新辅助化疗对Ⅰb2－Ⅱb期宫颈癌细胞凋亡以及其预后的影响＊

陕西省妇幼保健院妇科（西安710003） 胡春艳 刘 晨 张恩娣 谭宏伟 田燕妮 贾 亮

宫颈癌作为临床发病率较高的妇科恶性肿瘤，预后状况较差，主要采用放疗、手术等方法进行治疗。但近年来在临床分期ⅠB2以上的宫颈癌患者中所采用的新辅助化疗（New adjuvant chemotherapy treatment，NACT）能明显促进肿瘤体积的缩小、预防复发与转移，并可有效提高生存率［1］。本研究对新辅助化疗标本的细胞凋亡情况进行观察，并对术后宫颈癌患者的预后状况进行分析，现报道如下。

资料和方法

1 一般资料 纳入2005年12月至2012年12月期间于本医院收治的Ⅰb2－Ⅱb期宫颈癌患者，按照术前是否给予新辅助化疗分为新辅助化疗组（A组）50例与未行新辅助化疗（B组）50例，并纳入50例因子宫多发肌瘤而进行子宫全切术治疗的患者作为对照组（C组），其宫颈组织的宫颈鳞状上皮正常。纳入标准：①术前行新辅助化疗者及其家属均签署知情同意治疗书；②宫颈癌患者均经宫颈活检病理检查后给予确诊。排除标准：①合并其他恶性肿瘤史及肝肾功能异常患者；②有化疗禁忌证。A、B、C3组患者在临床分期、病理分化程度、平均年龄及组织学类型等方面进行对比，差异均无显著性（P＞0.05）。

2 化疗方法 宫颈癌A组患者术前给予新辅助化疗法，采用紫杉醇联合顺铂化疗法：紫杉醇剂量135～175mg／m，持续静滴3h，顺铂剂量为50mg／m。在进行紫杉醇化疗前6、12h，分别使用20mg地塞米松，口服；使用顺铂化疗前24h及使用当天、使用后第1d，均给予静脉水化。化疗疗程1～2个，每次间隔3周，化疗结束后第二周，A组患者均行广泛子宫切除术加双侧盆腔淋巴结切除术加双侧附件切除术，宫颈癌B组患者术前未行新辅助化疗，而直接给予手术治疗，手术方法与A组相同。通过门诊、电话等方式进行对A、B两组宫颈癌患者进行术后随访、随访至2015年1月，记录术后1、2年的复发率与生存率。

3 细胞凋亡指标检测法与结果判定 采用免疫组织化学法、原位末端标记法（TUNEL）对 A、B、C3组患者的细胞凋亡进行检测，检测方法均按北京中山生物试剂公司提供的试剂说明书进行操作，并采用磷酸缓冲盐溶液（PBS）替代一抗作为空白对照，其中，主要试剂包括：原位末端标记试剂盒（罗氏公司）、SP系列免疫组化试剂盒、Bcl－2（100）、Bax（N－20）分别为鼠抗人单克隆抗体、兔抗人多克隆抗体）。结果判定：对3组患者的组织切片Bcl－2、Bax等表达状况进行分析，在外部相同条件下，对低倍镜下（×100）的图像进行摄取，随机选取各张切片的6个视野，对场总面积平均光密度值及5个高倍视野（×400）下的凋亡细胞数、细胞总数等进行计算，并求各张组织切片的平均值，凋亡指数（apoptosis index，AI）＝（凋亡细胞数／细胞总数）×100.00%。

4 统计学方法 采用SPSS19.0进行统计分析，多组间计量资料（¯x±s）采用F检验，两组间比较采用t检验，计数资料（%）采用χ2检验，生存率对比采用Log－rank检验法，均以α＝0.05作为检验水准。

结 果

1 3组患者细胞凋亡基因检测情况对比 A、B两组患者的Bcl－2、Bax及 AI均显著高于C组，Bcl－2／Bax均显著低于 C组，而 A 组 Bcl－2、Bcl－2／Bax均显著低于B组患者，且A组患者的AI显著高于B组患者，差异均具有显著性（P＜0.05），详见附表。

