云南松松塔不同极性部位对不同状态豚鼠离体气管的影响

郭美仙，刘光明，沈磊，李冬梅，赵健荣，杨静

（1.武汉大学基础医学院，武汉430072；2.云南省昆虫生物医药研发重点实验室，云南大理671000；3.保山中医药高等专科学校，云南保山678000）

云南松松塔不同极性部位对不同状态豚鼠离体气管的影响

郭美仙1，2，刘光明2，沈磊2，李冬梅2，赵健荣3，杨静1*

（1.武汉大学基础医学院，武汉430072；2.云南省昆虫生物医药研发重点实验室，云南大理671000；3.保山中医药高等专科学校，云南保山678000）

目的：观察云南松松塔不同极性部位对不同状态豚鼠离体气管的解痉作用。方法：采用离体气管法，观察云南松松塔不同极性部位对静息、乙酰胆碱（Ach）和组胺（His）致痉豚鼠离体气管的影响。结果：云南松松塔乙醇浸膏、石油醚部位和氯仿部位可以降低静息离体气管的张力，明显提高基础解痉率；云南松松塔乙醇浸膏、石油醚部位、氯仿部位和乙酸乙酯部位可以降低Ach、His致痉的离体气管张力，明显提高致痉气管的解痉率。结论：云南松松塔乙醇浸膏、石油醚部位和氯仿部位可提高不同状态豚鼠离体气管的解痉率，对静息和致痉离体气管平滑肌有松弛作用。

云南松松塔；离体气管；解痉作用

哮喘是气道慢性炎症性疾病，这种慢性炎症与气道高反应性相关，通常出现广泛而多变的可逆性气流受限。世界大部分地区哮喘患病率呈大幅上升趋势，哮喘已成为最常见的慢性呼吸道疾病〔1〕。松科松属植物约80余种，多产于北半球。我国产22种10变种，云南松主要分布于云南，资源十分丰富，松塔是其球果〔2〕。《本草纲目》记载了松塔具有祛痰、止咳、平喘、祛风、润肠、安神等功效。陈绩迳等〔3〕研究表明白皮松松塔具有平喘作用。现有研究发现云南松松塔中含有木质素类和黄酮类物质〔4-5〕，这类活性物质对平滑肌具有松弛作用。国内外尚未见云南松松塔平喘作用的研究报道，因此，本实验研究了云南松松塔不同极性部位对不同状态豚鼠离体气管的影响。

1 材料

1.1 动物豚鼠，普通级，雌雄不限，体重250～300 g，常规饲养。由大理学院实验动物中心提供。

1.2 药品与试剂K-H营养液〔6〕，氯化乙酰胆碱（Ach），上海三爱思试剂有限公司（批号：20061130）；磷酸组胺（His），上海如吉生物科技发展有限公司（批号：100703）；氨茶碱注射液，广州白云山明兴制药有限公司（批号：130826）。

1.3 仪器BL-420E+生物机能实验系统和HW-400S恒温平滑肌槽（成都泰盟科技有限公司）；JH-2肌张力传感器（航天工程医学工程研究所）。

1.4 样品由大理学院生药学副教授周浓鉴定为云南松Pinus yunnanensis松塔。云南松松塔干燥粗粉10 kg，用95%乙醇冷浸提取（24 h×3次），合并提取液，减压浓缩回收溶剂。浓缩得到的乙醇浸膏加适量水混悬后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇进行萃取，各萃取极性部位减压浓缩回收溶剂，得到石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、水5个极性部位。冷冻干燥后备用。用1.0×102μL∕mL DMSO配制成4.8×10 mg∕mL混悬液。

2 方法

2.1 标本制作用木棒击毙豚鼠，立即分离并取出上至甲状软骨、下至气管分叉处的气管段，放入4℃饱和氧的K-H营养液中，剔除气管周围结缔组织，将其剪成2 cm×2 mm的螺旋条，并固定于张力换能器上，置于盛有19.5 mL K-H营养液（37±0.5）℃的浴槽中，持续通入混合气体（95%O2和5%CO2），调节基础张力为1.9～2.0 g，稳定60 min，每20 min换1次新鲜K-H营养液〔6-7〕。

