结核感染T细胞斑点试验在HIV/AIDS合并结核病诊断中的应用

邹丹凤，肖和平，尹洪云



·临床研究·

结核感染T细胞斑点试验在HIV/AIDS合并结核病诊断中的应用

邹丹凤，肖和平，尹洪云

(同济大学附属肺科医院结核病临床研究中心，上海 200433)

目的 探讨结核感染T细胞斑点试验(T-SPOT.TB)检测在HIV/AIDS合并结核病诊断中的应用价值。方法 选取HIV阳性结核病患者44例、同期住院的HIV阴性结核病患者42例和HIV阳性非结核病患者28例。对3组患者的T-SPOT.TB、血结核抗体试验及外周血CD4+T细胞绝对计数等结果进行回顾性分析。结果 T-SPOT.TB对HIV阳性患者诊断结核病的灵敏度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为81.82%、85.71%、90.00%、75.00%，其中灵敏度、阳性预测值与阴性预测值明显高于结核抗体检查，差异有统计学意义(P<0.01)。HIV阳性结核病组T-SPOT.TB灵敏度(81.82%)与HIV阴性结核病组T-SPOT.TB灵敏度(83.33%)比较，差异无统计学意义(P=0.54)，但HIV阳性结核病组结核抗体检查的灵敏度(25.00%)明显低于HIV阴性结核病组(57.14%)(P<0.01)。HIV阳性结核病组中，T-SPOT.TB在菌阳肺结核、菌阴肺结核、肺外结核3种不同类型结核病患者中的灵敏度分别是71.43%、85.71%、88.89%，三者之间差异无统计学意义(P=0.586)。T-SPOT.TB在CD4+T淋巴细胞≤200个/μl的HIV合并结核病患者中的灵敏度为62.50%，低于CD4+T淋巴细胞>200个/μl组(92.86%)，差异有统计学意义(P=0.019)。结论 T-SPOT.TB灵敏度和特异度较高，对HIV/AIDS合并结核病具有较大的辅助诊断价值。CD4+T淋巴细胞的数量对T-SPOT.TB灵敏度有一定影响。

结核感染T细胞斑点试验；人类免疫缺陷病毒；结核

结核分枝杆菌感染是HIV感染患者最常见的机会性感染之一，也是AIDS患者死亡的重要原因。2014年全球结核病报告显示，2013年全球900万新发结核病患者中，有110万例同时合并有HIV感染，HIV阳性者的结核病发病率较HIV阴性者高26～30倍。T-SPOT.TB是一种γ干扰素释放试验，它通过ELISPOT检测外周血单个核细胞受到结核分枝杆菌特异抗原(EAST-6、CFP-10)刺激后,分泌γ-干扰素的特异效应T淋巴细胞数量来判断是否存在结核分枝杆菌特异性的细胞免疫反应，对诊断结核分枝杆菌感染具有较高的敏感性和特异性[1]。本研究探讨T-SPOT.TB检测在HIV/AIDS合并结核病诊断中的应用价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取同济大学附属肺科医院2012年1月至2014年6月期间收治的明确HIV感染(经我院HIV抗体初筛阳性，并经上海市杨浦区疾病控制中心确认)、同时确诊结核病的患者44例作为HIV阳性结核病组(其中菌阳肺结核14例，菌阴肺结核21例，肺外结核9例；该组患者均为初治)，同期住院的HIV阴性、年龄相当、符合结核病诊断的患者42例作为HIV阴性结核病组，同期住院的HIV阳性、病变排除结核的患者28例作为HIV阳性非结核病组(其中卡氏肺孢子菌病20例、肺部肿瘤4例，细菌性肺炎3例，支气管扩张1例)(该组患者均随访半年以上，确认期间未发生结核病)。3组患者的年龄、性别构成比差异无统计学意义(P>0.05)，见表1。3组患者入院前均无HIV感染外的免疫系统疾病，无糖尿病和长期使用激素和免疫抑制剂病史。

