呼吸道感染患儿血清Toll样受体9检测及意义

方 丽陈培英童夏生王恩智

呼吸道感染患儿血清Toll样受体9检测及意义

方 丽1陈培英1童夏生2王恩智3

儿童；呼吸道感染；模式识别受体；Toll样受体9

模式识别受体能有效识别一些病原体中高度保守结构，并能产生相应的免疫反应，在机体清除病原体的过程中起着重要的作用。Toll样受体（toll like receptor，TLR）是固有免疫细胞膜上最重要的模式识别受体，是在识别病原体过程中进化而来的保守受体复合物，每一种亚型因不同系列的病原体相关分子结构而被识别，表达于多种免疫细胞，受病原体入侵影响后，TLR诱导机体产生免疫反应，涉及到Thl/ Th2失衡，并倾向于Thl反应[1]。目前研究发现，TLR参与了呼吸道感染的炎症机制，我们先前的研究也发现TLR2与呼吸道感染相关[2]。本研究通过观察呼吸道感染患儿血清TLR9的表达水平变化，旨在探讨TLR9在呼吸道感染发病机制中的作用，为临床治疗提供理论依据。

1 资料与方法

1.1 临床资料 2013年11月—2014年9月本院住院患儿90例，急性上呼吸道感染组30例，男15例，女15例，年龄0.5～6.3岁，平均2.8岁；毛细支气管炎组30例，男16例，女14例，年龄0.6～4.1岁，平均2.0岁；肺炎组30例，年龄男18例，女12例，年龄0.5～4.2岁，平均2.5岁；健康对照组30名来自门诊健康体检者，男18名，女12名，年龄0.6～5.2岁，平均2.5岁。各组性别、年龄差异无统计学意义（P＞0.05）。急性上呼吸道感染组入选标准[3]：病程＜2天，体温≥38.5℃，临床表现为发热、咳嗽、流涕。毛细支气管炎组入选标准[3]：病程＜3天，临床表现为咳嗽、喘息、气促、发热，肺部可闻及喘鸣音，X线胸片呈支气管周围炎征象。肺炎组入选标准[3]：病程＜3天，临床表现为咳嗽、气促、发热，肺部可闻及痰呜音和细小湿性啰音，X线胸片呈片状阴影。三组患儿均无其他伴发疾病。

1.2 试剂和方法 采集患儿入院当时和恢复期静脉血，各2mL，离心（3000转/10min）后取血清置于-80℃冰箱中，集中检测。TLR9试剂盒购自上海研吉生物科技有限公司（批号201311），酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测血清TLR9蛋白浓度。

1.3 统计学方法 应用SPSS16.0统计软件，数据以均数±标准差（±s） 表示，各组间均数比较采用方差分析，方差齐性者采用LSD法，方差不齐者采用Tamhane’s T2检验，组内治疗前、后比较采用配对资料的t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

治疗前血清TLR9蛋白浓度肺炎组＞急性上呼吸道感染组、毛细支气管炎组＞健康对照组（P均＜0.01）；急性上呼吸道感染组、毛细支气管炎组间差异无统计学意义（P＞0.05）。治疗后急性上呼吸道感染组、毛细支气管炎组、肺炎组血清TLR9蛋白浓度均显著低于治疗前（P均＜0.01），且均显著高于健康对照组（P均＜0.01），见表1。

表1 血清TLR9蛋白浓度（ng/mL，±s）

表1 血清TLR9蛋白浓度（ng/mL，±s）

注：与健康对照组比较，▲P＜0.01；与急性上呼吸道感染组、毛细支气管炎组比较，*P＜0.01；与治疗前比较，△P＜0.01

组别健康对照组急性上呼吸道感染组毛细支气管炎组肺炎组例数30 30 30 30治疗前5.8±2.1 10.9±3.1▲13.5±4.1▲20.9±6.7▲*治疗后 7.8±2.5△▲11.6±2.9△▲16.8±4.3△▲

3 讨论

天然免疫系统通过模式识别受体识别入侵机体的病原体，在这些模式识别受体中，已显示出TLR3、7/8、9和RIG样受体具有识别病毒的功能[4]。TLR9是一种表达于细胞膜的膜结合受体，属于Ⅰ型跨膜蛋白，广泛表达于多种细胞，具有重要的生理和病理作用，参与感染、免疫等的发病机制。最近研究证实，TLR9与多种呼吸系统疾病有关，在抗病毒及细菌的感染中起了重要作用。

