发掘与筛选食品中沙门氏菌分子检测靶点

高颖

摘要：目的：分析食品中沙门氏菌分子检测靶点的筛选与发掘。方法：利用BLAST技术对食品中的沙门氏菌属具有特异性的DNA片段进行选择，并对其进行随机选择，挑选其中的15个作为靶点，并用27对引物对该靶点的特异性、灵敏度加以评价，并从中选择出具有最佳检测性的引物。结果：经过对27对引物检测性的分析，发现其中检测性最好的是FS23，采用这一对引物对菌株进行PCR扩增，在44株沙门氏菌中能够扩增出492的特异性片段，而在其余非沙门氏菌株实验中无法扩增特异性片段，以此作为引物检测沙门氏菌的林敏性达到了11.9，对于细菌纯培养物的灵敏度达到了4.9。对被沙门氏菌污染的牛奶进行检测，当其菌落浓度在100时，只需要5h时的时间即可以检测出沙门氏菌。结论：利用引物FS23对沙门氏菌能够进行有效的检测，并且其具有较高的特异性和灵敏性，是目前应用比较广泛的检测靶点。

关键词：沙门氏菌 PCR技术 靶点 筛选 评价

中图分类号：TS207.7 文献标识码：A 文章编号：1672-5336（2015）02-0026-01

沙门氏菌是一类在自然界中存在数量较大的致病性细菌，根据国际上的统计，因食用被沙门氏菌造成食物中毒的情况非常多，占据了食物中毒中的首位。并且因沙门氏菌能够给人们带来两大类疾病，其中包括伤寒类疾病和急性胃肠道炎症等。一般情况下，在肉类食品、奶制品以及蛋制品中出现沙门氏菌污染的情况较多，而这些均是人们日常生活中食用较多的食品种类，因此，必须要加大对食品致病菌安全检测工作的力度，寻找更加敏感和准确的沙门氏菌检测剂。

1 材料及方法

1.1 实验材料

本次实验所采用的实验仪器主要包括DNA聚合酶、即用型DNA分子100bp，PCR擴增仪，紫外核酸和蛋白质分析仪、电泳仪等，实验材料为44株沙门氏菌和22株非沙门氏菌，其均是严格按照我国相关细菌培养标准培养出的菌株样品。

1.2 PCR技术的应用

首先对本次实验中的引物进行设计，利用现代计算机技术，从数据库中查找相关沙门氏菌和其它菌株的基因整体序列，将其进行对比，寻找沙门氏菌中具有特异性的DNA片段，然后再随机从中选出15个片段，利用Primer Permier5.0系统对引物进行设计。一共设计27对引物，将其标记为-。另外选择实际工作中被应用与检测沙门氏菌的其它引物进行对比。其次，利用PCR扩增仪进行相关反应，将体系设定为25，循环参数设定为94℃3min、94℃30s、60摄氏度30s、72℃30s，以此进行共35个循环实验，最后利用72℃的实验温度，进行10min的反应，然后将反应后的产物利用2%的琼脂糖凝胶电泳进行检测，并利用凝胶成像仪观察电泳效果。

1.3 引物特异性的评价方法

从44株沙门氏菌和22株非沙门氏菌中提取的DNA靶点进行实验，利用PCR扩增仪建立反应体系，并利用各组引物对靶点进行PCR的扩增，同时将对照引物进行反应，以此作为对照数据。

1.4 引物灵敏度的评价方法

在实验过程中，对特异性较好的引物进行灵敏度的检测实验，将其与纯细菌培养物进行反应，并以对照组引物进行对比。其具体方法为：从沙门氏菌的基因组中踢出去一定的基因组，并将其进行10倍的稀释，没进行1倍稀释剂提取5的样品进行PCR的扩增处理。而对于灵敏度的评价则是将纯沙门氏菌培养物进行为期6h的培养，然后同样进行10倍的稀释，并分别选择稀释6、7、8倍时的样品，将其提取稀释后的样品各5进行PCR扩增。

1.5 污染食品样本的检验方法

在本次实验中，选择的污染食品样本为含有沙门氏菌的牛奶饮品，共取10分牛奶饮品样品，每份样品剂量为25mL，将其分别接种不同量的沙门氏菌种，分别为0、5、10、20、100cfu，每种个两份，随后将其转移入缓冲蛋白胨中进行培养。培养的温度设定为37℃，并且在150r/min的离心状态下培养12h，期间每隔1h提取1mL的样品，将其中的DNA基因组提取出，进行PCR扩增处理。

2 结果

经过对27对引物检测性的分析，发现其中检测性最好的是FS23，采用这一对引物对菌株进行PCR扩增，在44株沙门氏菌中能够扩增出492的特异性片段，而在其余非沙门氏菌株实验中无法扩增特异性片段，以此作为引物检测沙门氏菌的林敏性达到了11.9，对于细菌纯培养物的灵敏度达到了4.9。对被沙门氏菌污染的牛奶进行检测，当其菌落浓度在100时，只需要5h时的时间即可以检测出沙门氏菌。

3 讨论

PCR技术是一种能够进行靶点检测和引物敏感性、特异性检测的重要技术，其在现代食品安全检测工作中的应用十分广泛。而对于引物来说，其能够被应用在PCR检测过程中，其最大的关键在于引物本身的特异性，因此在本次实验当中首先对相关引物进行了筛选，发现其中FS23的特异性最佳，并以其为中心进行了后续研究，了解了这种引物在对沙门氏菌检测上的特异性和灵敏性。

参考文献

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