Survivin和OPN在不同宫颈病变组织中的表达及相关研究

王艳书，鲁静，李海燕*

（1.大理学院，云南大理671000；2.保山中医药高等专科学校，云南保山678000）

Survivin和OPN在不同宫颈病变组织中的表达及相关研究

王艳书1，鲁静2，李海燕1*

（1.大理学院，云南大理671000；2.保山中医药高等专科学校，云南保山678000）

目的：探讨Survivin、OPN在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤（CIN）、宫颈鳞癌组织中的表达情况。方法：采用免疫组织化学SP法检测Survivin、OPN在10例慢性宫颈炎、20例宫颈上皮内瘤变Ⅲ期（CINⅢ）和50例宫颈鳞癌组织中的表达情况。结果：Survivin和OPN在慢性宫颈炎、CINⅢ、宫颈鳞癌中的表达阳性率均随病变严重程度逐级增强，3组比较差异均有统计学意义（P＜0.05）。Survivin的表达阳性率与宫颈鳞癌的临床分期、病理分级有关（P＜0.05），与年龄、有无淋巴结转移无关（P＞0.05）；Survivin的表达阳性率与宫颈鳞癌的临床分期、有无淋巴结转移有关（P＜0.05），与年龄、病理分级无关（P＞0.05）。结论：Sur⁃vivin+OPN的联合检测有可能作为宫颈鳞癌的早期诊断、病情监测和预后判断的指标。

Survivin；OPN；免疫组化；慢性宫颈炎；宫颈上皮内瘤；宫颈鳞癌

宫颈癌是女性生殖系统中发病率最高的恶性肿瘤，全世界每年约有50万新发子宫颈癌病例，约有23万妇女死于宫颈癌〔1〕。我国宫颈癌的发病率高居世界第二位，近年来宫颈癌的发生还有年轻化的趋势。肿瘤是一个多因素、多步骤、多阶段、连续发展的过程，与多种癌基因、抑癌基因、转移相关基因的表达、调控、细胞凋亡及血管的生长有关〔2〕。生存素（Survivin）是迄今发现最强的凋亡抑制因子，具有抑制凋亡、调节细胞分裂及促进血管生成的作用。Survivin参与了多种肿瘤的发生、发展过程。骨桥蛋白（osteopontin，OPN）是一种有多种功能的酸性分泌型钙结合磷酸化糖蛋白，在多种肿瘤的侵袭转移过程中起着促进作用〔3〕，其高表达与肿瘤进展和患者预后有关。Survivin和OPN都可以通过抑制细胞的凋亡从而在肿瘤的发生发展及生长和转移中起到重要的作用。本文通过采用免疫组织化学SP法检测Survivin、OPN在慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤（CIN）及宫颈鳞癌组织中的表达情况，旨在探讨Survivin、OPN的表达与慢性宫颈炎、CIN、宫颈鳞癌三者间的关系及二者在宫颈鳞癌发生、发展、侵袭、转移和预后判断中的作用。

1 资料与方法

1.1 资料来源从保山市人民医院病理科2009年4月至2012年1月存档的手术标本中选取临床病理资料完整，经手术切除的宫颈鳞癌标本50例，CIN标本20例（均属CINⅢ期），因子宫肌瘤手术行子宫全切标本中的慢性宫颈炎组织标本10例。50例宫颈鳞癌的患者年龄范围在28～66岁，平均年龄47岁。其中年龄≥45岁的31例，年龄＜45岁的19例，所有患者术前均未做过放化疗。

1.2 免疫组织化学检测一抗Survivin为AR0270单克隆抗体工作液，购自广州深达生物制品技术有限公司；OPN为GPP6344，多克隆抗体工作液，购自上海今迈生物科技有限公司；二抗为DD13；DAB溶液KS002加强型，阳性对照片也分别购自广州深达生物制品技术有限公司和上海今迈生物科技有限公司。采用免疫组化SP法进行染色，标本经10%中性甲醛固定，石蜡包埋，每个蜡块连续4 um切片3张，其中1张做HE染色，所有切片采用同批次试剂检测。