表1 3组患者年龄、性别比较Tab.1 Comparison of age and gender among three groups

1.2 资料收集

收集3组患者基础资料、诊断及影像学及实验室各项检查结果，对血T-SPOT.TB、血结核抗体、血常规、血流式细胞(主要是外周血CD4+T细胞绝对计数)等检查结果进行回顾性分析。

1.3 试剂、仪器和检测方法

T-SPOT.TB试剂盒由英国Oxford Immunotec公司生产，按照产品使用说明，由获得资质的专业技术人员检测。根据抗原A或(和)抗原B孔的反应判断结果：(1) 无反应性对照孔点数为0～5，有反应性样本应为抗原A或抗原B斑点数-无反应性对照孔斑点数≥6，判断为阳性；(2) 无反应性对照孔斑点数≥6，有反应性样本应为(抗原A或抗原B斑点数)≥2倍(无反应性对照孔斑点数)，判断为阳性。

血结核抗体：采用斑点免疫金胶体渗滤法，相对分子质量38000IgG抗体测定，使用上海奥普生物医药公司的诊断试剂盒。

1.4 统计学处理

应用SPSS 19.0软件，各组间的均值比较采用方差分析，各组间率的比较采用χ2检验。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 HIV阳性结核病组与HIV阳性非结核病组T-SPOT.TB与结核抗体检测结果比较

T-SPOT.TB对HIV阳性患者诊断结核病的灵敏度、特异度、阳性预测值与阴性预测值分别是81.82%、85.71%、90.00%和75.00%，而结核抗体的灵敏度、特异度、阳性预测值与阴性预测值分别是25.00%、89.28%、78.57%与43.10%，其中，T-SPOT.TB的灵敏度、阳性预测值与阴性预测值明显高于结核抗体检查(P<0.05)，见表2。

表2 HIV阳性结核病组与HIV阳性非结核病组T-SPOT.TB与结核抗体检测结果比较Tab.2 Comparison of T-SPOT.TB and TB-Ab between tuberculosis and non-tuberculosis in HIV patients

2.2 HIV阳性结核病组与HIV阴性结核病组T-SPOT.TB与结核抗体检测结果比较

44例HIV阳性结核病组，T-SPOT.TB灵敏度为81.82%，42例HIV阴性结核病组，T-SPOT.TB灵敏度为83.33%，差异无统计学意义(P=0.540)。在结核抗体检查中，两组的灵敏度分别是25.00%与57.14%，HIV阳性结核病组结核抗体的灵敏度明显低于HIV阴性结核病组(P<0.01)，见表3。

表3 HIV阳性结核病组与HIV阴性结核病组T-SPOT.TB与结核抗体检测结果比较Tab.3 Comparison of T-SPOT.TB and TB-Ab between HIV and non-HIV tuberculosis patients

2.3 HIV阳性结核病组中不同类别结核病的T-SPOT.TB灵敏度比较

44例HIV阳性结核病组患者中，菌阳肺结核14例，菌阴肺结核21例，肺外结核9例，T-SPOT.TB在3种不同类型结核病患者中的灵敏度分别是71.43%、85.71%和88.89%，差异无统计学意义(P>0.05)，见表4。

表4 HIV阳性结核病组中不同类别结核病的T-SPOT.TB灵敏度比较Tab.4 Comparison of T-SPOT.TB sensitivity T-SPOT.TB among different types of tuberculosis in HIV patients

2.4 HIV阳性结核病组患者在不同免疫状态下T-SPOT.TB灵敏度比较

因国内外研究多以CD4+T淋巴细胞计数<200个/μl作为AIDS晚期细胞免疫严重受损、易合并各种感染的判断标准。故本研究把44例HIV阳性结核病组患者按CD4+T淋巴细胞计数分成两组。CD4+T淋巴细胞>200个/μl有28例，其中T-SPOT.TB阳性26例，灵敏度为92.86%；CD4+T淋巴细胞≤200个/μl有16例，其中T-SPOT.TB阳性10例，灵敏度为62.50%，CD4+T淋巴细胞>200个/μl组灵敏度高于CD4+T淋巴细胞≤200个/μl组，差异有统计学意义(P=0.019)。

