HPLC测定贵州不同产地八月瓜中齐墩果酸的含量

李香

【摘 要】 目的：建立HPLC测定贵州不同产地八月瓜中齐墩果酸含量的方法。方法：以70%乙醇90℃水浴回流1h，过滤，滤液挥干，加浓盐酸，70%乙醇回流4h。流动相：甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（87∶13∶0.04∶0.02）；检测波长210nm；流速为1.0ml/min；柱温为30℃。结果：齐墩果酸分离效果好，在0.0654～2.616μg（r=0.9999）呈良好线性关系。结论：不同产地八月瓜中齐墩果酸含量存在一定差异。

【关键词】 八月瓜；不同产地；齐墩果酸；HPLC

【中图分类号】R284.1 【文献标志码】 A 【文章编号】1007-8517（2015）09-0012-02

Abstract：[JP+3]Objective To establish the content of oleanolic acid in different places of Guizhou in August melon in the determination method of HPLC.Methods Using 70% ethanol，90℃ water bath reflux for 1h，the reflux for 1 times，filtering，adding concentrated hydrochloric acid，70% ethanol，refluxing for 4h，the mobile phase：methanol water acetic acid-three triethy lamine（87∶13∶0.04∶0.02）；the detection wavelength of 210nm；the flow rate was 1ml/min；column temperature was 30℃.Results Oleanolic acid separation effect is good，in the 0.0654～2.616μg（r=0.9999）showed a good linearrelationship.Conclusion There were significant differences among different areas in the content of oleanolic acid in August melon.

Keywords：Akebia trifoliate；different habitats；Oleanolic acid；HPLC

八月瓜為木通科植物木通Akebia trifoliate（Thunb.）Koidz的果实，又称木通子、八月扎、八月炸、预知子、腊瓜等，分布于我国南部、长江流域和西北地区。民间多用于治疗小便赤涩、淋浊水肿、胸中烦热、喉痹咽痛、遍身拘痛、妇女经闭、乳汁不通等疾病。八月瓜的主要化学成分为齐墩果酸类三萜、三萜皂甙，具有较强生物活性[1]。本实验采用HPLC法测定4个不同产地八月瓜中齐墩果酸含量，为不同产地八月瓜质量研究提供依据。

1 仪器与试药

1.1 仪器 LC-20AT/SPD-20A UV/vis Detector高效色谱仪（日本岛津）；Shim-pack VP-ODS色谱柱（150×4.6mm，5μm）；WS205电子天平（瑞士梅特公司）；DZG-6000电热恒温鼓风干燥箱（上海森信实验仪器有限公司）；HA-4恒温水浴锅（常州澳华仪器有限公司）。

1.2 试剂 甲醇为色谱纯；水为娃哈哈纯净水；其余试剂均为分析纯。

1.3 试药 齐墩果酸对照品（批号：110709-200505，购于中国药品生物制品检定所）；八月瓜药材采于贵州云顶、大定、云雾、都匀，由黔南民族医专魏学军老师鉴定为木通科木通属落叶木质藤本植物Akebia trifoliate（Thunb.）Koidz的果实。

2 方法与结果[2-5]

2.1 色谱条件 Shim-pack VP-ODS色谱柱（150mm×4.6mm，5μm）；流动相为甲醇-水-冰醋酸-三乙胺（87∶13∶0.04∶0.02）；检测波长210nm；流速为1.0ml/min；柱温为30 ℃。

2.2 对照品溶液制备 精密称量干燥至恒重的齐墩果酸对照品16.36mg，加入一定量甲醇定容至25ml，摇匀，配制得浓度为0.654mg/ml齐墩果酸对照品母液。

2.3 供试液的制备 取干燥到恒重并过四号筛的八月瓜粉末0.582g，加入6ml 70%乙醇，90℃水浴回流1h，回流1次，过滤，滤液挥干，加0.54ml浓盐酸，加5.44ml 70%乙醇，回流4h，挥干溶剂，用甲醇定容至25ml，备用。

2.4 方法学考察

2.4.1 标准曲线的制备 分别精密吸取0.2、0.4、0.8、1、2、4、8ml对照品母液用甲醇定容至10ml，摇匀，分别配成浓度0.01308、0.02616、0.05232、0.0654、0.1308、0.2616 、0.5232mg/ml的齐墩果酸对照品溶液。精密量取5μl，注入高效液相色谱仪，测定结果，以齐墩果酸对照品溶液的质量浓度X（mg/ml）为横坐标，峰面积值Y为纵坐标，得回归方程Y=2.3430×106X-6.8714×103，r=0.9999，线性范围为：0.0654 ～2.616 μg。结果表明齐墩果酸与峰面积值在线性范围内有良好的线性关系。

2.4.2 专属性实验 据“2.3”项制备供试液，分别精密量取5μl对照品溶液、供试液、色谱甲醇溶液注入高效液相色谱仪，结果表明，阴性样品在相应位置无干扰。结果见图1。

2.4.3 精密度试验 称取干燥至恒重药材粉末约0.5 g，依“2.3”项下制备供试液，精密吸取供试液5μl，注入高效液相色谱仪，重复进样6次，测定齐墩果酸峰面积，计算RSD=1.83%。结果表明仪器精密度良好。