急性上呼吸道感染和毛细支气管炎常由流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒等引起，是婴幼儿时期常见疾病。有学者[5]研究发现，灭活的呼吸道合胞病毒疫苗，在添加了TLR9和NOD2的特异性配体后,能增强机体黏膜对呼吸道合胞病毒的免疫力。本研究发现，治疗前急性上呼吸道感染组、毛细支气管炎组血TLR9蛋白浓度高于健康对照组（P＜0.01），提示TLR9可能参与了呼吸道病毒感染过程；而急性上呼吸道感染组与毛细支气管炎组之间没有差别，表明TLR9对病毒的反应可能没有选择特异性；同时还发现，恢复期急性上呼吸道感染组、毛细支气管炎组血清TLR9蛋白浓度降低，且高于对照组（P＜0.01），提示随着机体炎症减轻TLR9的水平也随之下降，表明它能反应疾病的炎症状态。

除了上述病毒感染性疾病，TLR9还参与肺炎的免疫反应。在急性细菌性肺炎患者的血类浆细胞树突状细胞上TLR9的表达增加，上调了分子对病原体相关分子模式和受调理素作用抗原的识别能力[6]。在G-细菌性肺炎中，TLR9还可与TLR4一起共同起到促进白细胞介素23和17表达的作用[7]。在A型流感病毒感染的肺炎中，TLR9也可与TLR2/6联合起到清除病毒的作用[8]。本研究发现，肺炎组血清TLR9蛋白的浓度高于急性上呼吸道感染组及毛细支气管炎组（P＜0.01），提示肺炎患者TLR9的免疫反应强烈，其浓度处于较高水平；恢复期肺炎组血清TLR9蛋白浓度明显下降但仍高于对照组，提示TLR9对炎症反应将持续一段时间才能恢复正常水平。

综上所述，呼吸道感染后TLR9蛋白浓度升高，表明TLR9参与了呼吸道感染的天然免疫应答机制，可以作为评价病情的免疫指标。

［1］Klaassen EM，Thonissen BE，van Eys G，et al.A systematic review of CD14 and toll-like receptors in relation to asthma in Caucasian children［J］.Allergy Asthma Clin Immunol，2013，9（1）：10.

［2］罗丽丹，王鑫华，童夏生，等.呼吸道感染患儿血清Toll样受体、Dectin及CD14测定临床意义［J］.浙江中西医结合杂志，2014，24（7）：620-622.

［3］胡亚美，江载芳.实用儿科学［M］.第7版.北京：人民卫生出版社，2002：1167-1215.

［4］Sathe A，Reddy KV.TLR9 and RIG-I signaling in human endocervical epithelial cells modulates inflammatory responses of macrophages and dendritic cells in vitro［J］.PLoS One，2014，9（1）：e83882.

［5］Shafique M，Wilschut J，de Haan A.Induction of mucosal and systemic immunity against respiratory syncytial virus by inactivated virus supplemented with TLR9 and NOD2 ligands［J］.Vaccine，2012，30（3）：597-606.

［6］Dreschler K，Bratke K，Petermann S，et al.Altered phenotype of blood dendritic cells in patients with acute pneumonia［J］.Respiration，2012，83（3）：209-217.

［7］Bhan U，Ballinger MN，Zeng X，et al.Cooperative interactions between TLR4 and TLR9 regulate interleukin 23 and 17 production in a murine model of gram negative bacterial pneumonia［J］.PLoS One，2010，5（3）：e9896.

［8］Tuvim MJ，Gilbert BE，Dickey BF，et al.Synergistic TLR2/6 and TLR9 activation protects mice against lethal influenza pneumonia［J］.PLoS One，2012，7（1）：e30596.

（收稿：2014-12-26 修回：2015-05-06）

1浙江省诸暨市人民医院儿科（诸暨 311800）；2浙江省台州市中西医结合医院儿科（温岭 317523）；3浙江省台州市中西医结合医院检验科（温岭 317523）

方丽，Tel：15356308779