3 讨 论

当结核分枝杆菌、HIV双重感染时，结核病的临床表现、影像学表现往往不典型，痰涂片抗酸染色检出率低，造成临床诊断困难。以往依靠PPD试验、结核抗体检查等协助结核病诊断。但PPD试验有一定局限性，PPD的某些成分与卡介苗和大多数非结核分枝杆菌有交叉抗原，诊断特异性较低；由于HIV患者的免疫缺陷(由于CD4+T淋巴细胞减少)，灵敏度不足，假阴性率高[2]；操作受人为因素影响大。研究[3]显示，属于体液免疫检测结核抗体检查的敏感性和特异性也不高，诊断价值有限。T-SPOT.TB是结核特异性活性淋巴细胞检测方法，采用高灵敏度的ELISPOT技术测定外周血单个核细胞中能释放γ-干扰素的效应T淋巴细胞数量，可以弥补PPD的不足，在MTB感染中的诊断价值较高。Sester等[4]的研究显示，外周血T-SPOT.TB对活动性结核病诊断的灵敏度和特异度分别为81%(95%CI：0.75～0.84)和59%(95%CI：0.56～0.62)。目前T-SPOT.TB已在多个国家用于活动性结核病的辅助诊断，在我国很多医院也已开展此项检测。

本研究显示，T-SPOT.TB对HIV患者诊断结核病的灵敏度和特异度均在80%以上，其灵敏度、阳性预测值与阴性预测值均高于结核抗体检查。万荣等[5]对35名确诊HIV合并结核病患者进行了T-SPOT检查，有26例T-SPOT阳性，灵敏度为74.3%、特异度为86.7%。研究报道，在20例HIV合并结核病的患者中，T-SPOT阳性检出率为85%，结核抗体阳性检出率为35%，两者差异有统计学意义，T-SPOT检测的特异性、诊断效率分别为89.28%、87.50%，结核抗体检测的特异性、诊断效率分别为78.57%、60.41%，前者诊断效能明显高于后者。这两项研究的得出的结论与本研究结论类似，证明了T-SPOT.TB对HIV阳性患者结核病的诊断有着重要的价值。由于目前国内PPD试剂缺如，此次研究患者未行PPD检查，故本研究未对T-SPOT.TB和PPD试验的诊断效能进行比较。但文献[6]报道在HIV合并结核病人群中T-SPOT.TB的敏感性和特异性高于PPD。张舒等[7]对35例确诊HIV合并结核病患者进行T-SPOT和PPD试验，T-SPOT阳性率为65.7%，PPD仅为24.2%，说明T-SPOT.TB适用于我国艾滋病合并结核病的快速诊断。

本研究发现，HIV阴性结核病组结核抗体检查灵敏度明显高于HIV阳性结核病组。结核抗体是T细胞免疫介导的体液免疫，虽然对结核病诊断有一定协助作用，但在普通结核病患者中其阳性率较特异性细胞免疫检测如PPD试验、T-SPOT.TB低。HIV阳性患者由于细胞免疫功能低下，因此结核抗体产生减少，阳性率明显下降。而T-SPOT.TB在HIV阳性结核病组和HIV阴性结核病组的灵敏度差别不大，说明T-SPOT.TB并没有受到HIV感染患者T淋巴细胞数量减少的影响。Chapman等[8]发现，ELISPOT法检测MTB特异性T淋巴细胞时，HIV阴性结核病患者检出率为100%，HIV阳性患者检出率90%。该研究表明，结核纯化蛋白衍化物PPD、ESAT-6和CFP-10均受患者免疫状况的影响，但后面两者受HIV影响小，这可能是因为T-SPOT.TB检测过程中已对单个核细胞数量进行了标准化，即在检测程序上消除了淋巴细胞数量减少对检测结果的影响。