1.3 免疫组织化学评分Survivin和OPN的染色均以细胞浆和（或）细胞膜出现棕黄色或棕色颗粒为阳性标准。综合染色面积和染色强度进行评分。第一项，按细胞显色有无及染色深浅对强度评分：无色为0分，浅黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分；第二项，每张切片随机观察10个视野，按每高倍镜视野（×200）阳性细胞数百分比计分：阴性为0分，小于10%为1分，11%～50%为2分，51%～75%者3分，＞75%为4分。以上两项评分相乘即为阳性强度，0分为阴性（-），1～4分为弱阳性（+），5～8分为阳性（++），9～12分为强阳性（+++），以上结果均由至少两位病理科医生以双盲法观察共同确定。

1.4 统计学分析采用SPSS17.0统计分析软件对数据进行处理，统计方法采用χ2检验（根据不同数值采用χ2检验专用公式、对于样本数＜40的数值采用校正公式和对于样本数＞1且＜5的数值采用确切概率法进行计算）。对于相关性分析采用配对资料的关联性分析。

2 结果

2.1 Survivin、OPN在不同宫颈病变组织中的表达

Survivin在慢性宫颈炎、CINⅢ、宫颈鳞癌这3种不同宫颈病变组织中的阳性表达率依次为10%、35%、72%。见表1。将Survivin在以上3种不同宫颈病变组织中的阳性表达率进行两两χ2检验，结果表明，Survivin在慢性宫颈炎和CIN中的表达阳性率比较差异无统计学意义（P=0.307，P＞0.05），但Survivin在慢性宫颈炎和宫颈鳞癌中的表达阳性率比较差异有统计学意义（P=0.004，P＜0.05），Survivin在CIN和宫颈鳞癌中的表达阳性率比较差异也有统计学意义（P=0.001，P＜0.05）。见表2。

表1 Survivin在不同宫颈病变组织中的表达

表2 Survivin在不同宫颈病变组织中的阳性表达率两两比较

OPN在慢性宫颈炎、CINⅢ、宫颈鳞癌组织中的阳性表达率依次为10%、45%、62%。见表3。将OPN在以上3种不同宫颈病变组织中的阳性表达率进行两两χ2检验，结果表明，OPN在慢性宫颈炎和CIN中的表达阳性率比较差异有统计学意义（P= 0.001，P＜0.05），OPN在慢性宫颈炎和宫颈鳞癌中的表达阳性率比较差异有统计学意义（P=0.003P＜0.05），OPN在CIN和宫颈鳞癌中的表达阳性率比较差异无统计学意义（P=0.055，P＞0.05）。见表4。

，

表3 OPN在不同宫颈病变组织中的表达

表4 OPN在不同宫颈病组织中的阳性表达率两两比较

2.2 Survivin、OPN表达与临床病理特征的关系Survivin在宫颈鳞癌不同临床分期、不同病理分级组织中的表达阳性率比较均存在统计学差异，但在年龄及有无淋巴结转移组织中的表达阳性率比较差异均无统计学意义。OPN在宫颈鳞癌不同临床分期、有无淋巴结转移组织中的表达阳性率比较差异均存在统计学意义，但在年龄及不同病理分级组织中的表达阳性率比较差异均无统计学意义。见表5。采用配对资料的关联性分析方法对宫颈鳞癌组织中Survivin与OPN表达的相关性进行检验，χ2=5.702，P=0.017，P＜0.05，r=0.627，说明宫颈鳞癌组织中Survivin与OPN的表达之间呈正相关，相关程度高。

