HPLC法测定四逆清带口服液中芍药苷的含量

樊建霜，王家员，林方芬，岳显可

HPLC法测定四逆清带口服液中芍药苷的含量

樊建霜1，王家员1，林方芬1，岳显可2*

目的 建立HPLC法测定四逆清带口服液中芍药苷的含量。方法 采用Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱，以乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)为流动相，流速为1.0 mL/min，检测波长为230 nm，柱温25 ℃。结果 芍药苷进样量在0.31～93.00 μg/mL范围内与峰面积呈良好的线性关系(R2=0.999 9)，平均回收率为98.67(RSD%=1.19，n=6)。结论 本方法简便、准确、灵敏度高、重现性良好，可用于四逆清带口服液中芍药苷的质量控制。

四逆清带口服液；HPLC；芍药苷

0 引言

四逆清带口服液由四逆清带汤改剂型而来，由柴胡、白芍、枳实、甘草、蒲公英、红藤、败酱草、大蓟、小蓟、椿根皮、绵萆薢、土茯苓、半枝莲各按一定量配伍而成。四逆清带汤是温州市中医院国家级名老中医马大正主任医师的经验方，主治慢性盆腔炎的轻症。该方由四逆散(柴胡、枳壳、白芍、甘草)加味而成。具有透邪解郁、疏肝理气之功[1-2]。大蓟、小蓟、败酱草、红藤、半枝莲、蒲公英具有清热解毒、消痈排毒之功。土茯苓、椿皮、萆薢具有清热、利湿、去浊之功。诸药合用共奏疏调气机、清理湿热之效[3]，气机畅，湿热清，故气阻湿热型慢性盆腔炎得以治。且该方由温州市中医院马大正主任医师沿用数十年，疗效确切，能治愈、缓解慢性盆腔炎症状，值得推广使用。目前临床上仅有其汤剂，而口服液具有浓度高、体积小、便于服用、携带及贮藏的优点，故将本方制备成口服液，本研究为四逆清带口服液质量控制提供试验依据。

1 仪器与试药

Ultimate3000型高效液相色谱仪(美国戴安公司)。梅特勒XS-105电子分析天平(0.01 mg，METTLER TOLEDO，Switzerland)，KS-80中草药粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司)；R-201恒温水浴锅(上海申生科技有限公司)。

四逆清带口服液由温州市中医院制剂室制备提供(批号：131201、131202、131203)。芍药苷标准品(批号：110736-201136)购自中国药品生物制品检定所。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验 以Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)为色谱柱；乙腈-0.1%磷酸溶液(14∶86)为流动相；检测波长为230 nm，柱温：25 ℃；流速：1 mL/min。理论板数按芍药苷峰计算应不低于2 000，重复性、分离度、托尾因子及保留时间如表1所示。

2.2 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品12.4 mg于10 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成储备液。

2.3 供试品溶液的制备 取四逆清带口服液0.5 mL，于10 mL容量瓶中，加5 mL甲醇超声30 min，超声频率40 Hz。放冷，加甲醇至刻度，摇匀，取适量溶液至离心管中，于12 000 r/min条件下离心10 min后，过滤，取滤液，即得。

表1 系统适用性试验结果

2.4 线性关系考察 取芍药苷储备液依次稀释成浓度为0.31、1.55、15.50、62.00、93.00 μg/mL的线性系列溶液，分别精密吸取5个标准品溶液各10 μL进行测定。以待测物浓度(X)为横坐标、待测物峰面积(Y)为纵坐标，采用最小二乘法进行线性回归，回归方程为：Y=6.773 7 X+1.626 7，R2=0.999 9。结果表明，芍药苷在0.31～93.00 μg/mL范围内与其峰面积呈良好的线性关系。

2.5 精密度考察 取“2.4”项中62.00 μg/mL标准品溶液，按以上色谱条件，重复进样6次，测定峰面积，结果RSD为0.51%(n=6)。

2.6 回收率试验 取已知含量的同一批均匀的四逆清带口服液(批号：131201)，精密量取0.5 mL，置10 mL容量瓶中，平均量取6份，分别精密加入浓度为93.00 μg/mL的对照品溶液1 mL，用甲醇稀释至刻度，摇匀，按“2.3”项方法制备供试品溶液，在“2.1”项色谱条件下进行测定，结果见表2，平均回收率为98.67%，RSD为1.19%(n=6)。