欧阳晖等[9]的研究显示，T-SPOT.TB在肺结核组和肺外结核组均有较高的阳性检出率(HIV合并肺结核组77.41%，HIV合并肺外结核组88.46%)，其辅助诊断价值不受结核发病部位影响。本研究把HIV合并结核病患者又分成菌阳肺结核、菌阴肺结核和肺外结核，分别统计T-SPOT.TB的灵敏度，三者之间差异无统计学意义，与研究[9]结论一致，说明T-SPOT.TB对HIV合并各种类型结核病的诊断度均较高。

有学者[9]认为T-SPOT.TB结果不会受到CD4+T淋巴细胞计数水平影响，可以避免因HIV感染后细胞免疫功能受损而产生的假阴性结果。但也有研究[10]表明，γ-干扰素释放试验结果与外周血CD4+T淋巴细胞的数量有关，当机体处于严重免疫抑制状态时，T-SPOT.TB结果容易出现假阴性。从本研究所得数据可看出，在CD4+T淋巴细胞≤200个/μl人群中敏感性小于CD4+T淋巴细胞>200个/μl人群中，差异有统计学意义，说明对于HIV感染后免疫功能严重受损的患者，T-SPOT.TB对结核病辅助诊断的灵敏度下降。但多数报道认为，相对于PPD试验而言，影响度更小。

基于以上研究，T-SPOT.TB的出现为及时诊断HIV/AIDS合并结核病、控制结核病在HIV/AIDS感染人群中的传播起到了至关重要的作用。

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Clinical application of T-SPOT.TB in diagnosis of tuberculosis in patients with HIV infection

ZOUDan-feng，XIAOHe-ping，YINHong-yun

(Clinical and Research Center of Tuberculosis，Pulmonary Hospital，Tongji University，Shanghai 200433，China)

Objective To evaluate the effectiveness of T-SPOT.TB in diagnosis of tuberculosis in patients with HIV infection.Methods Forty-four patients diagnosed as pulmonary tuberculosis and HIV infection were admitted；28 HIV positive patients without tuberculosis and 42 non-HIV positive patients with tuberculosis were admitted in the same period.T-SPOT.TB，blood TB antibody test and peripheral blood CD4+T cell counts were retrospectively analyzed in three groups.Results The sensitivity，specificity，positive predictive value and negative predictive value of T-SPOT.TB test in HIV positive patients with tuberculosis were 81.82%，85.71%，90.00% and 75.00%，respectively，which were significantly higher than those of TB antibody test(P<0.01).The sensitivity of T-SPOT.TB test in HIV positive patients with tuberculosis was not significantly different from that in HIV negative patients with tuberculosis (P=0.54).The sensitivity of TB antibody in HIV positive patients with tuberculosis(25.00%) was significantly lower than that in HIV negative patients with tuberculosis(57.14%) (P<0.01).The sensitivity of T-SPOT.TB test in smear positive pulmonary tuberculosis，smear negative pulmonary tuberculosis and extra-pulmonary tuberculosis in the group of HIV positive patients with tuberculosis were 71.43%，85.71% and 88.89%，respectively(P=0.586).The sensitivity of T-SPOT.TB test in HIV positive patients with tuberculosis and CD4+T cells <200/ml was 62.5%，and that in patients in the same group but CD4+T cells >200/ml was 92.86%(P=0.019).Conclusion T-SPOT.TB is effective in diagnosis of tuberculosis in patients with HIV infection with high sensitivity and specificity，however，the number of CD4+T cells may reduce the diagnostic sensitivity to some extent.

T-SPOT；human immunodeficiency virus；tuberculosis

10.16118/j.1008-0392.2015.05.016

2014-12-18

邹丹凤(1982—)，女，主治医师，硕士.E-mail：76349908@qq.com

肖和平.E-mail：xiaoheping_sars@163.com

R 521

A

1008-0392(2015)05-0074-05