2.2 云南松松塔不同极性部位对静息豚鼠离体气管的影响实验分为8组，DMSO组、氨茶碱组（9.6 ×10-1mg∕mL）、乙醇浸膏组、石油醚部位组、氯仿部位组、乙酸乙酯部位组、正丁醇部位组和水部位组〔8〕。待标本稳定，加入0.5 mL His（终浓度1.5× 10-3mg∕mL），观察气管条有无收缩反应，以此判断标本的基本功能。实验开始，记录正常气管条3 min内的张力变化（平均张力作为给药前张力），加入0.5 mL DMSO，记录气管条3 min内的张力变化（平均张力作为给药后张力），换液5次，让曲线回复正常。同样方法，依次分别加入氨茶碱及受试样品进行实验。用下述公式计算解痉百分率〔6-7〕。

解痉率=（给药前张力－给药后张力）∕给药前张力×100%

2.3 云南松松塔不同极性部位对致痉豚鼠离体气管的影响分组与标本基本功能判断同“2.2”。实验开始，曲线收缩正常后加入0.5 mL Ach或His（终浓度1.5×10-3mg∕mL）诱发收缩反应，记录气管条3 min内的张力变化（平均张力作为给药前张力），加入0.5 mL DMSO，记录气管条3 min内的张力变化（平均张力作为给药后张力）。同样方法，依次分别加入氨茶碱及受试样品进行实验。用上述公式计算解痉百分率〔6-7〕。

2.4 数据统计与处理数据用均数±标准差（xˉ±s）表示，用SPSS17.0统计软件进行单因素方差分析，组内均数比较采用配对t检验，组间均数比较采用Student'st检验。

3 结果

3.1 云南松松塔不同极性部位对静息豚鼠离体气管的影响与给药前比较，乙醇浸膏组、石油醚部位组和氯仿部位组的给药后张力明显降低（P＜0.01，P＜0.05）；与DMSO组比较，乙醇浸膏组、石油醚部位组和氯仿部位组的解痉率明显升高（P＜0.01，P＜0.05），说明云南松松塔乙醇浸膏、石油醚部位和氯仿部位对静息离体气管有舒张作用。见表1。

3.2 云南松松塔不同极性部位对Ach致痉豚鼠离体气管的影响与给药前比较，乙醇浸膏组、石油醚部位组、氯仿部位组和乙酸乙酯部位组的给药后张力明显降低（P＜0.01，P＜0.05）；与DMSO组比较，乙醇浸膏组、石油醚部位组、氯仿部位组和乙酸乙酯部位组的解痉率明显升高（P＜0.01，P＜0.05），说明云南松松塔乙醇浸膏、石油醚部位、氯仿部位和乙酸乙酯部位对Ach致痉的离体气管有解痉作用。见表2。

表1 云南松松塔不同极性部位对静息豚鼠离体气管的影响

表1 云南松松塔不同极性部位对静息豚鼠离体气管的影响

注：与给药前比较，a）P＜0.05，b）P＜0.01；与DMSO组比较，1）P＜0.05，2）P＜0.01；与氨茶碱组比较，3）P＜0.05，4）P＜0.01。

表2 云南松松塔不同极性部位对Ach致痉豚鼠离体气管的影响

表2 云南松松塔不同极性部位对Ach致痉豚鼠离体气管的影响

注：与给药前比较，a）P＜0.05，b）P＜0.01；与DMSO组比较，1）P＜0.05，2）P＜0.01；与氨茶碱组比较，3）P＜0.05，4）P＜0.01。

3.3 云南松松塔不同极性部位对His致痉豚鼠离体气管的影响与给药前比较，乙醇浸膏组、石油醚部位组、氯仿部位组和乙酸乙酯部位组的给药后张力明显降低（P＜0.01）；与DMSO组比较，乙醇浸膏组、石油醚部位组、氯仿部位组和乙酸乙酯部位组的解痉率明显升高（P＜0.01），说明云南松松塔乙醇浸膏、石油醚部位、氯仿部位和乙酸乙酯部位对His致痉的离体气管有解痉作用。见表3。

