高效液相色谱法测定气管炎颗粒中黄芩苷的含量

刘彬果，张新萍（解放军254医院，天津300142）

高效液相色谱法测定气管炎颗粒中黄芩苷的含量

刘彬果，张新萍（解放军254医院，天津300142）

目的建立高效液相色谱法测定气管炎颗粒中黄芩苷的含量。方法采用HPLC法，色谱柱：ZORBAX SB-C18柱（4．6 mm×150 mm，5μm），以甲醇-0．1%磷酸（47∶53）为流动相，流速为1 m l／m in，检测波长为280 nm。结果黄芩苷在6．63～210μg／m l范围内呈良好线性关系（r＝0.999 8，n＝6），平均加样回收率为98.16%，RSD为1．89%。结论本法简便、灵敏、准确、重复性好，结果可靠，可有效地控制气管炎颗粒的质量。

气管炎颗粒；黄芩苷；高效液相色谱法

气管炎颗粒为解放军254医院多年的临床经验方，由生栀子、黄芩、瓜蒌等9味中药组成，具有清热解毒、止咳化痰的功效，临床适用于急、慢性气管炎，咳嗽多痰等症状。其现有的质量标准只有中药定性鉴别的方法，无含量测定项目。黄芩为方中君药，其活性成分为黄芩苷，是抗菌消炎的主要药效物质。为了更好地控制气管炎颗粒的质量，确保该制剂的疗效，我们以黄芩苷作为定量控制指标，采用高效液相色谱法测定黄芩苷的含量，经方法学考察，该法简便、准确，无干扰，可用于评价气管炎颗粒的质量。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪（美国Agilent 1260），Open-LAB CDS色谱工作站（美国Agilent公司），ZORBAX SB-C18（4．6 mm×150 mm，5μm）色谱柱（美国Agilent公司）；黄芩苷对照品（中国药品生物制品检定所），气管炎颗粒（本院制剂室）；甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2．1色谱条件 流动相：甲醇-0．1%磷酸溶液（47∶53）；流速：1．0 m l／min；柱温：室温；检测波长：280 nm；进样量：10μl。理论塔板数按黄芩苷峰计算不低于3 000。

2．2溶液制备

2．2．1 对照品溶液 精密称取105℃干燥的黄芩苷对照品10．5 mg，置50 m l量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为对照品溶液储备液（0．21 mg／m l）。

2．2．2 供试品溶液 取装量差异下的气管炎颗粒（10 g／袋），研细，精密称定约0．5 g，置50 m l量瓶中，加入50%甲醇适量，超声处理（功率250 W，频率40 kHz）20 m in使溶解，放冷，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，弃去初滤液，取续滤液，即得［1，2］。

2．2．3 阴性对照液 按照处方组成比例，制备不含黄芩药材的阴性样品。按供试品溶液制备方法制备阴性对照液，并按上述色谱条件进行测定，结果在与黄芩苷对照品相同保留时间处无色谱峰，说明本品中的其他成分对黄芩苷的测定无干扰。

分别精密吸取上述对照品、供试品和缺黄芩药材的阴性对照溶液10μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，结果见图1。

2．3线性关系的考察 精密称取黄芩苷对照品制成浓度为6．63、13．1、26．2、52．5、105、210μg／m l的溶液。按2．1项下色谱条件测定，以黄芩苷进样量为横坐标，相应的峰面积为纵坐标绘制标准曲线。回归方程：A＝16．70 C－9．951（r＝0．999 8），结果表明，黄芩苷在6．63～210μg／m l范围内线性关系良好。

图1 HPLC色谱图

2．4重复性试验 取同一批号的样品6份（批号：14090137），按供试品溶液制备方法制得，依法测定，结果RSD为0．88%（n＝6）。

2．5加样回收率试验 精密称取已知含量的同一批号的样品5份，研细，并精密加入定量的黄芩苷对照品，按供试品溶液制备方法制备，并按上述色谱条件测定。结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝5）

2．6稳定性试验 供试品溶液在室温下放置不同时间（0、1、4、8、10、12、24 h），测定，其峰面积RSD为1．76%，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

2．7样品测定 取样品3批，按上述方法制备供试品溶液，照上述色谱条件测定，分别精密吸取对照品溶液（52．5μg／m l）和样品溶液，外标法定量。结果见表2。

表2 气管炎颗粒中黄芩苷含量的测定结果（n＝2）

3 讨论

关于中药制剂中黄芩苷的含量测定方法已有相关报道［2，3］，气管炎颗粒的处方药材品种较多，化学成分复杂，色谱分离条件需要摸索。本研究对气管炎颗粒中黄芩苷的含量测定色谱条件进行了考察，经过对黄芩苷对照品溶液的紫外吸收光谱测定，样品和对照品溶液均在280 nm处有最大吸收，故选择280 nm为检测波长。同时考察了不同流动相时的色谱行为，采用乙腈-水-磷酸体系，发现峰形对称性不好，采用药典方法，甲醇-水-磷酸体系为流动相时，可有效改善峰形，达到很好分离效果。经考察我们确定色谱条件为甲醇-0．1%磷酸（47∶53）为流动相，流速为1 m l／m in，检测波长为280 nm。方法学考察的结果表明，本方法操作简单，结果准确，重复性好，空白无干扰，可作为气管炎颗粒质量标准中含量测定的方法。

［1］ 国家药典委员会．中华人民共和国药典2010年版二部［S］．北京：中国医药科技出版社，2010：282-283．

［2］ 于天杰，张玲昂．HPLC法测定退烧颗粒中黄芩苷的含量［J］．中国药师，2010，13（1）：143-144．

［3］ 沈雪梅，何 伟，李 勇．RP-HPLC法测定清热和胃颗粒中黄芩苷的含量［J］．广东药学院学报，2006，22（3）：268-169．

Determ ination of the content of baicalin in Qiguanyan granules by HPLC

LIU Binguo，ZHANG Xinping（No．254 Hospital of PLA，Tianjin 300142，China）

ObjectiveTo establish amethod of HPLC for the determination of baicalin in Qiguanyan granules．MethodsHPLC was performed on ZORBAX SB-C18（4．6 mm×150 mm，5μm）column w ith mobile phase consisted ofmethanol-0.1% phosphoric acid（47∶53）at ambient temperature．The flow rate was 1．0 m l／min．The detection wavelength was 280 nm．ResultsBaicalin showed a good linearity in the range of 6．63-210μg／m l（r＝0.999 8，n＝6），and the average recovery was 98.16%（RSD＝1.89%）．ConclusionThismethods was simple，accurate，sensitive，reproducible and reliable，which was suitable for the content control of Qiguanyan granules．

Qiguanyan granules；baicalin；HPLC

R927

A

1006-0111（2015）05-0451-02

10．3969／j．issn．1006-0111．2015．05．019

2014-07-04

2014-11-27

［本文编辑］ 顾文华

刘彬果，博士，主管药师．研究方向：药物分析学．Tel：13682066620；E-mail：lbg991227＠163．com