表2 加样回收试验结果

2.7 重复性试验 取同一批均匀的四逆清带口服液(批号：131201)，精密量取0.5 mL，共6份，按“2.3”项下方法制备供试品，在“2.1”项色谱条件下进行分析。芍药苷含量RSD为(n=6)。

表3 供试品重复性考察结果

2.8 稳定性试验 取同一批均匀的四逆清带口服液(批号：131201)，精密量取0.5 mL，照“2.3”项下方法制备供试品，在“2.1”项色谱条件下，在0、6、12、18、24、30 h进行测定。芍药苷峰面积的RSD为1.23%(n=6)。

表4 供试品稳定性考察(h)

2.9 样品测定 取3批样品，按“2.3”项下方法制备供试品，在“2.1”项色谱条件下测定芍药苷含量，色谱图见图1。结果3批样品(131201、131202、131203)中芍药苷的含量分别为84.32、75.61、86.84 μg/mL。故以每支口服液10 mL计，含芍药苷总量分别为16.86、15.12、17.37 mg。

图1 芍药苷标准品与口服液样品芍药苷色谱图

3 讨论

3.1 本试验以甲醇为溶剂对口服液样品进行再处理，芍药苷能得到很好的转移，且供试品在该色谱条件下，分离度好，灵敏度高，为控制四逆清带口服液的质量提供了一种较好的分析手段[4]。

3.2 四逆清带汤是治疗湿热型慢性盆腔炎的临床经验方，因其疗效确切，值得推广使用，故将本方制备成口服液。组方中的白芍是四逆清带口服液中的主要味药，芍药苷也是口服液的主要功效成分，故以芍药苷作为质量控制指标[5]。

[1] 畅洪昇,王庆国,关玲.中药抗抑郁复方分析和证治规律研究[J].中国民间疗法,2004,12(2):60-62.

[2] 卢嫏环,肖勇,丁舸.试论四逆散之核心药组的合理性[J].光明中医,2013,28(9):1768-1769.

[3] 马大正.马大正中医妇科医论医案集[M].北京:中医古籍出版社,2006:1.

[4] 张颖,王伟丽,朱明伟.高效液相色谱法测定丹参益坤口服液中芍药苷含量[J].中国药业,2012,23(21):15-16.

[5] 涂凤莲.四逆散中芍药苷含量的HPLC法测定[J].中外健康文摘,2011,8(13):405-406.

Determination of paeoniflroin in Sini Qingdai oral liquid by HPLC

FAN Jian-shuang1,WANG Jia-yuan1,LIN Fang-fen1,YUE Xian-ke2*

(1.Wenzhou Hospital of TCM,Wenzhou 325007,China;2.Zhejiang Chinese Medical University Chinese Medicine Yinpian Co.,Ltd.,Hangzhou 311400,China)

Objective To establish an HPLC method for the determination of paeoniflroin in Sini Qingdai oral solutions.Methods The analysis was performed on a Agilent Eclipse XDB-C18column(4.6 mm×250 mm,5 μm) with a mobile phase of Acetonitrile-0.1%Phosphoric acid solution(14∶86).The flow rate was 1.0 mL/min.The column temperature was 25 ℃.The detection wavelength was 230 nm.Results The calibration curve of paeoniflroin was liner within the range of 0.31～93.00 μg/mL(R2=0.999 9).The average recovery rate was 98.67%(RSD%=1.19,n=6).Conclusion The method is accurate,simple,sensitive and reproducible.It can be used as the quality control method for Sini Qingdai oral solutions.

Sini Qingdai oral solutions;HPLC;Paeoniflroin

2014-09-02

1.温州市中医院，温州 325007；2.浙江中医药大学中药饮片有限公司，杭州 311400

温州市医药卫生科研项目(2012ZA006)

10.14053/j.cnki.ppcr.201503017

*通信作者