表3 云南松松塔不同极性部位对His致痉豚鼠离体气管的影响

表3 云南松松塔不同极性部位对His致痉豚鼠离体气管的影响

注：与给药前比较，a）P＜0.05，b）P＜0.01；与DMSO组比较，1）P＜0.05，2）P＜0.01；与氨茶碱组比较，3）P＜0.05，4）P＜0.01。

4 讨论

目前，哮喘尚无特效疗法，主要以控制症状的药物治疗为主，常用的药物是糖皮质激素类和茶碱类，这两类药物的不良反应较多且较严重。而中药对哮喘有很好的防治效果，并且毒副作用较少较轻。因此，研发抗哮喘中药有很好的前景。

本实验结果表明：云南松松塔乙醇浸膏、石油醚部位和氯仿部位可提高不同状态豚鼠离体气管的解痉率，也就是说云南松松塔乙醇浸膏、石油醚部位和氯仿部位对豚鼠离体气管平滑肌有松弛作用，可降低离体气道的高反应性。本实验结果为传统中医用松塔来治疗哮喘提供了科学依据。但其机制还有待研究。

〔1〕刘学冠.支气管哮喘治疗进展〔J〕.吉林医学，2014，35（3）：596-597.

〔2〕中国科学院中国植物志编委会.中国植物志〔M〕.北京：科学出版社，1978：204.

〔3〕江西交叉验证组.红管药、白皮松松塔治疗慢性气管炎115、116例临床疗效观察〔J〕.山西医药杂志，1974（4）：12-20.

〔4〕张海珠，周萍，刘光明，等.云南松松塔中木质素分析〔J〕.亚太传统医药，2013，9（8）：24-25.

〔5〕李冬梅，李莉，吴五谊，等.正交试验法优选云南松松塔总黄酮的提取工艺〔J〕.中国实验方剂学杂志，2013，19（1）：37-39.

〔6〕陈奇.中药药理研究方法学〔M〕.北京：人民卫生出版社，2011：1182-1183.

〔7〕吴国泰，刘峰林，高云娟，等.当归挥发油对离体气管、十二指肠和血管平滑肌的作用〔J〕.中药药理与临床，2012，28（6）：74-76.

〔8〕昌思思，马志敏，宋正蕊，等.松塔球提取物的抑突变性研究〔J〕.癌变·畸变·突变，2010，22（1）：59-61.

The Influence of Different Polar Parts of Pinus yunnanensis on Trachea in Vitro of Guinea Pigs in Different State

Guo Meixian1,2,Liu Guangming2,Shen Lei2,Li Dongmei2,Zhao Jianrong3,Yang Jing1*
（1.College of Basic Medicine,Wuhan University,Wuhan 430072,China;2.Yunnan Provincial Key Laboratory of Entomological Biopharmaceutical,Dali University,Dali,Yunnan 671000,China;3.Baoshan College of Traditional Chinese Medicine,Baoshan, Yunnan 678000,China）

Objective:To observe the spasmolytic action of different polar parts ofPinus yunnanensison trachea in vitro of guinea pigs in different state.Methods:Using the methods of trachea in vitro,the influence of different polar parts ofP.yunnanensison trachea in vitro in resting state and acetylcholine（Ach）or histamine（His）induced spasm state were observed.Results:Ethanol extract,petroleum ether and chloroform parts ofP.yunnanensiscan reduce the tension of trachea in vitro in resting state and significantly increase basic spasmolysis rate;Ethanol extract,petroleum ether,chloroform and ethyl acetate parts ofP.yunnanensiscan reduce the tension of trachea in vitro in the Ach,His induced spasm state and significantly increase spasmolysis rate of spasmodic trachea.Conclusion:Ethanol extract,petroleum ether and chloroform part ofP.yunnanensiscan improve the spasmolysis rate of trachea in vitro of guinea pigs in different state,and relax resting and spasmodic trachea.

Pinus yunnanensis;trachea in vitro;spasmolytic effect

R996.2

A

1672-2345（2015）08-0001-04

10.3969∕j.issn.1672-2345.2015.08.001

（责任编辑 毛本勇）

国家自然科学基金资助项目（81260632）；云南省自然科学基金资助项目（2012FD036）

2015-04-10

2015-04-27

郭美仙，实验师，主要从事中药药理学研究.

*通信作者：杨静，教授.