HPLC法测定三拗鱼龙合剂中橙皮苷的含量

王 虎 任路路任 莹 许广华 司 永 李小伟

安徽省太和县中医院，安徽 太和 236607

HPLC法测定三拗鱼龙合剂中橙皮苷的含量

王 虎 任路路*任 莹 许广华 司 永 李小伟

安徽省太和县中医院，安徽 太和 236607

目的：建立三拗鱼龙合剂中橙皮苷的含量测定方法。方法：采用HPLC法测定，色谱柱为碳十八烷基硅烷键合硅胶柱；流动相为乙腈－0.4%磷酸水溶液（20∶80）；检测波长：283nm；流速：1.0ml／min；柱温：30℃。结果：橙皮苷在13.91～222.6μg／ml范围呈良好的线性关系，平均回收率100.11%，RSD＝1.37%（n＝6）。结论：该方法简单、准确，重复性、稳定性良好，精密度高，结果可靠，可作为三拗鱼龙合剂质量控制的方法。

三拗鱼龙合剂；橙皮苷；HPLC

三拗鱼龙合剂由鱼腥草、浙贝母、陈皮等药味组成，为太和县中医院医院制剂。具有宣肺平喘、止咳消痰的功效，用于急、慢性支气管炎。作为医院制剂，原标准中无含量测定项。为了更好的控制医院制剂的质量，使本制剂疗效稳定可控，本文采用高效液相色谱法测定陈皮中橙皮苷的含量，该法灵敏度高，专属性好，操作简单，重复性好，可作为三拗鱼龙合剂质量控制的方法。

1 仪器与材料

1.1 仪器 安捷伦LC－1220型高效液相色谱仪；紫外检测器；101－1A型数显恒温干燥箱（上海光地仪器设备有限公司）；AL－120型电子天平（瑞士梅特勒－托利多仪器公司）；HS－180型超声波清洗机（宁波海曙金兰教仪科研究所）。

1.2 试药 三拗鱼龙合剂（批号：20140417、20140712、20140906，太和中医院中药制剂室）；橙皮苷对照品（批号：110721－201316，中国药品生物制品检定所）；乙腈为色谱纯；水为纯化水；其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：依利特Hypersil ODS（4.6mm×250mm，5μm）；流动相：乙腈－0.4%磷酸水溶液（20∶80）；检测波长：283nm；流速：1.0ml／min；柱温：30℃；进样量：20μl。理论塔板数以橙皮苷计应不低于4000，分离度大于1.5。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取橙皮苷对照品适量，加甲醇－0.4%磷酸水溶液（1∶1）制成每1ml含50μg的溶液。

2.3 供试品溶液的制备［1］密量取本品5ml，置25ml量瓶中，加甲醇20ml，超声处理（功率100W，频率40kHz）20min，放冷，用甲醇定容，摇匀，离心（3000r／min，10min），精密移取上清液5m l置10m l量瓶中，用0.4%磷酸稀释至刻度，摇匀，过0.45μm滤膜，即得。

2.4 干扰试验 按处方比例及生产工艺制备不含陈皮的三拗鱼龙合剂，再按供试品溶液的制备方法制成阴性对照溶液。取对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液按上述色谱条件测定，记录色谱图。结果表明，阴性对照溶液在与橙皮苷对照品相同保留时间处未显色谱峰，故认为无干扰。见图1。

2.5 线性关系考察 精密称取橙皮苷对照品11.13mg，置25m l量瓶中，用甲醇定容，作为储备液。精密移取储备液5m l，置10m l量瓶中，用甲醇－0.4%磷酸溶液（1∶1）稀释至刻度，摇匀，作为2号对照品溶液；同法制成3、4、5号对照品溶液。分别精密吸取各对照品溶液20μl，按上述色谱条件进样。以对照品的进样量为横坐标 （X），峰面积为纵坐标（Y），得回归方程：Y＝1.945×10－9X－0.002225532，R＝0.9996。结果表明，橙皮苷在13.91～222.6μg／m l范围内线性关系良好。