表5 宫颈鳞癌中Survivin和OPN的表达与临床病理特征的关系

3 讨论

宫颈癌的发生发展是一个渐进的过程，从宫颈的良性病变发展到上皮内瘤变（CIN）再到宫颈癌要几年到十几年的时间。宫颈癌如能早期发现并及时治疗，治愈率可达90%以上。早期发现宫颈癌前病变CIN对预防和治疗宫颈癌有重要意义。宫颈癌早期的临床表现不典型也没有特异性，现有的宫颈癌筛查方法的检出率也不是很稳定，目前也尚无可靠的无创性指标来预测宫颈癌的复发、转移及预后。在分子水平上找到一种理想的肿瘤标记物，能在宫颈癌的发病危险度预测、早期诊断及预后判断等方面发挥作用是非常必要的。

Survivin在分化成熟的组织中不表达，而选择性地在绝大多数恶性肿瘤组织中高表达〔4〕，并且Survivin的表达增高在肿瘤发展的早期就已经出现，并随着肿瘤的生长、浸润而表达逐渐增强。本研究中Survivin在慢性宫颈炎、CINⅢ、宫颈鳞癌中的阳性表达按宫颈病变的严重程度逐级增强，并且在三者中的阳性表达间的差异有统计学意义，尤其是在CINⅢ与宫颈鳞癌中的表达差异有显著统计学意义，这提示Survivin可能与宫颈鳞癌的发生发展密切相关，Survivin可能参与了宫颈癌形成过程的调节，并促进了慢性宫颈炎、CINⅢ等损伤发生恶性转化的作用，Survivin有可能成为预测宫颈癌发病危险度和宫颈癌早期诊断的指标。Survivin的表达与宫颈鳞癌的临床分期、病理分级有关，与年龄、有无淋巴结转移无关，这提示Survivin的表达可能与宫颈鳞癌的浸润和恶性程度有关，故Sur⁃vivin的检测有可能成为宫颈鳞癌病情监测的指标，但不宜作为判断宫颈鳞癌预后的独立指标。最新研究表明OPN可能成为临床上首选的肿瘤标志物。OPN与恶性肿瘤的发生发展及转移有着密切的关系，大量研究也证实肿瘤转移往往伴有OPN的表达增高，因此它被公认为肿瘤转移相关基因或转移基因〔5〕。OPN对于肿瘤的增殖过程有重要意义，OPN可以通过促进肿瘤细胞表达血管内皮生长因子从而促进肿瘤新生血管生成〔6〕，从而促进肿瘤的发生、发展。本研究中OPN在慢性宫颈炎、CINⅢ、宫颈鳞癌中的表达阳性率也随着宫颈病变的严重程度逐级递增，三者组间阳性表达率的差异有统计学意义。本次研究中，OPN在慢性宫颈炎中的表达阳性率与CINⅢ中阳性表达率及宫颈鳞癌中阳性表达率相比，差异都有统计学意义，但OPN在CINⅢ中的表达阳性率和宫颈癌中的表达阳性率相比，差异无统计学意义，这与一些研究者的结果不一致，其研究结果显示宫颈癌组与慢性宫颈炎组间OPN表达阳性率间的差异有统计学意义，而OPN表达阳性率在CIN组与慢性宫颈炎组间差异无统计学意义，这可能与本次研究病例数少及CIN病例均为CINⅢ有关。OPN的表达与宫颈鳞癌的临床分期、有无淋巴结转移有关，这一结果与郝筱诗等〔7〕的研究结果相同，这提示OPN的表达与宫颈鳞癌的浸润、病变进展程度及预后有关，故OPN的检测可能成为宫颈鳞癌病情监测和预后判断的指标。OPN的表达与宫颈鳞癌的年龄、病理分级无关，提示OPN不宜作为判断宫颈鳞癌恶性程度的独立指标。这与有关学者的研究结果〔8-9〕及其他文献报道的结果不完全一致。这可能与本次试验中样本量太少、免疫组化结果的判定标准不同有关，还可能与OPN在宫颈癌组织中的表达具有不稳定性有关。Survivin与OPN在宫颈鳞癌中的表达呈正相关。Survivin和OPN的表达都与宫颈鳞癌的临床分期有关，而在与病理分级、有无淋巴结转移的关系上二者则呈互补，所以Survivin+OPN的联合检测在一定程度上可能有望成为宫颈鳞癌早期诊断和预后判断的指标，本次研究为宫颈鳞癌早期诊断和预后判断提供了一定的理论支持，今后还应加大样本量进行更深入的研究。

〔1〕杨艳秋，段丽.德宏州人乳头瘤病毒感染与TCT检测相关性分析〔J〕.大理学院学报，2012，11（12）：63-65.

