影响杂交兰组培快繁各个阶段主要因素的研究

范俊强 张善信 郑贵朝

摘 要：该试验以3个杂交兰品种为试验对象，对影响杂交兰组培快繁各个阶段的主要因素进行了研究。结果表明：基因型是影响杂交兰组培快繁的主要因素，其次是激素组合。通过研究影响杂交兰组培快繁的因素，为杂交兰育种和规模化生产提供技术支持。

关键词：杂交兰;组培快繁;阶段;因素

中图分类号 S68文献标识码 A  文章编号 1007-7731（2015）13-28-02

杂交兰在我国是指大花蕙兰与国兰之间经过杂交培育出的兰花新品种[1]。它既具有大花蕙兰的花大、色艳、花期长的优点，又具有国兰的幽香、典雅和韵味，既满足欧美消费者的消费需求，又符合中国、日本、韩国等亚洲人的审美情趣;更重要的是，杂交兰克服了组培快繁和新品种选育等核心技术难题，能进行产业化生产，能够快速生产，满足市场需求。因此杂交兰自投入市场以来，受到欧、美及日本、韩国、中国等亚洲消费者的普遍青睐，形成量价齐升的态势，是市场前景非常广阔的一个新兴年宵花品种。

1 材料与方法

1.1 试验材料 杂交兰品种绿宝石、桃花、紫元素3个品种当年生新芽。

1.2 试验方法

1.2.1 外植体消毒 选择生长健壮、无病虫害的母株，控制浇水14d，将当年生新芽从母株基部小心切下，去除外层叶片，并将叶片从顶部切断，保留5cm左右长度。用饱和洗衣粉溶液浸泡30min左右，再剥去一层叶片，用流水清洗30min左右。将外植体拿到超净工作台上，用刀片将外植体截断从顶端截短至2cm左右，从基部将黑色部分切除。先放到70%酒精中浸泡5s，再转到含0.1%升汞溶液中浸泡5～10min，然后用无菌水清洗4～5次，用消毒刀剥去所有叶片，从基部将短缩茎切成1cm大小备用。

1.2.2 原球茎诱导 将消毒后的外植体正向插入原球茎诱导培养基中。原球茎诱导培养基为以MS为基本培养基，激素组合分别为①6-BA1.0mg/L+NAA0mg/L，②6-BA1.0mg/L+NAA0.2mg/L，③6-BA0mg/L+NAA0.2mg/L。先放在暗光下培养1～2d，然后转到光照下培养30～40d诱导原球茎，培养条件为光照强度40～60lx，光照时间16h。

1.2.3 原球茎增殖与分化 将原球茎转到继代培养基上继代增殖与分化，继代周期为40～50d。增殖分化以MS为基本培养基，激素组合分别为①6～BA2.0mg/L+NAA0mg/L，②6-BA2.0mg/L+NAA0.2mg/L，③6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L，④6-BA0mg/L+NAA0.1mg/L。先在暗光下放置1～2d，再转到光照下培养。培养条件同原球茎诱导。

1.2.4 生根 将长度4cm以上，生长健壮的单芽切下，转到生根培养基上诱导生根。生根培养基为1/2MS，附加①NAA0.5mg/L+IBA0.5mg/L，②NAA1.0mg/L+IBA1.0mg/L③NAA0.5mg/L+IBA0mg/L，活性炭2g/L，蔗糖20g/L，培养条件同上。

2 结果与分析

2.1 不同消毒时间对外植体灭菌效果的影响 外植体消毒后7d，在部分外植体表面和与培养基接触部分长出细菌，部分外植体表面白化、失绿，表明消毒过久，外植体死亡。统计各品种在不同消毒时间下的消毒成功率，如表1所示。随着消毒时间的增加，外植体污染率逐渐降低，但因消毒造成白化、死亡的外植体数量也在增加。对于此3个品种，消毒8min时，外植体消毒效果最佳。

表1 不同消毒时间对外植体灭菌效果的影响

[品种＼&消毒时间（min）＼&外植体数（个）＼&污染数（个）＼&成功

个数＼&消毒成功率（%）＼&红美人＼&5＼&13＼&6＼&7＼&53.85＼&＼&8＼&18＼&5＼&13＼&72.22＼&＼&10＼&16＼&3＼&11＼&68.75＼&绿宝石＼&5＼&15＼&7＼&8＼&53.33＼&＼&8＼&18＼&5＼&13＼&72.22＼&＼&10＼&20＼&3＼&14＼&70.00＼&桃花＼&5＼&12＼&4＼&8＼&66.67＼&＼&8＼&16＼&3＼&13＼&81.25＼&＼&10＼&17＼&3＼&12＼&70.59＼&]