2.6 精密度试验 取“2.5”项下3号对照品溶液，按上述色谱条件连续进样6次，测定峰面积。结果橙皮苷峰面积RSD为0.92%。结果表明仪器精密度良好。

2.7 重复性试验 取同一批号（20140417）样品6份，分别按 “2.3”项下方法制备供试品溶液，并按上述色谱条件进样测定其含量。结果橙皮苷平均含量为0.4856mg／m l，RSD为1.34%，结果表明方法重复性良好。

2.8 稳定性试验 取同一批号（20140417）供试品溶液，室温下放置，按上述色谱条件，分别于配制后0、2、4、6、8、12、24 h进样测定，记录橙皮苷峰面积。结果峰面积RSD为1.76%。结果表明供试品溶液在24h内基本稳定。

2.9 加样回收率试验［2－3］取已知含量的同一批号（20140417）样品6份，分别精密加入浓度为0.4452mg／ml橙皮苷对照品溶液1.0 ml，按“2.3”项下的制备方法制备供试品溶液，按上述色谱条件测定其含量，计算回收率。结果见表1。2.10 样品含量测定 取样品3批，按所述方法测定，以外标法计算含量。结果见表2。

表1 橙皮苷加样回收率试验结果

表2 样品测定结果

3 结果与讨论

3.1 流动相的选择 HPLC法测定橙皮苷含量的文献［4－7］较多，常采用甲醇－水系统和乙腈－水系统。由于峰形较差，常会在流动相中添加一定比例酸改善峰形。试验考察了甲醇－0.4%醋酸水溶液（35∶65）、甲醇－0.4%磷酸水溶液（20∶80）、乙腈－0.4%磷酸水溶液（20∶80）等流动相，发现乙腈－0.4%磷酸水溶液（20∶80）峰形较为满意，且保留时间适宜、分离度良好，故选择此条件作为测定条件。

3.2 样品处理 分别对样品超声10、15、20、25min后进样考察，结果显示超声20min含量高于15min，而超声25min被测组分含量几乎不再增加，故确定超声时间20min即可。由于定容后样品过滤较困难，试验时间长，故选择离心法除去杂质。且离心后与直接过滤样品的色谱峰面积相比较，无明显差异。样品用甲醇处理后直接进样，色谱峰前沿明显，分离度差。用0.4%磷酸稀释后进样，峰形较为满意。故样品处理后，故加入适量磷酸以调整峰形。

采用HPLC法测定三拗鱼龙合剂的含量，操作简便，结果准确可靠，重现性好，可用于该品种的质量控制和稳定性考察，为三拗鱼龙合剂质量标准的建立提供依据。

［1］龙荣，祝文兵，彭芳玲，等.RP－HPLC法测定镇咳灵合剂中橙皮苷的含量［J］.儿科药学杂志，2008，14（2）：37－38.

［2］姜志戎.HPLC法测定和胃合剂中橙皮苷的含量［J］.中医药临床杂志，2011，23（10）：903－904.

［3］张颖，蒋俊春，孟建升.HPLC法测定公英健胃合剂中橙皮苷的含量［J］.光明中医，2009，24（4）：654－655.

［4］国家药典委员会.中华人民共和国药典 （一部）［S］.北京：中国医药科技出版社，2010：176－177.

［5］孙冬梅，毕晓黎，胥爱丽，等.HPLC法测定不同产地陈皮药材中橙皮苷的含量［J］.中国实验方剂学杂志，2009，15（11）：1－3.

［6］焦志峰，迟栋.HPLC法测定香砂六君合剂中橙皮苷的含量［J］.光明中医，2011，26（4）：695－696.

［7］仇雅静，朱梓文.HPLC法测定通肠理气合剂中芍药苷和橙皮苷的含量［J］.中国药事，2012，26（12）：1366－1368.

R284.1

A

1007－8517（2015）01－0044－02

2014.10.12）

王虎（1971－），男，主管中药师，主要从事中药炮制与制剂工艺的研究。E－mail：157914824＠qq.com

任路路（1984－），男，主要从事中药新剂型的研究。E－mail：lubyhui68＠163.com