求。

3 讨论

奥硝唑氯化钠注射液含量测定方法学验证实验结果表明，用HPLC法测定奥硝唑氯化钠注射液中奥硝唑的含量具有专属性强、重复性好、简便、快速、准确等特点，较紫外分光光度法更加先进，结果更准确，因此本法可用于该制剂的质量控制。

[1]李全斌，乔明艳.国内奥硝唑医院制剂的开发及临床应用[J].海峡药学，2005，18（5）：135-137.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[Z].北京：中国医药科技出版社2010.附录194-195.

杨蓉（1988-），女，哈尔滨誉衡药业股份有限公司，黑龙江省哈尔滨市，本科，药师，研究方向：药物分析。

蔡状（1988-），男，北京科信必成医药科技发展有限公司哈尔滨分公司，黑龙江省哈尔滨市，本科，药师，研究方向：药物制剂。