2.2 不同培养基对杂交兰原球茎诱导的影响 外植体在原球茎诱导培养基上培养25d左右，陆续有外植体诱导出原球茎，其中在②号培养基上诱导率最高，3个品种中‘红美人原球茎诱导率最高，绿宝石次之，桃花诱导率最低。

图1不同培养基上杂交兰原球茎诱导率

2.3 不同激素水平对杂交兰原球茎增殖与分化的影响 原球茎诱导出来50d左右时，将原球茎切下，大的原球茎从中间切割成0.5cm直径的小块，转接到原球茎增殖与分化培养基上，结果如表2所示。3个品种在②、③两个培养基上增殖率最高，40～50d增殖率可达3.0左右;其中桃花增殖率最高，可达3.3，红美人增殖率次之，绿宝石增殖率最低。原球茎增殖、分化的过程中，有原球茎分化出芽，其中①号培养基上芽分化率最高，3个品种分化率均比较高，分化率可达90%以上（表2）。

表2 不同激素水平对杂交兰原球茎增殖与分化的影响

[品种＼&培养基＼&增殖倍数＼&分化率（%）＼&红美人＼&①＼&2.1＼&92.3＼&＼&②＼&2.7＼&91.8＼&＼&③＼&3.2＼&87.6＼&＼&④＼&1.5＼&12.5＼&绿宝石＼&①＼&2.5＼&94.2＼&＼&②＼&2.5＼&93.4＼&＼&③＼&2.4＼&84.5＼&＼&④＼&1.3＼&11.2＼&桃花＼&①＼&1.9＼&95.1＼&＼&②＼&3.2＼&94.7＼&＼&③＼&3.3＼&85.2＼&＼&④＼&1.4＼&13.7＼&]

2.4 不同培养基配方对杂交兰生根的影响 当芽生长到4～5cm长时，将芽从基部切下，转接到生根诱导培养基上诱导生根，结果如表3所示。绿宝石生根最容易，大约20d左右即有新根长出，30d左右时有根3条以上，根长超过3cm，如图2所示。其次是红美人，30d时大部分长出新根，50d左右新根数超过3条、根长可达3cm左右。桃花最难诱导生根，50d左右时，只有少部分芽发出新根，且只有1～2条根，长度仅1cm左右。

表3 不同培养基配方对杂交兰生根的影响

[品种＼&培养基＼&1个月根长（cm）＼&生根数（条）＼&生根率（%）＼&红美人＼&①＼&4.5＼&3.6＼&96.2＼&＼&②＼&4.3＼&4.2＼&100＼&＼&③＼&3.9＼&3.2＼&89.7＼&绿宝石＼&①＼&5.1＼&4.5＼&100＼&＼&②＼&5.3＼&5.6＼&100＼&＼&③＼&5.2＼&4.4＼&95.3＼&桃花＼&①＼&1.1＼&1.2＼&12.5＼&＼&②＼&0.7＼&1.2＼&13.3＼&＼&③＼&0.3＼&1.1＼&7.2＼&]

图2 红美人生根状况

3 结论与讨论

杂交兰作为大花蕙兰与国兰杂交后代，不同杂交兰品种的遗传特性有很大差异，其组培快繁的难易程度也有所不同，尤其表现在生根率上有较大差异。其中绿宝石和红美人品种很容易生根，这与秦丽凤，石贵玉[2]的结果相符，而‘桃花品种难以生根，这与黄康康等[3]所示品种难以生根结果相符。这可能与杂交兰品种的基因型有关，说明基因型是决定杂交兰品种组培快繁的关键因素。

从本试验3个品种来看，外植体最佳处理时间为8min，原球茎最佳诱导培养基为②号，最佳增殖培养基为②、③号，最佳分化培养基为③号，最佳生根培养基为②号。

参考文献

[1]陈心启，吉占和.中国兰花全书[M].北京：中国林业出版社，1998：18-69.

[2]秦丽凤，石贵玉.外源激素对杂交兰组培快繁的效应[J].南方农业学报，2013，44（9）：1435-1438.

[3]黄康康，李春楠，杨守雷.不同外源激素对杂交兰分株繁殖生根的影响[J].浙江农业科学，2013（7）：819-820.

（责编：张长青）