〔2〕李昌荣，李红浪.Survivin与胃癌相关性的研究进展〔J〕.世界华人消化杂志，2014，22（33）：5079-5085.

〔3〕陈柏林，彭杰，邬麟.骨桥蛋白在食管腺癌组织中的表达及其临床意义〔J〕.中国现代医学杂志，2014，24（21）：44-47.

〔4〕Weng Y，Fei B，Chi A L，et al.Inhibition of gastric cancer cell growth in vivo by overexpression of adenoassociated vi⁃rusmediated survivin mutant C84A〔J〕.Oncol Res，2013，20（9）：411-417.

〔5〕张建军，候培珍.骨桥蛋白与肿瘤的转移〔J〕.中国医药指南，2012，10（29）：431-432.

〔6〕王凤龙，周林玉.骨桥蛋白在肾癌中表达的相关研究〔J〕.医学综述，2012，18（15）：2412-2414.

〔7〕郝筱诗，安燕，王立岩，等.骨桥蛋白在宫颈组织中的表达及与宫颈癌进展的相关性研究〔J〕.中国实验诊断学，2012，16（1）：65-67.

〔8〕庞晓云，伍建国，霍木兰.子宫颈癌患者中骨桥蛋白的表达及其临床意义〔J〕.中外医学研究，2011，9（21）：5-6.

〔9〕关婷，谭同焕.宫颈肿瘤组织中骨桥蛋白和血管内皮生长因子的表达及意义〔J〕.华南国防医学杂志，2011，25（4）：316-318.

Expressions and Related Studies of Survivin and OPN in Different Cervical Lesions

Wang Yanshu1,Lu Jing2,Li Haiyan1*
（1.Dali University,Dali,Yunnan 671000,China;2.Baoshan College of Traditional Chinese Medicine,Baoshan, Yunnan 678000,China）

Objective:To discuss the expressions of Survivin and OPN in the tissues of chronic cervitis,cervical intraepithelial neoplasia（CIN）and cervical squamous carcinoma.Methods:Immunohistochemical SP method was applied to detect the expressions of Survivin and OPN in 10 cases of chronic cervicitis,20 cases of CIN and 50 cases of cervical cancer.Results:The expression positive rate of Survivin and OPN in chronic cervicitis、CINⅢ、cervical squamous carcinomas increased with the lesion severity level enhancement，three groups of comparative differences are statistically significant（P＜0.05）.The expression positive rate of Survivin in cervical squamous carcinomas was associated with clinical stages and pathologic stage（P＜0.05）,but has nothing to do with age and lymph nodes metastasis（P＞0.05）.The expression positive rate of OPN in cervical squamous carcinomas was associated with clinical stages and lymph node metastasis（P＜0.05）,but has nothing to do with age and pathologic stage（P＞0.05）.Conclusion:The joint detection of Survivin and OPN may serve as the index for early diagnosis,condition monitoring and prognosis judgment of cervical squamous carcinomas.

Survivin;OPN;immunohistochemical;chronic cervicitis;CIN;cervical squamous carcinomas

R737.33

A

1672-2345（2015）08-0049-04

10.3969∕j.issn.1672-2345.2015.08.014

（责任编辑 袁霞）

云南省教育厅科研基金一般项目（2014Y400）

2014-12-16

2015-04-30

王艳书，讲师，主要从事临床护理学研究.

*通信作者：李海燕，教授.