附表 3组患者细胞凋亡基因检测情况对比（¯x±s）

2 宫颈癌A、B两组患者术后1年、2年的生存率、复发率比较 A组术后1、2年的复发率显著低于B组，A组术后1、2年的生存率显著高于B组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。

讨 论

虽然宫颈癌患者的病因较明确，但其预后状况仍不容乐观，病死率一直居高不下，且宫颈癌的发病率呈逐年上升趋势，根据对Ⅰb2－Ⅱb期宫颈癌患者各年代发病率的调查研究结果表明，20世纪70年代的发病率仅为9.0%，而在90年代则上升为19.1%。目前临床上主要采用根治手术对该疾病患者进行治疗，但仅依靠手术治疗仍存在创伤大、术后并发症发生率高及预后状况不理想等问题［2］，且手术范围常涉及盆腹腔血管、肠管、膀胱等多种器官组织，在一定程度上影响了手术的整体效果［3］，尽管近年来宫颈癌根治手术不断发展，但术后并发症仍高达25%～50%［4］。

正常机体维持自身稳定需要依靠细胞凋亡，它作为基因调控机体的生理机制之一，在肿瘤发生、发展中具有重要的作用，并成为临床肿瘤探讨的热点之一。有研究［5］表明，在肿瘤组织中，细胞增殖的平衡与细胞凋亡有关。而调控细胞凋亡的相关基因较多，其中，与其关系较密切的基因主要有 Bcl－2、Bax，Bcl－2作为抗凋亡基因之一，可通过直接抗氧化、维持细胞钙稳定状态、降低线粒体释放的促凋亡蛋白质水平、抑制凋亡蛋白酶激活及抑制促凋亡调节蛋白的细胞毒作用等途径抑制细胞凋亡，而作为Bcl－2的拮抗因子，Bax主要通过与Bcl－2蛋白竞争作用靶并与之形成异源二聚合复合物，再加上本身所形成的同源二聚体，共同起到调节细胞凋亡的作用［6］。术前进行新辅助化疗已经被临床所建议，以缩小局部肿瘤、减少手术切除范围、减轻手术带来的损伤。本研究结果显示，采用新辅助化疗的 A组Bcl－2、Bcl－2／Bax均显著低于 B组患者，且 A组患者的AI显著高于B组患者，差异均具有显著性（P＜0.05），此外，A组术后1、2年的复发率显著低于B组，术后1、2年的生存率显著高于B组，说明新辅助化疗可通过降低Bcl－2／Bax，从而增加凋亡细胞，抑制肿瘤的恶化发展，再配合手术治疗，改善患者的预后状况。

综上所述，在Ⅰb2－Ⅱb期宫颈癌患者术前应用新辅助化疗，可有效促进癌细胞凋亡、改善患者预后，具有较高的临床价值。

［1］ 熊锐华，任庆，田秀荣，等.新辅助化疗在宫颈癌治疗中的临床研究［J］.肿瘤防治研究，2012，39（6）：719－721.

［2］ 唐 杰，张 晶，王 娟，等.宫颈癌ⅡB期新辅助化疗后腹腔镜下根治术40例分析［J］.实用医学杂志，2012，28（17）：2934－2935.

［3］ 王文翔，范文强，董学彩，等.小剂量紫杉醇联合顺铂周疗方案在Ⅰb2～Ⅱb期宫颈癌新辅助化疗中的应用［J］.山东医药，2012，52（30）：39－40.

［4］ 何超蔓，梁峰冰，陈曼玲，等.术前新辅助化疗治疗宫颈癌62例的疗效观察［J］.中华医学杂志，2012，92（5）：327－329.

［5］ 刘丝荪，熊洁琦，闵庆华，等.二氧化硒调控凋亡相关蛋白诱导宫颈癌细胞凋亡的影响［J］.重庆医学，2014，12（10）：1218－1220.

［6］ 叶春萍，余宁珠.Ⅰb2～Ⅱb期宫颈腺癌患者术前新辅助化疗的疗效观察［J］.现代医学，2012，40（5）：562－565.